对分离自健康未断奶仔猪粪便的抗猪链球菌的戊糖乳杆菌LPL1-5所产细菌素进行提取、纯化,以及理化和生物学特性研究。戊糖乳杆菌LPL1-5所产细菌素经饱和度为80%的硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶树脂G-10层析和SP Sepharose Fast Flow阳离子树脂交换层析可得到纯化的细菌素,其比活力为1 732.16 AU/mg,纯度较发酵液提高了26.37倍;Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳及活性检测试验结果显示,3 313~5 856 u范围内存在1条活性蛋白带;纯化后细菌素特性分析发现,该细菌素具有良好的热稳定性、酸耐受性及溶解性,并基本确定其等电点为8.7;胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋...

研究了本组纯化的戊糖乳杆菌31-1菌株所产细菌素的理化和生物学特性及其对敏感菌株的抑菌作用,发现该细菌素在80℃热处理15 min后活性基本不变,121℃处理15 min仍保持一定活性;在pH 2~8范围内37℃处理4 h保持稳定,当pH≥9时活性逐渐降低。胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶均可使该细菌素完全失活;α-淀粉酶可使其部分失活;酸性蛋白酶、溶菌酶不能使其失活。该细菌素抑菌效果明显,在3~5h内可减少敏感菌细胞数102~103个。测定了其抑菌谱,该细菌素可抑制乳杆菌属、链球菌属、片球菌属中的大部分菌株,还可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、芽孢杆菌中的部分菌株。该细菌素...

探讨戊糖乳杆菌素(Pentocin)的生物防腐效果。在法兰克福香肠中分别添加50、500AU/kg的乳酸链球菌素(nisin)以及50、500AU/kg的Pentocin LPL1-5,共4种处理。处理后的样品与对照样品(不添加任何防腐剂)一起于4℃保藏100d,每隔7d取样,对样品微生物指标、理化指标和感官指标进行评价。结果表明:1)PentocinLPL1-5对乳酸菌、嗜冷菌、耐热芽孢杆菌和大肠菌群的生长有显著抑制作用,且Pentocin LPL1-5对微生物的抑制程度与其添加浓度具有正相关性;2)与相同效价的nisin相比,Pentocin LPL1-5具有更好的抑菌效果;3)Pento...

猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1产生一种溶血毒素 ,培养条件影响其产量。最佳培养条件为Todd Hewitt肉汤(pH 7 5 )中接种 V(种子液 )∶V(肉汤 ) =1∶10 0的种子液 ,37℃静置培养 12h。培养基中的胰蛋白胨对该溶血素的产生起决定性作用。该溶血素可被还原剂活化 ,被氧化剂和胆固醇及蛋白酶K抑制 ,亦被抗链球菌溶血素O阳性血清和抗猪链球菌 2型全菌阳性血清抑制。该溶血素在 - 2 0℃较稳定 ,在 4,2 5和 37℃下均易失活 ,但在还原剂作用下可恢复活性。猪红细胞对其最敏感 ,豚鼠、家兔、人、绵羊、牛、鸡及鲫等红细胞次之 ,小鼠红细胞对其最不敏感

对传统酸奶发酵剂菌种嗜热链球菌 (L N- 6 )和保加利亚乳杆菌 (L N- 8)的基础培养基和生长促进物质分别进行了研究。结果表明 ,无脂乳固体为 110 g/kg的脱脂乳作为基础培养基效果较好 ,L N- 6和 L N- 8的活菌数分别为 2 .8× 10 8和 1.9× 10 8m L- 1。生长促进物质番茄汁、猕猴桃汁、肝浸汁对 L N- 6有一定的抑制作用 ,蜜桔汁和酵母膏则有较明显的促进作用。对 L N- 8来说生长促进物质都有一定的促进作用

对１９９８年江苏分离的３株猪源链球菌进行了鉴定，其形态、染色均符合链球菌的特点，具α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测上述分离株，均不在其检测范围，即不属于链球菌兰氏分群的Ａ～Ｇ群。但它们凝集猪链球菌２型抗血清，人工接种兔有致病性。表明此次流行的猪败血症的病原不同于以往的Ｃ群链球菌，不是马腺疫链球菌兽疫亚种，而是属于Ｒ群的猪链球菌２型。

根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出...

