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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨玉艾 孙永科 华进联 窦忠英
为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李杰 赵金风 张爽 杜克久
为了筛选到具有木质部组织特异性并有较强功能的启动子,将河北林木种质资源与森林保护重点实验室前期已获得的MDCes A启动子、JCes AP启动子、DMDCes AP启动子(含2个串联MDCes AP启动子)融合GUS报告基因的p MDCes AP-GUS、p JCes AP-GUS、p DMDCes AP-GUS这3个植物表达载体,通过农杆菌介导转化杨树,对转化后的杨树进行GUS活性的定性及荧光定量检测,以比较3个启动子在转基因植物中的表达能力和水平。筛选到的组织特异启动子与抗天牛基因融合,将提高毒蛋白在相应部位的表达量,这对天牛类蛀干害虫的防治具有重大意义。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
付永平 周海涛 王丕武
【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89,对再生植株进行PCR、Southern blot检测和GUS组织化学分析。【结果】序列分析表明,7αP长度为1 382 bp,其中含有多种种子特异性启动子的序列元件,如RY重复序列元件、E-box、SEF1-motif、SEF4-motif(、CA)n、Dc3启动子结合因子和ACGT序列元...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
关淑艳 赵丽娜 王丕武 楚海娇 刘强 颜雪芬
【目的】从玉米幼根基因组DNA中克隆β-葡萄糖苷酶基因根部特异性启动子序列ZmGLU1P,并对其功能进行分析。【方法】利用PCR技术从玉米品种P138幼根基因组DNA中克隆玉米根部特异性启动子片段ZmGLU1P,将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pCAMBIA121-ZmGLU1P,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌介导法转化烟草NC89,对转化烟草植株进行PCR和Southern杂交检测。采集PCR和Southern杂交检测为阳性的转基因烟草的根、茎、叶,进行GUS活性的组织染色检测。【结果】克隆获得了ZmGLU1P片段,其长度为1 846 bp,与已报道的序列同源性达99%...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王玉霞 李唯 王旺田 栗孟飞 陈鑫
采用高盐低pH值法、分步离心法、SDS法、CTAB法、改良CTAB法提取毛粉802番茄幼苗基因组DNA,其中改良CTAB法提取的DNA效果最好,以此DNA为模板,用特异性引物进行PCR扩增,得到了预期大小的片段,将目的片段回收,克隆进pMD18-T Simple Vector载体,经PCR及酶切检测具有与目标片段长度相符的插入片段,构建的重组pMD18-E8载体经测序结果分析显示,番茄果实特异性E8启动子序列具有高度保守性,与GenBank上发表的E81.1启动子同源性为99.1%,说明成功获得了果实特异性E8启动子基因,为实现外源基因在转基因桃果实中特异性表达做准备。
关键词：
番茄 果实特异性E8启动子 基因克隆
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
卢碧霞 张改生 夏勉 马守才
为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻‘中花11’基因组DNA中克隆了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2 746 bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2%。将rbcS启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动子引导GUS基因的植物表达载体,经农杆菌介导法导入到水稻中。对转基因水稻植株中GU S活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片中的特异性表达,其表达水平高于C aMV 35S组成型启动子,而在转基因水稻植株根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织特异性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周国华
【目的】水稻柱头是水稻有性生殖的重要器官,柱头外露是决定异交结实的重要特性,是影响杂交水稻制种和不育亲本繁育的关键因素之一,开展水稻柱头外露特异表达启动子研究是探寻水稻杂种优势分子机理及进行分子育种的基础。【方法】对一个元江野生稻柱头外露特异表达基因的启动子p51048进行了克隆,分析了该启动子的序列结构特征及os51408的表达特性,通过构建该启动子的GUS融合表达载体,获得了转化体。【结果】组化染色分析表明,该启动子能在水稻花器官的柱头、花柱等区域特异表达,而在根、茎叶、颖花中无表达或低表达。【结论】
关键词：
水稻 柱头外露 启动子 克隆
[期刊] 西南农业学报
[作者]
司爱君 杨维才 谢宗铭 田琴 董永梅 李有忠 马盼盼
