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[期刊] 实验技术与管理
[作者]
范茁
介绍了急性分离成年大鼠心室肌细胞和窦房结细胞的方法。通过全细胞膜片钳实验技术分别检测了窦房结细胞的自发动作电位和心室肌细胞的诱发动作电位,比较了二者动作电位波形在形态上的差异,并通过计算比较了心室肌细胞和窦房结细胞动作电位时程和静息电位水平,分析了二者电生理特性差异形成的原因。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘霞 王常勇
为获得高纯度和高存活率的心肌细胞,探索心肌细胞大量培养的条件,并为进一步研究心肌细胞的细胞生物学特性奠定基础,同时为生理学和药理学研究提供细胞来源,试验采用胰蛋白酶顺序消化法及差速贴壁法,从1～2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,观测心肌细胞的形态、结构、搏动状态和反映心肌细胞代谢状况的生化参数。结果表明,分离所得的心肌细胞纯度高,培养第3天就开始自发搏动,后连接成片,进而同步收缩;心肌细胞的亚显微结构包括肌丝、Z线、线粒体和大量糖原颗粒,葡萄糖比消耗率为7.44nmol/(个·d),乳酸比产率为3.83nmol/(个·d),乳酸转化率为51%,细胞代谢非常旺盛,说明试验培养条件有利于心...
关键词：
心肌细胞 细胞分离 细胞培养 大鼠
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
闫志强 陈春林 付文贵 郑华 翟少钦
依据《兽药研究技术指导原则汇编》中"兽药急性毒性试验指导原则"和"兽药30天和90天喂养试验指导原则",研究中药女黄颗粒对小鼠的急性毒性和对大鼠的亚慢性毒性。药物组以16、4、1、0.5 g/kg的剂量一次性灌服女黄颗粒药液,观察7 d并记录小鼠的表现及死亡情况,测定女黄颗粒的半数致死量(LD_(50));以90 g/kg的剂量灌服女黄颗粒药液,观察14d并记录小鼠的反应及死亡情况,测定女黄颗粒的最大给药剂量;药物组以18、6、2 g/kg的剂量连续灌服女黄颗粒药液30 d,期间观察大鼠的临床表现和体质量变化,试验结束时检测其血液学、血液生化指标和组织病理学指标,确定其亚慢性毒性。结果表明:急性毒性试验中,女黄颗粒各剂量组均未发现小鼠死亡,无法测出女黄颗粒的LD_(50);最大给药量试验期间,小鼠临床表现正常,未发现死亡,女黄颗粒的最大给药量为90 g/kg;亚慢性毒性试验期间,大鼠精神状态良好,血液学、血液生化指标均在正常范围内,组织病理学检查未发现病变。可见,女黄颗粒毒性评价为实际无毒,临床用药安全性较高。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
潘少辉 胡玥 张姗姗 王静 李飞飞 高志敏 杨春荣 华进联
【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀梅 程帆 刘维 孙涛 薛秀恒 李培英 王菊花
【目的】比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)分离方法的分离效果,建立小鼠IECs的有效分离培养方法,获得小鼠IECs原代细胞,为后续研究做准备。【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法以及胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ联合消化法共4种方法分离小鼠IECs并培养,通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的IECs进行细胞特异性鉴定,比较4种方法的分离效果。【结果】组织块培养法所获IECs活力好,增殖能力强,但成纤维细胞污染较严重,细胞纯度低;胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ分离法获得的IECs数量少且细胞增殖能...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孔庆学 张涌
采用Ⅴ型胶原酶单次振荡消化法和低渗处理,及差速贴壁和免疫组化染色法,对大鼠睾丸支持细胞进行分离、纯化和鉴定。结果表明,该分离纯化方法对睾丸支持细胞损伤较小,获得的细胞活性较高,原代细胞存活率为85%,且无较大细胞团,接种后增殖迅速,并在第8天达到最高峰;细胞产率为6.5×105/g;绝大多数细胞呈F as-L阳性,细胞纯度可达95%;细胞核仁清楚,核仁周围可见着色较深的卫星核小体。
关键词：
未成年大鼠 睾丸支持细胞 分离纯化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李延清 刘霞
为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的表达。结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张朝莹 文兆海 张玥 李嫄 徐立新 陆明敏 宋小凯 李祥瑞 严若峰
[目的]旨在研究旋毛虫钙网蛋白（rTs-CRT）对宿主免疫系统的影响。[方法]用原核表达技术获得纯化旋毛虫钙网蛋白，并进行Western Blot验证；将rTs-CRT与小鼠巨噬细胞共孵育，检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响；将rTs-CRT与大鼠外周血单核细胞（PBMC）共孵育，检测该蛋白对大鼠PBMCs转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western Blot结果显示rTs-CRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别；rTs-CRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌，抑制小鼠巨噬细胞的凋亡；rTs-CRT下调大鼠PBMCs T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平，上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平；rTs-CRT上调大鼠PBMCs IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22等细胞因子的转录水平，下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应，抑制Th2和Tfh免疫，对宿主免疫调节作用复杂。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孟玲玲 班晓敏 张皓博 张海彬
