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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
童娜 尹晓燕 李大鹏 汤蓉
将草鱼肾细胞(CIK)在28℃条件下培养24h后,分别置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露2h,测定不同温度处理组的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞周期的改变、细胞内多泛素化蛋白水平以及caspase-3和bcl-2的表达变化;置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露12h,测定不同温度处理组的细胞活力。试验结果表明,热应激引起细胞活力显著下降,导致CIK细胞的LDH漏出率显著上升,多泛素化蛋白表达量显著增加,bcl-2的表达量显著下调和caspase-3的表达量显著上调,G0/G1期细胞显著减少。急性热应激可能会引起CIK的细胞膜通透性和蛋白质表达量的变化,从而诱导细...
关键词：
急性热应激 草鱼肾细胞 细胞凋亡
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张成 赵菲 李煬 张勇 王驰 耿照玉
为研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对急性热应激肉鸡血清及器官抗氧化能力的影响,选取144羽10日龄淮南麻黄公鸡,随机分为3组:对照组(Ⅰ组)、急性热应激组(Ⅱ组)和急性热应激+EGCG组(Ⅲ组),每组6个重复,每个重复8羽。Ⅰ组和Ⅱ组饲喂基础饲粮,Ⅲ组饲喂在基础饲粮中添加400mg/kg EGCG的试验饲粮。至94日龄时,Ⅰ组环境温度维持为(22±1)℃,Ⅱ组和Ⅲ组升温至(33±1)℃,持续12h后,采集血清、脾脏、肝脏及空肠,用比色法检测抗氧化指标,并用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测肝脏核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因表达水平。结果表明:1)与Ⅰ组相比,Ⅱ组肉鸡脾脏指数,血清和脾脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,肝脏中T-SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及Nrf2、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、CAT、GSH-Px mRNA表达量显著降低(P<0.05),而空肠中丙二醛(MDA)含量,肝脏中MDA和蛋白羰基(PC)含量及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)mRNA表达量显著升高(P<0.05),而空肠和肝脏中MDA含量显著降低(P<0.05)。综上,饲粮中添加EGCG可提高急性热应激肉鸡的抗氧化能力,进而缓解急性热应激导致的氧化损伤,其机制可能与EGCG激活Nrf2信号通路关键抗氧化基因表达有关,为EGCG应用于肉鸡生产奠定了理论基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
常藕琴 霍礼霞 罗满林 石存斌 张德峰 潘厚军 任燕
分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红G (KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态,使用多功能酶标仪检测经MPA刺激的细胞活性,台盼蓝染色法和CCK-8检测细胞存活率。结果显示,获得的细胞大小均一,细胞核圆形或肾形,胞质有A、B型颗粒,表面有皱褶,具有中性粒细胞的形态特征;细胞纯度达(99.3±0.53)%,细胞活力达(97.70±0.76)%,在体外培养24h内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%;在PMA刺激下检测到细胞表达MPO、ROS、NO和NETs的量显著提高(P<0.05),与刺激时间呈正相关。结果证实,分离的细胞具有很好的活力,具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法,细胞具有很好的活力,可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。
关键词：
草鱼 中性粒细胞 分离 鉴定 活性检测
[期刊] 水产学报
[作者]
于灵芝 杨先乐 王翔凌 喻文娟 胡鲲
细胞色素P450s(CYPs)主要参与动物体内药物代谢。水产养殖中不合理的联合用药常会导致治疗失败,这通常与CYP活性的诱导有关。然而,关于鱼类CYP的诱导却知之甚少。为获得有关CYP诱导的信息,实验采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)的方法测定了草鱼肾细胞(CIK)中CYPs的特异性诱导剂对双氟沙星(DIF)的代谢作用及酶动学分析。对照组和β-萘黄酮(BNF)诱导组的酶动学方程分别为1/V=0.1375×1/[S]+0.003和1/V=0.0245×1/[S]+0.0013。DIF与经BNF处理的CIK共孵育后,其代谢量增加了1倍,酶动学参数Clint和Vmax值分别增加了7倍和2倍。BN...
[期刊] 水产学报
[作者]
周鑫 董云伟 王芳 董双林
为研究不同温度条件下草鱼热休克蛋白(hsp70和hsp90)的表达模式,了解草鱼对温度的耐受和适应机理,实验将在20℃下驯化的草鱼在7个实验温度(22,24,26,28,30,32和34℃)中热激3 h,然后20℃恢复2 h,取肝脏,肌肉和鳃测定hsp70和hsp90表达。结果表明,hsp70和hsp90表达量随着温度升高而上升,当温度达到34℃时,肌肉与鳃热休克蛋白基因表达量显著下降,草鱼耗氧率、热休克蛋白表达和死亡率之间的关系符合氧限制热耐受理论(OCLTT)。基于OCLTT理论,草鱼生理临界温度为28℃,当温度超过28℃,热休克蛋白表达所需能量主要由无氧代谢提供,进而导致体内氧自由基和变...