【目的】本研究旨在获得叶片特异表达启动子的全长并进行表达分析,为抗逆转基因育种提供重要顺式作用元件。【方法】通过基因芯片及RT-PCR筛选鉴定出1个高活性的棉花叶片特异性表达基因,通过电子克隆及PCR获得了该基因全长,并通过染色体步移法(Genome walking)经过3次步移成功获得翻译起始位点上游2kb左右的DNA片段,将其命名为叶片特异性表达启动子LSP(leaf specific promoter)。【结果】生物信息学分析表明,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box及多个顺势作用元件。通过构建该启动子驱动GUS的植物表达载体p Ghlsp∷GUS,并经农杆菌花絮侵染法转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色观察,结果显示该基因主要在叶片中特异性表达,而根部以及茎部几乎不表达。【结论】LSP是一个全新的叶片特异性表达启动子,为研究外源基因在棉花叶片中的定位表达奠定基础。基因工程中利用此类启动子可以在改良棉花性状的同时减少对棉花生理方面的副作用,在棉花抗逆转基因育种方面有广泛的应用前景。
关键词：
棉花 组织特异性 启动子 表达特性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宋阳 王丕武 张学明 曲静
【目的】克隆大豆豆荚特异性启动子,并对其进行功能分析,为研究抗病虫基因在大豆荚中的特异性表达奠定基础。【方法】利用PCR技术克隆得到豆荚特异性启动子(Pod Specific Promoter,PSP)的核心序列,用PSP序列取代质粒pBI121中的CaMV 35S启动子,构建与GUS基因融合的豆荚特异性报告载体pPSP-GUS,通过农杆菌介导法转化烟草"NC89",对转基因植株进行分子生物学检测,将鉴定为阳性的植株经GUS组织化学染色,验证PSP片段的功能。【结果】所获得的豆荚特异性启动子PSP大小为1 270bp,与已报道序列的同源性为98%,具有多种典型的启动子表达调控元件,如A/T-r...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏胜娟 昝林森 王洪宝 成功 季舒涵 王虹 付常振 姜碧杰
【目的】旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备。【方法】根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeⅠ线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacⅠ酶切鉴定。将经过PacⅠ线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度。【结果】经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邹芝英 王茂元 李大宇 杨弘
采用高保真PCR方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)基因组DNA中分离出β-actin基因启动子序列,将β-actin基因启动子插入pN1-EGFP构建成真核细胞表达载体pEGFP-β-actin,并通过脂质体转染法将重组载体导入人胚肾上皮细胞HEK 293T,荧光显微镜下观察外源基因EGFP在细胞中的表达情况。结果显示:β-actin基因启动子调控区具有典型的启动子特征,含有TATA Box、CArG和CCAAT Box 3个重要的顺式作用元件。荧光显微镜下观察到50%～60%的HEK 293T细胞中发出绿色荧光,显示尼罗罗非鱼β-actin基因启动子能够驱动EGF...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
付常振 昝林森 王虹 成功 王洪宝 李耀坤 姜碧杰 高建斌 杨宁
【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并...
关键词：
牛 SREBP1 shRNA 重组腺病毒
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程道军 唐林 孟勐 康丽霞 王永虎 彭健 马三垣 夏庆友
【目的】鉴定家蚕蛹期特异基因及其启动子,为家蚕变态发育人为调节及蛹生物反应器开发提供支撑。【方法】基于芯片表达数据分析及RT-PCR验证,筛选家蚕蛹期特异表达基因;利用PCR方法克隆家蚕蛹期特异表达基因上游的启动子序列,并利用转基因技术验证启动子的活性及时期特异性。【结果】筛选获得了在家蚕蛹期特异表达的表皮蛋白基因BmCP283;所克隆的BmCP283上游启动子区序列长2 004 bp,利用此序列所构建以红色荧光蛋白基因dsRed为报告基因的转基因蚕中,BmCP283启动子驱动的dsRed只在蛹后期表达,且主要表达于翅等组织中。【结论】BmCP283为家蚕蛹期特异表达基因,克隆获得的BmCP2...
关键词：
家蚕 蛹期 启动子 特异 转基因
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨梅 王睿 林拥军
以水稻中的１对双向转录基因（ＴＩＧＲ Ｌｏｃｕｓ：Ｌｏｃ＿ｏｓ０９Ｇ３９５４０和Ｌｏｃ＿ｏｓ０９Ｇ３９５５０）的翻译起始位点之间的序列作为研究对象，克隆其序列并进行功能鉴定。以明恢６３基因组ＤＮＡ为模板，采用ＰｃＲ法扩增该序列（命名为ＢＤＰ１），以正反两个方向插入启动子功能分析载体ＰＤＸ２１８１，分别命名为ＢＤＰ１１和ＢＤＰ１２；转基因阳性植株的Ｇｕｓ组织化学染色结果证明该启动子为胚乳特异型的双向启动子，两端的表达水平均很低。将启动子片段距离转录起始位点较短的一端向下游延伸１２３ＢＰ（命名为ＢＤＰ２），以正反两个方向插入启动子功能分析载体ＰＤＸ２１８１，分别命名为ＢＤＰ２１和ＢＤＰ２２；转基因．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱亚兰 姚伟 窦建华 乐超银 何正权 陈发菊 梁宏伟 梁薇
根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899 bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindⅢ和BamH I双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连...
关键词：
种子特异表达启动子 克隆 油菜
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