［目的］本文旨在为制定烟曲霉震颤素Ｃ在饲料中的安全限量提供试验依据。［方法］本试验通过急性毒性和亚慢性毒性试验研究烟曲霉震颤素Ｃ对小鼠的一般毒性。采用改良寇氏法测定烟曲霉震颤素Ｃ对小鼠的经口急性毒性ＬＤ５０；经口灌胃法对小鼠连续给药９０ Ｄ，分别在７、３０、６０和９０ Ｄ称量体质量，对小鼠的行为、体质量、饮食状况进行观察并检测生理和生化指标。［结果］烟曲霉震颤素Ｃ对小鼠的ＬＤ５０为７１．３７ ｍｇ·ｋｇ－１，９５％可信限为６４．１３～７９．３８ ｍｇ·ｋｇ－１。死亡小鼠出现大脑不成形，肝脏质脆、肿大和胃肠膨胀等毒性反应，中剂量组毒性反应稍弱于高剂量组，低剂量组无明显毒性。［结论］烟曲霉震颤素Ｃ．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李勇 沈文正 杨春荣 窦忠英
为了探讨神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)在体外培养中的生物学特性,研究不同细胞因子对NSCs分化的影响,试验对大鼠胎儿神经干细胞进行了分离培养,并研究了10,50和100 ng/mL的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain derived neruotrophic factor,BDNF)和胶质源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对NSCs的定向诱导分化作用。结果表明,大鼠胎儿NSCs可在体外增殖并形成典型的神经球,指数增长期在传代后...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭志林 王新庄 张涌 王木 王轶敏 胡文举
采用大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)进行分离、传代培养,研究大鼠心肌细胞条件培养基对兔ESC分离培养效果的影响。结果显示,用SD大鼠心肌细胞条件培养基培养的兔ESC集落呈岛屿状生长,碱性磷酸酶染色呈强阳性,体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;常规冻存后再传代的兔ESC集落具有较为一致的生长特征,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;传至第5代的兔ESC集落核型正常率>75％。表明SD大鼠心肌细胞条件培养基可用于兔胚胎干细胞分离培养。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
阚飞 孙捷 田路旸 李超 徐明旭 房云 代陈胜 张克云
以中国药用昆虫白星花金龟(Protaetia brevitarsis)幼虫(蛴螬)为研究对象,通过匀浆、乙醇沉淀、Sevag法去除蛋白,得到蛴螬总多糖,其得率为57%。用苯酚硫酸法进行多糖浓度测定。经MTT法检测表明,终质量浓度为5和20μg.mL-1的总多糖对小鼠脾细胞的生长增殖率分别为48.8%和62.2%,对巨噬细胞生长增殖率分别为240%和516%。用DEAE-Sephadex A-25、LPLC-Sephadex G-75层析法分离纯化总多糖,得到5种蛴螬多糖,其中相对分子质量分别为42 000和26 000的2种蛴螬多糖对脾细胞生长增殖率较高,终质量浓度为5μg.mL-1的该2种多...
关键词：
蛴螬 多糖 免疫细胞增殖
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
林成招 马海田 邹思湘 陈伟华 王国杰
分离培养了SD大鼠的小肠上皮细胞, 用3H TdR掺入法分别检测了 0、0 1、1、10、100和 1 000ng·mL-1 2种大豆异黄酮 (大豆黄酮和染料木素) 对该细胞生长的影响, 并测定了细胞碱性磷酸酶活性的变化。同时, 利用翻转的离体小肠囊研究了 0、0 1、0 5、1和 5μg·mL-1大豆异黄酮对小肠葡萄糖与氨基酸吸收的影响, 并检测了小肠黏膜总ATP酶活性的变化。结果显示: 100ng·mL-1的大豆异黄酮 (大豆黄酮、染料木素 ) 能够提高该细胞3H TdR的掺入量和碱性磷酸酶的活性, 提示大豆异黄酮可能有促小肠细胞生长的活性; 0 1和 0 5ng·mL-1的大豆黄酮和...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王新 谭建华 索占伟 刘金玲 杜绍范 穆祥 韦旭斌
将大鼠肠粘膜微血管内皮细胞分为空白对照组、BSA对照组、LPS1组、LPS2组、LT 1组和LT 2组6个组,分别用维持培养液,含50μg/mL BSA、1或10μg/mL LPS、10或50μg/mL LT的培养液静置培养12 h,研究不同浓度LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞形态及NO分泌量的影响,并确定LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量。结果表明,LPS可使细胞长宽比增大,间隙变宽,而LT可使细胞肿大,排列紊乱;各浓度的LPS和LT均能引起肠粘膜微血管内皮细胞的NO分泌量升高,但1μg/mL LPS与50μg/mL LT的作用更明显;LPS和LT致大鼠肠粘膜微血...
关键词：
肠粘膜 微血管内皮细胞 LPS LT
[期刊] 水产学报
[作者]
周健恺 徐善良 邱成功 陈苹 方增冰 王腾飞
为探究Cu2+对银鲳幼鱼的致毒效应,采用静态毒性实验方法,开展了Cu2+对银鲳幼鱼的急性暴露实验,研究了不同浓度的Cu2+对银鲳幼鱼外周血细胞微核率、核异常率和肝脏抗氧化酶(SOD、CAT、GPX)活性变化的影响。结果表明:Cu2+对银鲳幼鱼48和96 h的LC50分别为0.860和0.770 mg/L,安全质量浓度为0.077 mg/L;Cu2+的浓度与银鲳幼鱼红细胞微核率及核异常率具有明显的剂量效应关系,在相同浓度Cu2+胁迫下,核异常率又普遍高于微核率;不同浓度Cu2+胁迫下银鲳幼鱼肝组织中的SOD、CAT、GPX活性均表现为低浓度被诱导而高浓度受抑制的规律,与Cu2+浓度呈抛物线型剂量...
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