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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈涛 沈永林 何国声 徐梅倩 顾越星
用大片吸虫分泌排泄 (ES)抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经筛选和 3次克隆化培养后获得 2株分泌抗大片吸虫ES抗原单抗的杂交瘤细胞 (F5,F9)。经传代、冻存、复苏培养检测和染色体检查 ,证实其分泌单抗的性质稳定。通过间接ELISA试验证明 ,F5和F9单抗能与大片吸虫、肝片吸虫的ES抗原发生特异性反应 ,而不与它们的虫体抗原反应。SDS PAGE电泳和Western blot显示 ,F5McAb能与ES抗原的相对分子质量为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0的蛋白条带反应 ,而不与其可溶性虫体抗原反应。表明F5McAb有ES抗原特异性 ,是一...
关键词：
大片吸虫 分泌排泄抗原 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王建英 牛树理 蓝邹然
Ｈ－Ｙ抗原是存在于细胞膜的一种糖蛋白，属于次要组织相容性抗原，在哺乳动物中是雄性特异的基因表达产物［１］。Ｈ－Ｙ抗原的发现，引起了关于Ｈ－Ｙ抗原对精子选择和胚胎性别鉴定的广泛研究。无论是应用免疫技术分离Ｘ精子与Ｙ精子，还是进行胚胎的性别鉴定，都必须依...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴贤福 陈溥言 蔡宝祥
马立克氏病病毒(MDV)的分子生物学研究已有20多年的历史,新技术的应用为病毒的分类、疾病的诊断和防治提供了有效的手段。MDV 通过琼脂扩散试验可被分为 A、B、C 三种主要抗原。目前已证明 B 抗原既可引起宿主的体液免疫,又可引起宿主的细胞免疫,是一种重要的中和性抗原。本试验利用提纯的 MDV B 抗原基因的大肠杆菌表达产物制备单克隆抗体,试图为 MDV 亚型的区别和真核生物系统中 B 抗原表达的鉴定提供帮助。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨笑笑 杨兴淼 刘亚林 曹瑞兵
[目的]制备日本脑炎病毒prM蛋白的特异性单克隆抗体，对进一步了解prM的结构和功能、开发特异性检测方法以及JEV prM蛋白的功能研究奠定基础。[方法]将prM基因克隆至原核表达载体pET-32a，诱导表达并纯化prM重组蛋白，随后将其免疫小鼠，通过细胞融合和亚克隆得到分泌抗prM单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备腹水并进行效价测定，通过Western blot和IFA验证其特异性，并进行空斑中和试验测定其中和活性，利用原核表达多段截短体蛋白确定单克隆抗体抗原表位并进行保守性分析，将其初步应用于感染检测及亚细胞定位分析。[结果]经细胞融合和三次亚克隆后成功获得1株能稳定分泌抗prM单克隆抗体的细胞株，命名为4H6，所制备的腹水效价可达到1∶1638400，经鉴定该抗体重链属于IgG2b，轻链为κ型。Western blot以及IFA试验均证明该抗体具有良好的特异性。空斑减少中和试验显示4H6不具备中和活性。通过表达截短蛋白鉴定出4H6所识别的抗原表位位于30GENRCWVRAIDVGYMC45，结合生物信息学分析发现该表位位于prM蛋白表面且在JEV不同毒株之间高度保守，有利于抗原抗体的直接接触。并成功将4H6初步应用于JEV感染检测及prM蛋白亚细胞定位分析。[结论] 成功制备1种高效且特异性的JEV prM蛋白单克隆抗体，抗原表位识别区位于pr，为分析prM蛋白在病毒复制过程中的生物学功能以及与其他病毒蛋白（如E蛋白或宿主分子）之间的相互作用提供有效工具。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王雯 佟贺 杨兴淼 曹瑞兵
[目的]本研究旨在制备抗鹅星状病毒（goose astrovirus，GAstV）单克隆抗体，并鉴定其识别的抗原表位，为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定基础。[方法]通过原核表达系统表达并纯化GAstV-2 P2蛋白，将其做为免疫原免疫六周龄BALB/c雌鼠，利用杂交瘤技术，经过细胞筛选和亚克隆，获得3株能稳定分泌抗P2蛋白的单克隆抗体，利用Western Blot和间接免疫荧光（IFA）鉴定单抗特异性，用获得的单抗对阴阳性肾脏切片进行免疫组化检测，用间接ELISA测定单抗效价和亚型，同时构建P2蛋白的不同截短体来鉴定得到的单抗识别的抗原表位。[结果]本研究获得三株能稳定分泌抗P2蛋白抗体的杂交瘤细胞，命名为1B10、3C6、5B1。单抗效价分别为1:2048000、1:512000、1:256000，亚型鉴定结果显示，三株单抗的重链均为IgG2b，轻链均为Kappa型。Western Blot和IFA结果显示，三株单抗均可以特异性结合鹅星状病毒，免疫组化结果显示，5B1和3C6可以应用于免疫组化的检测。表位结果显示，1B10识别109TSTTSTGGLITELRN123，3C6识别206LTDPEEDDDPLS217，5B1识别96LNPELETAVLRV107。[结论]本研究成功制备识别不同抗原表位的三株单克隆抗体，为快速检测GAstV感染和研究P2蛋白的结构与功能奠定基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡骁飞 魏凤仙 李青梅 职爱民 王方雨 孙亚宁 柴书军 付晓鹤
通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 01...
关键词：
植酸酶 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡勤仁 曾振灵 杨桂香 陈杖榴 方炳虎
碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶3200和1∶6400。2C5和5D5均属IgG2a型抗体。单抗5D5间接竞争ELISA(Ci-ELISA)的工作浓度为1∶1000,ENFX的抑制曲线在0.13～10 000 ng·ml-1之间线性关系良好(r =-0.9782),检测限(LOD)为0....
