基于生物信息学和实验预测,克隆了柑橘抗寒资源枳ptfGmi R168a成熟序列和前体序列,并预测了其靶基因.结果表明:ptfGmi R168a在植物中高度保守,靶基因是NAC(UCU2)和锌指结构基因(FEZ)家族同源基因;同时,构建了ptfGmi R168a前体的超表达载体并在烟草中进行遗传转化,得到了18个转基因系,为进一步鉴定ptfGmi R168a在低温胁迫应答中的调控作用奠定基础.

基于生物信息学和实验预测,克隆了柑橘抗寒资源枳ptf-miR168a成熟序列和前体序列,并预测了其靶基因。结果表明:ptf-miR168a在植物中高度保守,靶基因是NAC(UCU2)和锌指结构基因(FEZ)家族同源基因;同时,构建了ptf-miR168a前体的超表达载体并在烟草中进行遗传转化,得到了18个转基因系,为进一步鉴定ptf-miR168a在低温胁迫应答中的调控作用奠定基础。

基于生物信息学和实验预测，克隆了柑橘抗寒资源枳ｐｔｆ－ｍｉＲ１６８ａ成熟序列和前体序列，并预测了其靶基因。结果表明：ｐｔｆ－ｍｉＲ１６８ａ在植物中高度保守，靶基因是ＮａＣ（ＵＣＵ２）和锌指结构基因（ｆＥＺ）家族同源基因；同时，构建了ｐｔｆ－ｍｉＲ１６８ａ前体的超表达载体并在烟草中进行遗传转化，得到了１８个转基因系，为进一步鉴定ｐｔｆ－ｍｉＲ１６８ａ在低温胁迫应答中的调控作用奠定基础。

采用生物信息学和实验预测,克隆了柑橘砧木枳ptfGmi R168a成熟序列和前体序列,并预测了其靶基因,结果表明,ptfGmi R168a在植物中高度保守,靶基因是NAC(UCU2)和锌指结构基因(FEZ)家族同源基因;同时,构建了ptfGmi R168a前体的超表达载体并在烟草中进行遗传转化,得到了18个转基因系,可为进一步研究ptfGmi R168a在低温胁迫应答中的调控作用提供试材.

采用生物信息学和实验预测，克隆了柑橘砧木枳ｐｔｆＧｍｉ Ｒ１６８ａ成熟序列和前体序列，并预测了其靶基因，结果表明，ｐｔｆＧｍｉ Ｒ１６８ａ在植物中高度保守，靶基因是ＮａＣ（ＵＣＵ２）和锌指结构基因（ｆＥＺ）家族同源基因；同时，构建了ｐｔｆＧｍｉ Ｒ１６８ａ前体的超表达载体并在烟草中进行遗传转化，得到了１８个转基因系，可为进一步研究ｐｔｆＧｍｉ Ｒ１６８ａ在低温胁迫应答中的调控作用提供试材．

【目的】DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达载体并转入紫花苜蓿,以探究DELLA蛋白基因在紫花苜蓿赤霉素(GA)信号转导途径及胁迫条件下的作用机理。【方法】利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆得到MsGAI。利用生物信息学方法分析该基因的序列特征,使用MEGA7.0对MsGAI蛋白序列及同源序列进行多序列比对,构建同源物种间的系统发育树。利用实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿各组织GAI表达量以及在PEG、NaCl、GA、ABA和黑暗处理下,GAI的表达变化。同时对转基因GAI株系表达水平进行分析,选择表达量高、中、低株系(L5、L8、L11)分别进行PEG和NaCl处理,分析GAI的表达变化。以pBI121为基础载体,采用双酶切-连接的方法构建植物超表达载体35S:MsGAI-gus。将重组载体转入农杆菌GV3101菌株中,以紫花苜蓿叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织转化法转化紫花苜蓿,经PCR检测和GUS组织化学染色,得到转基因阳性苗。【结果】该基因序列包含有一个1 818 bp的开放阅读框,编码605个氨基酸。生物信息学分析结果显示,MsGAI蛋白具有GRAS家族的典型结构域和保守区,其中包含N端保守结构域DELLA和TVHYNP,C端保守结构域SAW。多序列比对及系统进化树分析表明,该序列与其他物种的DELLA蛋白序列相似度均高达80%以上,将其命名为MsGAI。该基因与蒺藜苜蓿GAI亲缘关系最近,其次与鹰嘴豆、红三叶等双子叶豆科植物亲缘关系较近,与大麦等单子叶植物较远。实时荧光定量PCR分析表明,MsGAI在紫花苜蓿各组织中均有表达,根中的表达量最高。经PEG、NaCl、GA以及ABA处理后,均有明显响应;黑暗处理显著抑制MsGAI的表达。转基因株系经PEG、NaCl处理后,GAI表达量均上调。对构建完善的35S:MsGAI-gus植物超表达载体进行双酶切检测,琼脂糖凝胶电泳显示,条带大小与预期一致。对转基因植株进行GUS组织染色验证,结果表明,阳性植株呈现蓝色,对照组为白色。对超表达载体携带的MsGAI和GUS序列进行PCR检测均呈阳性。【结论】紫花苜蓿DELLA蛋白基因的克隆和超表达载体构建成功,MsGAI对逆境胁迫有响应。

以野生大豆为材料,采用同源克隆方法和RT-PCR技术获得一个野生大豆糖原合成酶激酶类基因的全长cDNA(命名为GsGSK1)。该基因的ORF为1 233 bp,推断其编码410氨基酸的多肽。将此基因和与大豆糖原合成酶激酶基因的核苷酸序列比较发现二者有11个核苷酸SNP位点差异,其中,10个为同义突变,1个为非同义突变,同源性达到99.1%。通过构建重组植物表达载体pCAMBIA3300-GsGSK1,将该基因通过农杆菌介导法转入拟南芥,获得了T1抗性苗,为进一步鉴定GsGSK1的基因功能提供了试验基础。

采用RT-PCR法从水稻中成功克隆了1个水杨酸甲酯转移酶基因(OsSAMT1),构建了该基因的超表达载体,通过农杆菌介导法转化粳稻品种日本晴,获得10个转基因阳性植株.生物信息学分析结果表明,水稻基因组中共有12个OsSAMT1的同源基因,它们分别属于第6和第11号染色体上的2个基因族,而位于第2号染色体上的OsSAMT1基因与第6号染色体上的同源基因具有更高的相似性.

