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[期刊] 林业科学
[作者]
陈军 杜孟芳 尹新明 王学聘 卢孟柱
从拟谷盗虫尸中分离到一株对鞘翅目害虫光肩星天牛幼虫毒杀作用明显的Bt菌株Bt886。幼虫死亡率高达 6 0 % ,存活者生长明显受到抑制。经过晶体形态特征和杀虫谱分析 ,初步确认该菌株属于cry3类。比较cry3类基因的保守序列 ,利用一对cry3特异引物成功地从Bt886菌株中克隆到了一段基因片段并克隆至pGEM -T载体上。测序分析发现该片段与cry3Aa1基因具有很高的同源性 ,确定来自毒蛋白编码基因。Southern杂交分析表明该基因位于该菌株的质粒上。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷会霄 宋萍 张毅功 南宫自艳 王勤英
为了发掘新的Bt资源,从河北省不同果园中(板栗、葡萄、枣、梨)采集土样71份,利用醋酸钠-抗生素筛选法从中筛选出41株Bt菌株。采用通用引物进行PCR扩增鉴定基因型,结果表明,从这些菌株中发现6种不同的基因型cry1、cry7、cry8、cry19、cry26-28、cry32,还有2个菌株未鉴定出基因型。通过SDS-PAGE检测显示,大多数Bt菌株主要蛋白条带分子量约为130kDa。生物活性测定结果表明,XPZ-6、XPZ-8、XPZ-9、XPZ-39、XPZ-42菌株对小菜蛾、棉铃虫、玉米螟和美国白蛾具有高活性,其中XPZ-39菌株的杀虫活性最高,对4种鳞翅目害虫的杀虫活性均达到97%以上...
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋萍 郭丽伟 苏俊平 王勤英 王晖
对我室所保存的18株含cry7类基因的菌株进行晶体形状、生物活性和蛋白型基因型等进行分析。结果表明:这些菌株能产生菱形、小菱形和不规则形伴胞晶体,SDS-PAGE检测主要蛋白的分子量是130kDa,PCR扩增得到1300bp条带。对马铃薯瓢虫二龄幼虫的生物活性测定结果表明,菌株WZ-9具有很高的杀虫率,72h校正死亡率达到了93.1%;菌株WCG-10活性次之,72h校正死亡率达到44.8%,而其他菌株杀虫活性低或没有活性。对杀虫活性最高的WZ-9菌株扩增全长基因,得到cry7Ab3基因(GenBank Number:BI1015188)。
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴会贤 宋萍 王勤英 苏旭东
通过醋酸钠-抗生素筛选法从河北省土壤中筛选得到了苏云金芽孢杆菌新菌株CY1。镜检可观察到伴孢晶体呈小菱形。SDS-PAGE分析结果表明菌株CY1表达的晶体蛋白分子量为130 kDa。利用25对通用引物检测cry1,cry1I,cry7,cry2,cry3,cry4/cry10,cry5,cry6,cry7,cry8,cry9,cry11,cry13/14,cry16/17,cry18,cry19,cry21,cry22,cry24/25,cry26/28,cry27/29,cry30,cry32,cry34/35,cry40基因,仅从CY1菌株中检测出cry7基因,该cry7基因N末端的1 2...
