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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
倪迎冬 吕锦芳 饶开晴 李玥 马昕源 王晋 陈杰 赵茹茜
为探讨瘦素(leptin)及其受体在禽类性成熟启动过程中的作用,试验采用120羽60日龄伊莎蛋母鸡,随机均分为2组,分别饲养于光照逐渐延长(以光/暗为8 h/16 h为起点每周增加0.5 h光照,简称长光照组)和恒定的短光照(光/暗为8 h/16 h,简称短光照组)条件下,记录体重变化与性成熟时间。长光照组和短光照组母鸡分别于136和151日龄时开产。在136日龄时,每组取10只鸡宰杀后取血液、脂肪和下丘脑组织,分别检测血清leptin水平、脂肪leptin mRNA与下丘脑leptin受体mRNA的表达。结果表明:136日龄时,长光照组和短光照组母鸡血清雌二醇(E2)和leptin水平均无显...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李小金 钱坤 刘林清 王重龙 周杰
【目的】筛选皖南花猪和大约克猪背最长肌组织差异表达基因。【方法】采集皖南花猪和大约克猪背最长肌（各３头），测定其肉质性状指标，并提取其ＲＮＡ，采用高通量转录组测序（ＲＮＡ－ｓｅｑ）技术进行测序，对所获序列进行ＧＯ和ＰＡｔｈｗＡｙ显著性富集分析。【结果】测序后皖南花猪３个样本得到的总序列数分别为６５ ５８４ １２６，６４ ３２７ ７３８和５９ ２４４ ５０２，其中有效序列达到９４．４％，９４．３％和９４．２％；大约克猪３个样本得到的总序列数分别为５７ ９６９ １３４，６８ ２５４ １６８和７２ ２９８ １４２，其中有效序列达到９３．８％，９３．７％和９３．８％。测序饱和度良好，证明测序数据真实可．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王桂华 唐彦君 李辉
为了探讨瘦蛋白受体(OBR)基因在肉鸡不同组织中的表达差异,采用半定量RT-PCR和Northern blot方法检测OBR基因在不同发育阶段的肉鸡高脂系公鸡多种组织中的表达情况。结果表明:OBR基因在所检测的8种组织中均有表达,且表达量存在差异,其中大脑、心脏中的表达量高,并显著高于其他组织(p<0.05),腿肌和胸肌中的表达量较低。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨杰 仲维功 王才林 柳青 王明波 Narayana M.Upadhyaya
利用RNA干扰原理可以对作物进行遗传改良。构建RNA干扰的发夹结构一般采用在引物两端加酶切位点方法,该方法涉及酶切位点多,步骤繁琐。本试验介绍一种直接利用PCR产物进行RNAi组成型表达载体构建的方法,该载体以潮霉素为筛选标记基因,适合水稻的遗传转化。
关键词：
RNA干扰 双元载体 PCR产物
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王越 张苏芳 徐瑶 方加兴 孔祥波 刘福 张真
[目的]探索细菌表达dsRNA介导的RNAi在美国白蛾中的可行性,为RNAi技术在美国白蛾等林业害虫上的应用提供依据。[方法]选择几丁质酶HcChi基因作为靶标,设计有效的干扰片段,构建到L4440干扰载体上,并转入HT115大肠杆菌菌株。IPTG诱导HT115表达HcChi的干扰片段,用菌液持续饲喂美国白蛾幼虫,观察幼虫生长情况,定量PCR检测HcChi的转录水平。[结果]构建了带有HcChi-L4440表达载体的HT115菌株,经IPTG诱导能够合成HcChi-dsRNA,浓缩菌液持续饲喂幼虫显著抑制HcChi的表达,相对表达量显著下降了76.7%～90.3%,幼虫生长发育迟缓,体重增长量与对照相比显著减小40.7%。[结论]成功构建HcChi RNA干扰载体,通过饲喂法在美国白蛾中获得RNAi效应。该体系首次在美国白蛾中建立,为该物种的基因功能研究和生物防治提供新思路。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
蒋婧 屈明好 孙晓燕 李杰 陈灿灿 李世勇 任航行
【目的】通过RNA-Seq技术筛选不同颜色山羊嘴唇色素代谢相关的候选基因，初步揭示山羊嘴唇黏膜颜色差异形成的分子机理，为动物黏膜色素代谢研究提供理论依据。【方法】以嘴唇等面部可视黏膜颜色存在差异的酉州乌羊（乌黑色）和板角山羊（粉色）为研究对象，采用Illumina Hiseq 2000测序平台对嘴唇黏膜组织进行转录组测序，所得序列经质控、组装后，以|log2(Fold Change)| > 1，qvalue< 0.05为标准筛选差异表达基因，并对差异表达基因进行功能注释和富集分析。【结果】利用RNA-Seq技术共筛选出249个基因差异表达，其中与粉色嘴唇黏膜组织相比，乌黑色嘴唇黏膜组织中上调基因有218个，下调基因有31个。