采用ＲＴ–ＰＣＲ方法，成功克隆到１个与水稻苗期耐热相关的基因ＰＦＰ，构建了该基因的超表达载体，通过基因枪法转化水稻品种中花１７，获得９个转基因阳性植株，与对照相比，Ｔ１代转基因植株的苗期耐热性明显增强。３３个代表性地方水稻品种的耐热表型与ＰＦＰ基因型的相关性分析结果表明，ＰＦＰ基因的基因型与品种的耐热表型存在显著的相关性。本研究中还分析了该基因在盐、４℃低温、ＰＥＧ和ＡＢＡ胁迫处理下的基因表达情况。

以黑龙江鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)、荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpiovar.wana-nensis)、荷包红鲤(Cyprinus carpiovar.wananensis)、柏氏鲤(Cyprinus pellegniniTchang)以及荷包红鲤抗寒品系和柏氏鲤的杂交F2的DNA样品为材料,用200个随机引物对其进行PCR扩增,获得了1个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记RAG20,并在F2代分离个体中得到验证。至此,本实验室共获得10个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记,更加证明抗寒性状是数量性状(QTL)受微...

为获得美国白蜡CBF基因的全长序列,根据不同物种CBF基因保守区域设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术进行试验。结果表明:其编码区为675bp,编码224个氨基酸。通过氨基酸序列同源比发现,美国白蜡CBF基因编码的氨基酸序列包含一个完整CBF蛋白的特征序列—AP2保守结构域,同时又存在单个氨基酸残基或基序的替换、插入和缺失;进化树分析表明:FaCBF与木本植物同处一个进化树分枝,其中,FaCBF基因与大叶钻天杨的CBF基因相似性最高;低温胁迫试验表明:FaCBF相对表达量随时间的延长而逐渐升高,在12h时,相对表达量达到最高,随后随时间的延长而逐渐降低。结果显示低温可以诱导FaCBF基...

利用滤纸吸附噬菌体-PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtPCP-like基因cDNA全长序列,测序表明克隆得到的该序列全长595bp,包含一个完整的开放阅读框,编码91个氨基酸;经BLAST分析发现,该基因包含与拟南芥花粉外被蛋白基因相似的序列,命名为PtPCP-like。采用RT-PCR技术检测PtPCP-like基因在各个组织部位的表达模式,结果显示在毛白杨的根和雄花芽中表达丰度最高,而在雌花芽部位表达丰度最低。并且构建35S∶∶PtPCP-like植物表达载体,采用农杆菌介导法将PtPCP-like基因导入烟草中,获得了一批阳性转化植株。采用qRT-PCR技术检测PtPCP...

为研究沙冬青脱水素的功能,根据沙冬青cDNA文库中脱水素基因序列设计特异引物,采用PCR技术扩增脱水素基因的DNA全长,并对其内部的一个碱基进行了定点突变,然后成功地将其连接到pCAMBIA3301载体中,用冻融法将该表达载体质粒导入根癌农杆菌菌株LBA4404中,通过农杆菌介导法,对糖用甜菜进行了遗传转化,获得了Km抗性的甜菜植株,生根后移栽到花盆中。

【目的】从野生型拟南芥中克隆抗寒基因ICE1,通过农杆菌介导法将ICE1基因转到烟草中,对其功能进行研究。【方法】以三叶一心期拟南芥幼苗为材料,提取其总RNA,通过RT-PCR扩增得到ICE1基因的完整开放阅读框序列;构建以抗除草剂Bar基因为筛选标记的植物表达载体pCAMBIA3301-ICE1,通过农杆菌介导法转入到烟草中,对阳性植株进行PCR检测和生理生化指标测定,并对ICE1基因在转基因烟草植株中的表达特征进行分析。【结果】成功克隆了拟南芥抗寒基因ICE1,其完整开放阅读框长1 485bp。系统进

【目的】了解白菜型冬油菜抗寒相关性状的遗传方式，为油菜抗寒性的遗传育种提供一定的理论依据。【方法】以６个抗寒性不同的白菜型冬油菜品种（系）为亲本材料，按照ＧｒｉｆｆｉｎＧⅠ配制完全双列杂交组合，将亲本和ｆ＿１种植后测定抗寒性相关的性状以获得试验数据。采用ＱＧＡＳｔＡｔｉｏｎ软件中的加性－显性遗传模型和ＭｉｎＱＵＥ（１）法，对白菜型冬油菜越冬率及１１个理化性状的遗传方差分量比率、遗传相关性、亲本加性效应、组合显性效应和遗传率以及杂种优势进行分析。【结果】越冬率、ＰｏＤ活性、ＳｏＤ活性、可溶性糖含量、相对电导率、叶绿素含量、蒸腾速率和气孔导度的遗传主要以加性效应为主，显性效应影响较小；ＣＡｔ活性、．．．