关键词：
恩诺沙星 单克隆抗体 交叉反应
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
秦绍钊 何月秋 李旻 雷屈文 王光勇 丁元明
基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱春华 刘荭 刘晓东 杨金先 郑在予 林天龙
以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是IgG2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab2H1、M ab3A1、M ab4B5、M ab5E1和M ab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒,与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在105~106。IFA分析表明,8株单抗中仅M ab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对...
关键词：
中华鳖 虹彩病毒 单克隆抗体 抗原
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李晓 兰向莉 徐晓彬 杨延周 赵宝玉 靳亚平 王爱华 LU Ray
【目的】制备抗Luman募集因子N端(Luman-recruiting factor N terminal,LRF-N)蛋白的单克隆抗体。【方法】PCR扩增LRF-N端的194bp序列,构建LRF-N重组质粒pGEX-LRF-N,转染BL21(DE3)菌,诱导表达并纯化GST-LRF-N融合蛋白,以其作为抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫4次,每次间隔10d,第4次加强免疫3d后采取小鼠脾脏,分离脾细胞,与SP2/0细胞融合,用ELISA和Western blot进行阳性细胞株的筛选和鉴定,对获得的杂交瘤细胞的细胞核型、分泌稳定性以及所分泌的单克隆抗体进行鉴定。【结果】pGEX-LR...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张鸯 陶明亮 路保通 靳亚平
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单...
[期刊] 水产学报
[作者]
周小愿 张星朗 贾秋红 韩亚慧 高宏伟
制备抗大鲵虹彩病毒（ＣＧＳＩＶ）ＭＣＰ ＣＯＥ蛋白的单克隆抗体，并对其基本特性进行鉴定及开展初步应用。用纯化的重组ＣＧＳＩＶ ＭＣＰ ＣＯＥ蛋白免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，间接ＥＬＩＳＡ法检测阳性孔，经有限稀释法亚克隆，筛选单克隆杂交瘤细胞株。采用间接ＥＬＩＳＡ法、免疫印迹法和单克隆抗体亚型检测试剂盒等鉴定单抗的稳定性、特异性和亚型；采用腹水诱生法制备单抗腹水，饱和硫酸铵法纯化腹水单抗；间接ＥＬＩＳＡ法分别测定单抗杂交瘤细胞上清液和腹水单抗的效价；利用间接免疫荧光法观察ＣＧＳＩＶ的增殖。结果显示，细胞融合克隆率为９８．６８％，阳性率为２０．５２％，得到１株．．．
关键词：
大鲵 虹彩病毒 主要衣壳蛋白 单克隆抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
查智辉 施慧 许文军 谢建军 孙忠
用血卵涡鞭虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经常规融合、间接ELISA方法筛选,将所得阳性克隆再经3次亚克隆后,共获得3株针对血卵涡鞭虫的单克隆抗体(2B2、3G4、4G7),单克隆抗体亚类鉴定表明,三者为IgG类抗体。用筛选的杂交瘤细胞株制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为5.12×10-4和8.00×10-4。进一步利用单克隆抗体建立间接荧光抗体方法对单抗特异性进行鉴定,阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血淋巴则未被染色。用单克隆抗体和多克隆兔抗血清以羊抗鼠HRP-IgG为酶标抗体,建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法,该方法对血卵涡鞭虫阳性标本检测符合率为100%。...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘儒彪 胡骁飞 张改平 王慧 王方雨 刘璐 刘玺 邓瑞广 宋照军
为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星（Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ，Ｓａｒａ）单克隆抗体，采用碳二亚胺法合成Ｓａｒａ人工抗原，通过免疫ＢａｌＢ／ｃ小鼠，选择血清效价高且敏感性好的小鼠，采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合，筛选分泌抗Ｓａｒａ单克隆抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉＢｏｄｙ，ＭａＢ）的杂交瘤细胞株；采用体内诱生腹水法制备Ｓａｒａ ＭａＢ，通过间接ＥｌｉＳａ和间接竞争ＥｌｉＳａ对Ｓａｒａ ＭａＢ的免疫学特性进行鉴定。结果表明：小鼠经免疫原免疫后，小鼠多抗血清效价均达到１∶１２８ ０００。选择敏感性较好的２号小鼠进行细胞融合，经多次亚克隆后，筛选出１Ｇ３、３Ｈ３两株杂交瘤细胞株，其．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
朱晓真 王俊亚 贾钊 王梓璇 王邦杰 邹钧
Ⅱ型干扰素，也称干扰素-γ（IFN-γ），是参与辅助性T淋巴细胞1（Th1）免疫应答的关键细胞因子之一。研究表明，鱼类与哺乳类Ⅱ型干扰素同源，不同的是真骨鱼类（Teleost）有两种Ⅱ型干扰素，即IFN-γ和干扰素-γ相关因子（IFN-γrel）。迄今，对鱼类IFN-γ基因的表达规律和功能已有大量报道，而对IFN-γrel的研究尚不深入，产生IFN-γ和IFN-γrel的细胞来源不清楚，它们是否有功能差异也存在争议。为此，本研究构建原核表达质粒，在大肠杆菌DE3中表达草鱼（Ci）IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白。实验结果显示，重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白，而CiIFN-γrel蛋白则不可溶。通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白，免疫小鼠制备了单克隆抗体。通过Western Blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体，结果表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应，反之亦然，其中FITC标记的两株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析。此外，Western Blotting分析显示草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白。本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体，为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础。
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