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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱小丽 陈少莺 蔡羲 程晓霞 林锋强 陈仕龙 王劭 李兆龙
【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的单克隆抗体,建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光(IFA)快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原,用之免疫Babl/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,检测其生物学特性,应用制备的单克隆抗体建立MDRV IFA快速诊断方法。【结果】筛选到237-11,45-12和3-H3 3株特异性好并能稳定分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中45-12株单抗为IgM亚型,237-11和3-H3株单抗为IgG3亚型。45-12和3-H3 2株单抗具有ELISA特性,效价...
关键词：
番鸭呼肠孤病毒 单克隆抗体 间接免疫荧光
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
屈贵蜀 何晴 严梦涵 陆芍华 黄瑞玲 彭瑶顺 庄许诺 许丽惠 王全溪
为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)p10.8蛋白的单克隆抗体(mAb),利用原核表达系统表达p10.8蛋白,采用Ni-NTA亲和层析法对其进行纯化,选择BALB/c小鼠进行免疫.4免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,并以纯化的重组p10.8蛋白作为抗原包被,用间接ELISA法筛选到1株针对MDRV p10.8蛋白的能稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株,命名为H3-7B株.用Western blotting法进行检测,以H3-7B株上清为一抗,分别与原核、真核表达系统获得的重组p10.8蛋白反应,结果均呈阳性.用抗体亚类试剂盒进行抗体亚类测定,显示H3-7B株mAb亚型为IgG2a类.用MDRV、禽腺病毒、鸭坦步苏病毒3种病毒与H3-7B株mAb进行Western blotting鉴定反应,特异性反应结果表明,H3-7B株mAb与MDRV反应呈阳性,特异性较好.结论:本试验成功制备了抗MDRV p10.8蛋白的mAb.
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢志勤 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴
用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定。将ARVσ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过Western Blot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测。结果通过纯化的病毒含量...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张昭 朱四东 井晓欢 杨季芳 陈吉刚
锯缘青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus,SsRV)第9节段(S9)编码的p40蛋白可能为病毒的甲基转移酶(methyltransferase)。为了便于确认p40在病毒复制过程中扮演的角色,将S9片段的开放阅读框(ORF)克隆到原核表达载体pET28a(+),实现了在宿主表达菌E.coli BL21(DE3)中的高效表达,进而纯化了重组表达蛋白p40(rp40),并制备了抗SsRV p40蛋白的2株单克隆抗体(4B7、3E5)。经Western blot分析表明,2株单克隆抗体均可特异地识别rp40蛋白,以及识别SsRV病毒蛋白中分子量为46 ku和40 ku 2条...
[期刊] 水产学报
[作者]
曾伟伟 王庆 王英英 石存斌 吴淑勤
为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫...
关键词：
草鱼呼肠孤病毒 VP4蛋白 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈士友 陈溥言 蔡宝祥
利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10~(-3)～10~(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗原结构明显不同,提示利用 McAb 进行 ARVS 的分型具有很大潜力.在与两个国内毒株(广州分离株和 NAU-8902)分别发生特异性反应的4株 McAb 中,有3株是相同的,说明两者具有很近的亲缘关系.试验还发现,McAb D19株能被试验的所有毒株阻断,提示 D19株有希望成为检测 ARVS 的群特异性 McAb...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵丹丹 刁有祥 杨国平 陈浩 提金凤 张璐
【目的】制备鸭瘟病毒（ＤＰＶ）ｇＢ蛋白单克隆抗体，为建立ＤＰＶ快速诊断方法及进一步鉴定ＤＰＶ的抗原表位奠定基础。【方法】克隆ＤＰＶｇＢ基因，构建其表达载体并进行原核表达，纯化ＤＰＶ ｇＢ蛋白，以其作为抗原免疫８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，进行间接ＥＬＩＳＡ及亚克隆筛选，并对单抗亚类及抗原性进行鉴定。【结果】ＰｃＲ扩增出９１５ＢＰ的目的基因，成功连接于ＰＥＴ－２８Ａ载体，并转化大肠杆菌ＲｏＳＥＴＴＡ进行诱导表达，获得４株稳定分泌抗ＤＰＶ ｇＢ蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为Ａ８Ｄ７、Ｅ６ｃ３、Ｈ１１Ｆ８、Ｈ６Ｆ６，间接ＥＬＩＳＡ检测其腹水效价分别为１∶１０３、１．．．
关键词：
鸭瘟病毒 gB蛋白 单克隆抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
刘问 钱冬 吴建翔 邵健忠