关键词：
草鱼 温度变化 hsp70 hsp90
[期刊] 水产学报
[作者]
秦真东 杨敏璇 卢志杰 施斐 李亚男 詹凡玢 万全元 李军 林蠡
为系统研究草鱼血红蛋白对草鱼肾细胞（Ctenopharyngodonidelluskidney CIK）细胞的损伤机制，实验探究了血红蛋白和血红素刺激CIK细胞后细胞的生长情况，结果显示，血红蛋白和血红素明显抑制了CIK细胞的正常生长。其次，检测了血红蛋白和血红素刺激对CIK细胞内铁代谢相关基因的表达情况，结果表明，血红蛋白和血红素的刺激不同程度的上调了铁代谢相关基因的表达。通过检测被血红蛋白和血红素刺激后的CIK细胞其细胞炎症和抗氧化酶相关基因的表达情况，结果表明，血红蛋白和血红素可以通过NF-κB途径激活下游炎症因子的表达，如促炎因子TNF-α，IL-1β和IL-6，抑炎因子IL-10以及趋化因子IL-4和IL-8等，也同时激活了超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）3种抗氧化酶基因的表达水平。为进一步检测血红蛋白对CIK细胞的毒性作用，实验也检测了血红蛋白刺激CIK细胞后，细胞内铁离子和ROS的变化情况，结果显示，血红蛋白的刺激显著增加了细胞内铁离子和ROS的含量。最后，实验检测了CIK细胞受血红蛋白和血红素刺激后，胞凋亡相关基因的表达情况，结果显示，血红蛋白和血红素都在不同程度上显著激活了CIK细胞凋亡相关基因的表达水平。总之，本研究结果表明，高氧化活性的血红蛋白可以激活细胞内铁代谢和炎症因子相关基因的表达，同时增加细胞内铁离子和ROS水平导致CIK细胞凋亡基因的高表达。本研究结果将丰富鱼类血液免疫基础理论，同时也为水产健康养殖提供新的参考。
关键词：
草鱼 血红蛋白 氧化损伤 凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
付旭彬 孙培明 李玉保 王志亮 鲍恩东
将 30日龄AA肉鸡在 ( 4 0± 1)℃高温中分别持续 2、 3、 5和 10h ,定期剖杀 ,进行临床血液病理学、组织病理学和免疫组织化学检测。结果表明 :在热应激 2～ 5h内 ,受试鸡外周血液中肌酸激酶活性持续升高 (P
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘奇奇 温久福 区又君 李加儿 周慧
[期刊] 中国农业科学
[作者]
雷蕾 鲍恩东
【目的】探讨急性热应激条件下肉鸡组织的病理性损伤及其Hsp90含量变化的相关性。【方法】将100只1日龄AA肉鸡随机分成5组,每组20羽。正常环境温度下对受试鸡进行30d的适应性饲养后,除对照组外,将其余80只受试鸡的环境温度迅速由(25±1)℃上升至(40±1)℃,并分别持续进行2、3、5和10h的热应激处理。利用组织病理、免疫组织化学和酶联免疫吸附试验,检测急性热应激状态下受试肉鸡心脏、肝脏及肾脏组织的病理性损伤和Hsp90的定位与表达。【结果】在热应激开始的2～5h,受试鸡心脏、肝脏和肾脏组织的实质细胞损伤表现出随热应激时间的持续而逐渐加重的趋势,病理变化特征以颗粒变性和水泡变性为主。热...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张晓峰 刘迪 王淼 李垚
【目的】探讨热应激对猪睾丸细胞的氧化损伤。【方法】将猪睾丸细胞分为43℃1h组、43℃2h组、43℃1h+37℃6h组、43℃2h+37℃6h组、正常对照组及阳性对照组,采用光镜和电镜观察细胞及线粒体形态学变化,采用细胞活性氧检测试剂盒,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞内活性氧水平的变化。【结果】43℃处理1h后,细胞变圆,线粒体发生部分或广泛变性,43℃2h组和43℃2h+37℃6h组更为明显;43℃1h组细胞内活性氧水平未见明显升高(P>0.05),但43℃2h组细胞内活性氧水平显著高于43℃1h组(P<0.05)。上述2组细胞经43℃处理后37℃继续孵育6h,细胞内活性氧水平均明...