23个差异表达基因被划分在9种TFs家族中，其中14个基因属于含有锌指结构域的转录因子家族。GO功能富集分析结果显示，差异表达基因主要参与离子转运相关生物学过程和分子功能。KEGG代谢通路富集结果显示，差异表达基因显著富集于催产素、钙、cGMP-PKG信号通路，以及肥厚性心肌病、心脏肌肉收缩等7个与肌肉组织功能相关的信号通路，其中钙和cGMP-PKG信号通路与色素代谢密切相关；此外，ASIP等12个基因富集到MAPK信号通路、cAMP信号通路、黑色素合成信号通路（Melanogenesis）等色素代谢核心通路中；CALML6、OXTR、ATP1A2、ATP1B4等4个差异表达基因同时富集到多条与色素代谢相关的通路。qRT-PCR结果与测序结果一致，表明测序结果可靠。【结论】初步确定ASIP基因为山羊嘴唇色素代谢的候选基因，CALML6、OXTR、ATP1A2、ATP1B4等4个基因参与了山羊嘴唇黏膜色素沉积过程，为研究山羊黏膜色素代谢的分子机制提供理论基础，也为探究人类黏膜异常着色的分子机制提供参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭睿 陈华枝 熊翠玲 郑燕珍 付中民 徐国钧 杜宇 王海朋 耿四海 周丁丁 刘思亚 陈大福
【目的】环状RNA(circular RNA,circRNA)在可变剪接、转录调控和来源基因的表达调控等方面具有重要功能。本研究旨在探究意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)工蜂中肠发育过程中circRNA的表达谱及其发育过程中的差异表达circRNA(differentially expressed circRNA,DEcircRNA),进而在转录组水平探究DEcircRNA在中肠发育中的作用。【方法】基于前期获得的意蜂7和10日龄工蜂中肠样品(Am7和Am10)的全转录组数据,利用find_circ软件从质控后的数据中预测circRNA。采用RPM算法归一化处理得到circ RNA的表达量。利用DEGseq软件对circ RNA进行差异分析,按照差异倍数(fold change)≥2、P
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李蕾蕾 孙丰坤 李晓一 詹亚光 曾凡锁
糖基转移酶基因是生物分子糖基化中的关键基因,已有研究表明少数糖基转移酶14(Glycosyltransferase14,GT14)家族基因在植物细胞壁合成及对逆境的响应中发挥重要的生物学功能,然而GT14基因对逆境的响应机制目前仍不清楚。为了研究糖基转移酶基因的生物学功能,本实验室在克隆了白桦Bp GT14基因(JQ409354)编码区序列全长的基础上,利用Bam HⅠ单酶切的方法构建了白桦Bp GT14基因的p BI121植物表达载体,并利用一步PCR之后在同一体系中同时酶切-连接的方法,构建了Bp GT14基因RNA干扰载体,相比于传统的RNA干扰载体构建方法更为高效快捷。测序结果表明,植...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
樊瑾瑛 应琼琼 党亮 奚耕思
【目的】对拟黑多刺蚁（Ｐｏｌｙｒｈａｃｈｉｓ ｖｉｃｉｎａ ｒｏｇｅｒ）成虫热激蛋白９０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ ９０，ｈｓＰ９０）基因进行ｒｎａ干扰（ｒｎａｉ），为分析ｈｓＰ９０基因的功能及将ｒｎａｉ技术用于害虫防治提供参考。【方法】采用ｔｒｉｚｏｌ法提取拟黑多刺蚁总ｒｎａ，反转录合成ｃＤｎａ第一链用于ｈｓＰ９０基因的克隆。利用ｔ７ｒｉｂｏＭａＸｔＭ ｅＸＰｒｅｓｓ ｒｎａｉ ｓｙｓｔｅＭ将ｈｓＰ９０合成双链ｒｎａ（Ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎＤｅＤ ｒｎａ，Ｄｓｒｎａ），将其配制成１２０，６０，３０，１５和７．５ｎｇ／μｌ的溶液饲喂拟黑多刺蚁雌蚁、雄蚁和工蚁成虫进行ｒｎａｉ，共饲．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
樊瑾瑛 应琼琼 党亮 奚耕思
【目的】对拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)成虫热激蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)基因进行RNA干扰(RNAi),为分析hsp90基因的功能及将RNAi技术用于害虫防治提供参考。【方法】采用Trizol法提取拟黑多刺蚁总RNA,反转录合成cDNA第一链用于hsp90基因的克隆。利用T7RiboMAXTM Express RNAi System将hsp90合成双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),将其配制成120,60,30,15和7.5ng/μL的溶液饲喂拟黑多刺蚁雌蚁、雄蚁和工蚁成虫进行RNAi,共饲...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘红蕊 吴诚诚 单衍可 谢青云 邢刚 雷静 施志玉 孙海凤 刘斐