罗氏沼虾肌肉白浊病(whitish muscle disease of Macrobrachium rosenbergii)是一种发生在罗氏沼虾苗种阶段的流行病,发病虾苗出现肌肉白浊、白斑或白尾症状,死亡率高达60%以上。作者所在实验室在确定其病原是罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV)的基础上,用MrNV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,得到12株能特异分泌抗MrNV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞。注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶10...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
车勇良 周伦江 王隆柏 魏宏 陈少莺 陈如敬 庄向生
【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-60和10-48,对其生物学特性进行鉴定,并将其作为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。【结果】8-60和10-48的染色体数平均为98～105对,间接ELISA检测其细胞培养上清液效价分别为1∶16和1∶32,小鼠腹水效价分别为1∶3×212和1∶3×213,抗体的免疫球蛋白亚型均为IgM。间接免疫荧光结...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
程晓霞 朱小丽 陈少莺 王劭 陈仕龙 林锋强 李兆龙
【目的】制备抗鸭副粘病毒(DPMV)的单克隆抗体,为鸭副粘病毒病免疫学诊断方法的建立奠定基础。【方法】采用差速和蔗糖不连续密度梯度离心法提纯DPMV,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞株SP2/0融合,采用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制(HI)试验等方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并测定其生物学特性。【结果】筛选到7株能稳定分泌抗DPMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为J28、F4、B3、E39、E41、A12和A30。这7株单克隆抗体都具有ELISA和1FA特性,其中J28和F4还具有HI和中和特性。免疫球蛋白亚类测定结果显示,J28和F4均为IgG1,其他5株均...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨国平 刁有祥 赵丹丹 陈浩 提金凤 张璐 张英 李川川
【目的】制备抗鸭坦布苏病毒（Ｄｕｃｋ Ｔｅｍｂｕｓｕ ｖｉｒｕｓ，ＤＴｍｕｖ）Ｎｓ５蛋白的单克隆抗体。【方法】将实验室保存的ＰｅＴ２８ａ－Ｎｓ５载体转化入ｒｏｓｅＴＴａ（Ｄｅ３）感受态细胞中进行诱导表达，利用纯化的鸭坦布苏病毒Ｎｓ５蛋白作为抗原免疫ｂａＬｂ／ｃ小鼠，应用淋巴瘤细胞杂交技术结合有限稀释法制备单抗，并对单抗的特异性、反应性及其抗原表位和亚类进行鉴定。【结果】筛选获得２株稳定分泌针对ＤＴｍｕｖ的Ｎｓ５蛋白单抗的杂交瘤细胞，分别命名为ａ４Ｄ１和ｂ４ｂ８。此２株杂交瘤细胞诱导ｂａＬｂ／ｃ小鼠的抗体效价均可达到１∶６４ ０００。间接ｅＬｉｓａ、ＷｅｓＴｅｒＮ ｂＬｏＴ和间接免疫荧光（ｉＦａ．．．
关键词：
鸭坦布苏病毒 NS5蛋白 单克隆抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
周小愿 张星朗 贾秋红 韩亚慧 高宏伟
制备抗大鲵虹彩病毒（ＣＧＳＩＶ）ＭＣＰ ＣＯＥ蛋白的单克隆抗体，并对其基本特性进行鉴定及开展初步应用。用纯化的重组ＣＧＳＩＶ ＭＣＰ ＣＯＥ蛋白免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，间接ＥＬＩＳＡ法检测阳性孔，经有限稀释法亚克隆，筛选单克隆杂交瘤细胞株。采用间接ＥＬＩＳＡ法、免疫印迹法和单克隆抗体亚型检测试剂盒等鉴定单抗的稳定性、特异性和亚型；采用腹水诱生法制备单抗腹水，饱和硫酸铵法纯化腹水单抗；间接ＥＬＩＳＡ法分别测定单抗杂交瘤细胞上清液和腹水单抗的效价；利用间接免疫荧光法观察ＣＧＳＩＶ的增殖。结果显示，细胞融合克隆率为９８．６８％，阳性率为２０．５２％，得到１株．．．
关键词：
大鲵 虹彩病毒 主要衣壳蛋白 单克隆抗体
[期刊] 林业科学
[作者]
朱光旦 林军 沈中建 钟江 陈昌洁
纯化的马尾松毛虫质型多角体病毒（ＤｐＣＰＶ）云南文山株的病毒粒子经ＳＤＳＰＡＧＥ分析，其结构蛋白有１２０ｋｄ、１１６ｋｄ、１１０ｋｄ、６６ｋｄ和３３ｋｄ５个组分，而它的多角体蛋白含３０ｋｄ和２８ｋｄ两个主要组分。以纯化的ＤｐＣＰＶ粒子为抗原制备了２Ｄ５、２Ｄ１０、３Ｄ４和６Ｂ３共４种单克隆抗体，并测定了它们的亚类。制得的单克隆抗体用于ＤｐＣＰＶ的ＥＬＩＳＡ检测。对ＤｐＣＰＶ在棉铃虫卵巢细胞系ＳＦＥＨＡ８２１２和ＳＦＥＨＡ８３１中增殖动态的检测结果表明，ＤｐＣＰＶ感染培养细胞具有释放病毒量小和呈现持续感染等特点。用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法在ＳＦＥＨＡ８３１细胞感染ＤｐＣＰＶ后第１８ｈ检...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王凤芝 温立斌 姚火春 何孔旺
为了筛选P1病毒VP1蛋白的特异性单抗,通过生物信息学软件预测其抗原表位,然后利用SEALTM方法制备针对不同抗原表位的单抗,再通过免疫组化试验和Western Blot对其中6株进行分析,筛选敏感性强、特异性好的单抗。结果显示,选取的6株单抗中有3株(mAb1、mAb6和mAb9)在免疫组化染色时呈阳性反应,有1株(mAb1)在Western Blot中表现强阳性。研究筛选出了P1 VP1蛋白的特异性单抗,为P1病毒的检测和疫苗研究奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈浙 宋革 周雪平 吴建祥
【目的】制备抗西瓜花叶病毒（Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，Ｗｍｖ）的特异性单克隆抗体，并以其为核心建立能快速有效地检测Ｗｍｖ的血清学方法，从而为中国田间西瓜花叶病毒病的诊断和检测、预测预警及科学防控体系的建立提供物质和技术支撑。【方法】用提纯的Ｗｍｖ病毒粒子免疫ＢａｌＢ／ｃ小鼠，经细胞融合和细胞培养、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术，获得能稳定分泌抗Ｗｍｖ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，将杂交瘤细胞注射入ＢａｌＢ／ｃ小鼠腹腔制备其单抗腹水，并以制备的单抗为核心建立能准确、特异、灵敏地检测田间植物中Ｗｍｖ的ａｃＰ－ｅｌｉｓａ、Ｄａｓ－ｅｌｉｓａ、Ｄｏｔ－ｅｌｉｓａ、ｔｉｓｓｕｅ Ｂ．．．
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