关键词：
热应激 睾丸细胞 活性氧 线粒体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈丹红 陈青青 田红艳 施华娟 刘文斌
本研究运用细胞生物学研究方法,探讨中草药提取物黄连素对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞(L8824)活力、氧化应激和细胞凋亡的影响。用不同浓度黄连素(0μmol/L、5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)分别处理体外培养的草鱼肝细胞Oh、6 h、12 h和24 h,采用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,黄连素浓度和时间对细胞活力有显著交互作用(P<0.05),且黄连素浓度对其活力影响差异显著(P<0.05),草鱼肝细胞活力随着黄连素的浓度增加先升高后降低(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
熊梅 Kommaly Onxayvieng 李大鹏 王海珊 梁骁 汤蓉 李莉 张曦 迟巍
泛素-蛋白酶体系统(theubiquitin-proteasomesystem,UPS)是细胞内调节蛋白质代谢的重要系统。在水温(17.0±0.5)℃下,将草鱼(Ctenopharyngodon idellus)暴露于100 kg/m2的养殖密度条件进行急性拥挤胁迫。在胁迫0 h、1 h、6 h、12 h、24 h和48 h以及取消胁迫后(养殖密度10 kg/m2)的6 h和168 h采集血清和背部肌肉样品,检测血清皮质醇水平、肌肉质构特性以及nrf2、hsp70和UPS相关基因表达,并定量测定了肌肉组织泛素化蛋白水平。结果表明,拥挤胁迫导致血清皮质醇含量显著上升,肌肉硬度和凝聚性显著性下降,以上各指标在取消胁迫后168 h恢复到对照水平,弹性、胶黏性、咀嚼性和回复性在恢复168h时反而高于对照组水平; hsp70和nrf2的表达量在胁迫48 h时显著高于对照组,后期恢复到对照水平;肌肉ub、psma2、psmc1、mafbx和chip的mRNA表达量在胁迫过程中显著性上升,胁迫后恢复168 h,还是表现出较高的表达量;处理组泛素化蛋白水平在胁迫6 h和12 h时显著升高,在恢复168 h时显著降低。研究表明,急性拥挤胁迫使草鱼产生明显的应激反应,对肌肉质构特性产生了显著性影响,同时提高了肌肉UPS的活性。经过168h的恢复,鱼体逐渐恢复到正常生理水平,但机体UPS活性仍呈现出被激活状态。急性拥挤胁迫对草鱼生理功能和肌肉质构特性的有害影响是可逆的,建议恢复时间大于168 h以帮助鱼体重新建立UPS的稳态。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郭国强 杨治国 张永耀 孙红飞
研究不同浓度亚硝酸盐(0.5、1.0、2.0mg/L)及不同处理时间(24、72、120、168、264 h)对草鱼(Cteno-pharyngodon idellus)红细胞渗透脆性的影响。结果表明:与对照组比较,实验各组草鱼红细胞脆性最小抵抗值、最大抵抗值极显著升高(P
[期刊] 水产学报
[作者]
秦真东 詹凡玢 李亚男 施斐 杨敏璇 卢志杰 李军 林蠡
为了探究鱼类体内过量游离血红蛋白对鱼体影响，本研究以草鱼为研究对象，通过体内注射血红蛋白模拟体内出血，探究血红蛋白对组织和组织中巨噬细胞的免疫调控作用。体内注射血红蛋白研究结果显示，血红蛋白的刺激导致头肾和中肾组织中明显的血红蛋白沉淀，同时提高了鱼体血清中的抗氧化相关酶活水平，促进了头肾组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-10的mRNA表达水平。普鲁士蓝和间接免疫荧光实验显示，头肾巨噬细胞对血红蛋白表现出了吞噬活性。荧光定量PCR检测结果显示，血红蛋白的刺激显著激活了头肾巨噬细胞中CD68、CD86、CSF和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平。进一步的细胞因子检测结果显示，血红蛋白刺激12 h后，头肾巨噬细胞中的炎症因子（TNF-α、IL-1β和IL-4）、趋化因子（CCL20和CCL4）、IFN-α和TLR4的mRNA表达水平被显著上调表达。综上所述，本研究结果表明草鱼头肾巨噬细胞对血红蛋白具有吞噬能力，同时血红蛋白也激活了巨噬细胞中多种细胞因子的表达水平。本研究结果首次阐述了草鱼血红蛋白与巨噬细胞的相互作用关系，丰富了鱼类血液基础免疫学理论，同时也为鱼类健康养殖提供新的参考。
关键词：
草鱼 血红蛋白 巨噬细胞 细胞因子
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
黄福勇 李明云 竺俊全 钱丽君 张春丹 陆孙杰
用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳法研究了镉对大弹涂鱼血细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)表达的影响。结果表明,在急性中毒条件下,和空白对照组相比,25、50和75mg/L三个处理组均有特异性酶带出现,各种酶活性也有显著变化。探讨了急性镉中毒对大弹涂鱼血细胞同工酶表达的影响,以及大弹涂鱼血细胞的同工酶标记用做海洋环境生态毒理学指标的可行性。
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