［目的］ＲＮＡ解螺旋酶Ａ（ＲＮＡ ｈｅｌｉｃＡｓｅ Ａ，ＲｈＡ）参与许多细胞生物学过程中，并能促进爱滋病病毒１型（ｈｉＶ－１）等一些病毒的复制，本试验旨在探究温度、ｐ ｈ值对ＲｈＡ的动力学影响。［方法］利用ｐｃＲ扩增全长ＲｈＡ基因，构建重组载体ｐ ｅＴ－２８Ａ－ＲｈＡ和ｐ ｃｏｌｄ－Ⅰ－ＲｈＡ，分别转化至Ｂｌ２１ ｓＴＡＲ（ｄｅ３）和Ｂｌ２１、ＲｏｓｅＴＴＡ２菌株中，加ｉｐＴＧ分别在２８℃和１５℃中诱导表达。将全长ＲｈＡ基因重组到ｐ ＦＡｓＴ ＢＡｃ ｄｕＡｌ载体中，然后将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的ｄｈ１０ＢＡｃ感受态细胞中，通过转座作用，将ＲｈＡ基因整合到杆状病毒基因组中。提取重．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刁勇 廖小芳 郑杰 孔祥军 陈鹏 赵艳红 周瑞阳
以红麻细胞质线粒体近等基因系ＵＧ９３Ａ（不育系）、ＵＧ９３Ｂ（保持系）及ＵＧ９３Ａ×福红９９２（恢复系）的Ｆ１代为材料，研究花药线粒体基因ＮＡＤ３和ＣＯＢ的转录与表达。结果发现，在３种供试材料中，基因ＮＡＤ３的ＣＤＳ区在ＤＮＡ水平和ＲＮＡ编辑水平上均无差异；不育系与保持系的ＣＯＢ基因ＤＮＡ编码序列无差异，但在ＲＮＡ水平上发生了编辑，８个位点的编辑均发生于密码子的第一或第二位碱基，且导致氨基酸种类变化，主要为亲水性氨基酸转变为疏水性氨基酸；ＣＯＢ基因在ＵＧ９３Ａ中的ＲＮＡ编辑频率低于ＵＧ９３Ｂ；ＮＡＤ３和ＣＯＢ基因在３种材料中的转录本大小基本相同，但在表达水平上表现为不育系显著低于保持系和Ｆ１代．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
苏君艺 陆璇璇 朱维宁 张林生
【目的】利用基因枪将WZY2基因RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri导入"郑引1号"小麦,获得WZY2基因表达缺失型小麦,为深入分析WZY2基因功能奠定基础。【方法】以植物表达载体pAHC25为基础,构建含有反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri,利用基因枪将其转入"郑引1号"小麦幼胚愈伤组织中,经过筛选、PCR检测得到阳性植株。【结果】从转化的1 500个愈伤组织中获得27株再生植株。利用PCR对再生植株进行检测,获得阳性植株3株,转化率为0.2%。【结论】构建了WZY2基因的RNA干扰表达载体,成功地将WZY2基因RNA干扰表达载体导入"郑引1号"小麦,获得阳性植株...
关键词：
小麦 WZY2基因 RNA干扰 遗传转化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
操胜 杨增岐
以A型流感病毒NP基因为靶标,设计并合成了3对编码发夹状siRNA寡聚核苷酸。将合成的序列互补的寡聚核苷酸退火形成双链,克隆至pSilencer 1.0-U6载体中,并转化DH5a菌株,氨苄抗性筛选阳性菌落,扩大培养后,提取质粒进行酶切鉴定,并进行测序分析。结果显示,酶切后得到预期长度的DNA片段;插入序列插入的位置与设计完全一致,无碱基缺失或突变。表明A型流感病毒NP基因小干涉RNA表达载体构建成功。
关键词：
RNA干扰 流感病毒 NP基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
王双 杨瑞 白薇
为研究水稻WRKY蛋白在应对各种生物以及非生物胁迫中发挥的作用,探明OsWRKY76是否参与调控水稻系统获得抗性,明确OsWRKY在植物抗病及耐逆反应过程中的作用机理,对OsWRKY76进行了氨基酸序列分析,发现OsWRKY76具有典型的WRKY结构域,属于WRKY-GCM1锌指WRKY超家族。克隆了OsWRKY76中300 bp的cDNA片段OsWRKY76-300,并扩增GUS基因中500 bp的片段作为连接物,通过片段末端人为增加的酶切位点将上述片段与Gateway系统的入门载体pENTR L16连接,形成中间由GUS 500连接、两端是OsWRKY76-300反向重复的发夹结构的载体,利用LR反应将dsWRKY76 pENTR L16中发夹结构的插入片段分别重组到诱导型双元载体GVG-TA7002和组成型双元载体Ubi-C1300中,获得RNA干扰载体。利用农杆菌介导的转化方法将诱导型双元表达载体转化水稻,获得7个转化株系。利用实时定量RT-qPCR检测转化株系中OsWRKY76的表达量,获得了2个沉默株系。
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