【目的】研究分析猪链球菌4型(Streptococcus suis serotype 4,SS4)强毒株SH1510转录调控因子GalR基因的缺失对细菌生物学特性的影响,为进一步研究GalR对半乳糖代谢途径的调控及其致病机理提供理论依据。【方法】利用同源重组双交换的方法构建了SS4强毒株SH1510转录调控因子GalR基因缺失株SH1510ΔGalR,通过GalR基因内部扩增引物I1/I2进行缺失株初步筛选,进一步通过PCR和Western blotting鉴定缺失株SH1510ΔGalR。对亲本株SH1510和缺失株SH1510ΔGalR进行革兰氏染色以比较形态差异;配置基础培养基,分别加入葡萄糖、蔗糖、D-半乳糖后培养细菌,绘制细菌生长曲线,比较细菌对不同糖的利用率;将亲本株和缺失株的菌液浓度分别调整为2.5×109、5×10~8、1×10~8、2×10~7 CFU/mL,对BALB/c小鼠进行腹腔注射以观察小鼠致死率并使用Reed-Muench法计算菌株LD_(50)。将浓度为2×10~7 CFU/mL的亲本株和缺失株1﹕1等体积混合后腹腔注射BALB/c小鼠,24 h后取脑、脾、血在氯霉素抗性和无抗性THB平板上进行细菌计数,比较细菌在小鼠体内的定植能力;并以健康猪的全血模仿体内环境,将亲本株和缺失株分别加入含有SS4抗血清的健康猪全血中,37℃孵育2 h进行平板计数,比较细菌在全血中的存活能力。【结果】使用内部检测引物I1/I2做PCR,缺失株SH1510ΔGalR检测为阴性,进一步使用引物C1/C2、O1/C2、O2/C1、O1/O2鉴定缺失株SH1510ΔGalR,分别扩增出1 056、2 121、2 094、3 147 bp的片段,结果和预期相符。Western blotting鉴定结果表明亲本株SH1510可与粗制GalR多抗兔血清发生特异性结合,在37 kD处出现单一条带,但缺失株SH1510ΔGalR没有条带出现。PCR和Western blotting鉴定结果均表明缺失株SH1510ΔGalR已构建成功。亲本株和缺失株经革兰氏染色,光学显微镜下观察可见亲本株和缺失株均呈链状排列,长度相似,形态无显著差异。在葡萄糖和蔗糖作为唯一糖原的生长条件下,亲本株和缺失株的生长情况相仿,而当糖原为D-半乳糖时,缺失株的生长速率和OD_(600)值明显低于亲本株。另外,从最高OD_(600)值可以看出,猪链球菌SH1510对糖的利用率为葡萄糖>蔗糖>D-半乳糖。小鼠致病性试验中,亲本株和缺失株的LD_(50)分别为1×10~8 CFU和1.62×10~8 CFU,缺失株对小鼠的致病性下降了1.62倍。体内竞争感染试验结果显示,缺失株在小鼠的脑、脾、血液中的细菌分离数均远低于亲本株,差异极显著(P<0.01)。全血存活试验表示,亲本株的存活率为35.2%,缺失株的存活率为27.3%,缺失株SH1510ΔGalR比亲本株SH1510在全血中的存活率显著下降(P<0.05)。【结论】GalR基因可促进猪链球菌4型对半乳糖的利用,同时对SH1510的毒力有直接或间接的调控作用。

参照CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测了46株猪链球菌对8种抗生素的耐药性,采用PCR方法检测其大环内酯类耐药基因的分布情况,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析大环内酯类抗生素耐药株和敏感株的遗传差异性。试验结果显示:46株猪链球菌对四环素的耐药率达到100%,对头孢喹肟、红霉素、泰乐菌素、替米考星、阿奇霉素和氨苄西林的耐药率分别为43.48%、34.78%、26.09%、23.91%、15.22%和2.17%,所有猪链球菌对氟苯尼考表现为敏感或中介。46株猪链球菌中有34.78%(16/46)的菌株携带大环内酯类耐药基因,均表现出对大环内酯类抗生素耐药。其中12株携带ermB基因,菌株...