关键词：
苏云金芽胞杆菌 CY1菌株 cry7基因
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李建洪 万秋英 王沫 姜锡权 喻子牛
为筛选对昆虫有高毒力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株 ,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株 K980 5和 K990 3,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种 ,形成典型的双金字塔型伴胞晶体 .两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生物活性 ,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒 .K980 5含有 cry Aa,cry Ab,cry C,cry D和 cry 基因 ,K990 3含有 cry Aa,cry Ab,cry Ac,cry E和 cry 基因
关键词：
苏云金芽胞杆菌 新菌株 cry基因
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘国勇 聂品
柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是一种世界范围的水产动物致病菌,是中国重要养殖鱼类草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鳜(Siniperca chuatsi)等烂鳃病的病原。本研究以1972年从患"烂鳃病"草鱼上分离的两株冻干柱状黄杆菌G4和G18菌株为研究对象,并将G4株再次分离纯化得纯化菌株,命名为G4R3。对草鱼鱼苗浸泡攻毒结果显示,G4R3的LD50至少比G18的高3个数量级,因此G4R3为"强毒株",G18为"弱毒株"。利用蛋白质组学方法分析柱状黄杆菌强毒株G4R3和弱毒株G18的胞外蛋白,经过双向电泳并结合图像分析,共发现了34个...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孟立花 李社增 郭庆港 马平 刘大群
枯草芽孢杆菌NCD-2菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有较强的抗生作用。通过对NCD-2菌株培养条件的研究,结果表明在30℃、培养液初始pH为7.0和培养时间为2 d条件下,利用NB培养基培养该菌株所得培养液抑菌活性优于其他培养基,其培养液经硫酸铵沉淀所得的蛋白粗提液经RNA酶处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后的抑菌活性与对照相比差异显著;蛋白粗提液经60℃处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经80,100,120℃处理后抑菌活性与对照相比差异显著,但经120℃处理30 min后仍有一部分抑菌活性,研究结果说明该菌株产生的抗菌物质存在性质上的差异。
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏旭东 马雯 马晓燕 王雪静 李英军 檀建新
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 分离 杀虫基因 鉴定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 王波 罗曦霞 喻凌 詹学明 喻子牛
对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清型中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗血清起交叉反应，其中有４株的Ｈ－抗血清也不与已知２７个标准菌株的Ｈ－抗原起交叉反应；另一菌株无Ｈ－抗原，但其伴孢晶体和芽孢不分离，并连成长链状。这５个菌株生化反应也与Ｈ－血清型１－２７的标准菌株不同...
关键词：
苏云金芽孢杆菌,血清学鉴定,毒力,土壤
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王清锋 喻子牛
利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换为ｃｒｙ３Ａ启动子，重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ｐＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株１Ｓ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７，获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明，克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达，表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒（幼虫死亡率６０％～７０％）。
[期刊] 湖南农业大学学报
[作者]
李建洪 万秋英 王沫 姜锡权 喻子牛
从韩国不同地区采集的 6 2 0个土壤样品中分离出 6 7株苏云金芽孢杆菌 ,分属于 1 0种不同的血清型 .毒力测定结果表明 ,在 6 7株分离株中 ,35 .82 %的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性 ,2 2 .39%的菌株对双翅目昆虫有毒 ,32 .84%的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性 ,8.95 %的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株 .其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型的双金字塔形伴孢晶体 ,对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴孢晶体 ,而对鳞翅目和双翅目都有毒的菌株产生双金字塔形或球形伴孢晶体 .用对 cry ,cry ,cry ,cry 和 cry 基因特异性引物...
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡晓婷 宋健 王容燕 杜立新 曹伟平 王金耀 冯书亮
为了发掘新的Bt资源,从3种不同土壤类型的样品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株。采用杀虫活性测定方法从中获得了13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况。结果显示,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这13株菌的伴孢晶体都含有分子量为130 kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的cry毒素基因奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆慧慧 林志强 谭万忠 罗华东 鲜菲 毕朝位 余洋 杨宇衡
【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯酚品红进行晶体染色,观察伴孢晶体形态。cry1—cry10杀虫基因的检测选用技术成熟的PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)法,即对某一类基因(如cry1、cry2…)保守区序列设计通用引物,并引入...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵铁梅 宋福平 李卓夫 张杰 姜声华 刘大群 黄大昉
通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌,其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌(Erwiniaherbicola)的抑菌活性,结果表明有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性较高。经鉴定,抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因,并从G03中克隆了zmaR全长基因,完成了序列测定。该基因编码区为1125bp,由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个,分子量为43.5kD,等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21,可正常表达43.5kD蛋白,并使宿主菌产...
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