采用琼脂两倍稀释法和改良的双纸片法 ,测定了兽医临床分离的 4 0株猪链球菌对部分大环内酯类抗生素、克林霉素、林可霉素、青霉素的体外最小浓度及红霉素耐药菌的耐药表型。实验结果显示 ,猪链球菌对红霉素、罗红霉素、泰乐菌素及替米考星的耐药率分别达 72 5 % (2 9/ 4 0 )、 6 7 5 % (2 7/ 4 0 )、 72 5 % (2 9/ 4 0 )和 6 2 5 % (2 5 / 4 0 ) ,对林可霉素和克林霉素的耐药率高达 6 5 % (2 6 / 4 0 )和 6 2 5 % (2 5 / 4 0 ) ,对青霉素耐药率为 4 0 % (16 / 4 0 ) ;青霉素耐...

为了解我国规模化猪场链球菌和副猪嗜血杆菌的耐药情况,用纸片扩散法对临床分离的112株猪链球菌和92株副猪嗜血杆菌进行23种药物的敏感性试验。结果表明,猪链球菌对林可胺类、大环内酯类、硝基呋喃类药物的耐药率均在90%以上,对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、多西环素的耐药率在60%～90%之间,而对β-内酰胺类和氟喹诺酮类的耐药率相对较低。副猪嗜血杆菌对四环素耐药率最高(78.3%),对螺旋霉素、复方磺胺甲噁唑、克林霉素、阿米卡星、林可霉素、新霉素的耐药率在50%～70%之间,对头孢类和氟喹诺酮类耐药率相对较低。2种细菌对不同种类药物的敏感性各异,并且多重耐药性严重,主要耐药谱具有多样性。

从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.

【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白,以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品,应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系,并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结果】获得了分辨率及重复性良好的双向电泳(2-DE)图谱,且得到3个具有免疫反应性的蛋白质点,经质谱鉴定其归属于1个蛋白,即乳酸脱氢酶(LDH)。生物信息学预测表明,该蛋白分子质量为35 420ku,理论等电点为5.05,具有2个跨膜区,分别位于第10~28位和第110~129位,并根据预测分析结果成功模拟了蛋白质的三级结构。【结论】从猪链球菌WH07菌株中筛选并鉴定了1...

【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白，以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品，应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系，并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结果】获得了分辨率及重复性良好的双向电泳（2DE）图谱，且得到3个具有免疫反应性的蛋白质点，经质谱鉴定其归属于1个蛋白，即乳酸脱氢酶（LDH）。生物信息学预测表明，该蛋白分子质量为 35 420 ku，理论等电点为5.05，具有2个跨膜区，分别位于第10～28位和第110～129位，并根据预测分析结果成功模拟了蛋白质的三级结构。【结论】从猪链球菌WH07菌株中筛选并鉴定了...

为研究乳酸链球菌素产生菌Lactococcus lactis LN26在酸胁迫条件下的应激反应,本试验测定了在不同pH值梯度条件下,Lactococcus lactis LN26菌体浓度、胞内pH、H+-ATPase活性、胞内ATP浓度、细菌素产量。结果表明:随着酸度的增加Lactococcus lactis LN26生长受到明显抑制,在pH值3.0条件下,菌体浓度最低;酸胁迫增强了H+-ATPase活性,在pH值3.0处理时,H+-ATPase活性最高;酸胁迫对乳酸链球菌素的合成具有抑制作用。pH值为6.0时最适合乳酸链球菌素产生菌Lactococcus lactis LN26的生长以及乳酸...