为掌握新疆某养殖场羊源沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药情况,并了解其携带部分相关耐药基因的流行现状及β-内酰胺酶、16SrRNA甲基化酶和喹诺酮类耐药基因(Plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)的共存情况。使用琼脂稀释法对分离的沙门氏菌进行药敏试验,通过PCR方法进行blaTEM、blaCMY-2、blaCTX-M、blaLAP-1、blaKPC、blaOXA、blaSHV等β-内酰胺酶和armA、rmtB等16SrRNA甲基化酶及qnrA、qnrB、qnrC、

【目的】探讨诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草和何首乌提取物对鸡白痢沙门氏菌的抑制效果。【方法】采用超声波处理、乙醇回流、水浴加热的方法,提取诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草、何首乌5味中药的有效成分,采用二倍试管稀释法分别测定各中药提取物对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌质量浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(Minimal bactericidal concentration,MBC),并采用肉汤稀释棋盘法,测定中药提取物对鸡白痢沙门氏菌的联合抑菌效果。【结果】诃子、虎杖、紫花地丁、夏枯草、何首乌提取物对鸡白痢沙门氏菌的MIC、MBC值分别为1...

为了解新疆乌鲁木齐市宠物源沙门氏菌耐药及耐药基因携带情况,对分离的39株宠物源沙门氏菌采用琼脂稀释法进行药敏试验,PCR方法进行PMQR因子、β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类基因、四环素类基因、酰胺醇类基因及多肽类基因检测。结果表明:乌鲁木齐市宠物源沙门氏菌对环丙沙星和阿莫西林的耐药率均高达97.4%(38/39),对诺氟沙星、恩诺沙星、氨苄西林、卡那霉素、四环素和氟苯尼考的耐药率均高达100%(39/39),对头孢噻呋、安普霉素、阿米卡星和庆大霉素100%敏感;耐药菌株以8耐为主,其主要耐药谱型为CIP-NOF-ENR-AMLAMP-KANA-TE-FFC;主要检出的β-内酰胺酶基因有blaTEM和blaOXA;主要检出的PMQR因子有qnrS、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr;主要检出的氨基糖苷类基因有aadA2和ant(3″)-Ia;主要检出的四环素类基因有tetB;主要检出的酰胺醇类基因有floR。耐药基因以blaTEM+blaOXA+qnrS+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+aadA2+ant(3″)-Ia+tetB+floR共存类型为主。因此临床治疗宠物疾病时应尽量少用人用药物特别是人用新药,多使用兽用敏感药物,避免人发病时无药可用事件的发生。

[目的]研究茶树精油对沙门氏菌的生长、碱性磷酸酶含量、胞外蛋白含量、电导率、生物膜形成、鞭毛动力等的影响,初步探讨其抑菌机理。[方法]分别检测茶树精油和多种抗生素对沙门氏菌最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及茶树精油对沙门氏菌最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)。检测不同质量浓度茶树精油对沙门氏菌生长曲线、碱性磷酸酶活性和胞外蛋白质量浓度、电导率、生物膜、鞭毛动力的影响。[结果]茶树精油对沙门氏菌的MIC和MBC均为10 540μg/mL。2 635,5 270,10 540μg/mL茶树精油对沙门氏菌的生长均有抑制作用,且随着茶树精油质量浓度的增加,其对沙门氏菌的抑制作用增强,沙门氏菌的碱性磷酸酶活性和胞外蛋白质量浓度增加,电导率增强,生物膜形成受到抑制,鞭毛动力下降。[结论]茶树精油通过影响沙门氏菌的生长、碱性磷酸酶活性和胞外蛋白质量浓度、电导率、生物膜形成、鞭毛动力而发挥抑菌作用。

【目的】通过筛选引起马流产的4种沙门氏菌（Salmonella）共同的优势抗原，建立一种敏感高、特异强的通用型间接ELISA(iELISA)抗体检测方法，实现对马群中沙门氏菌抗体的快速高通量检测。【方法】首先利用马流产沙门氏菌阳性血清、阴性血清分别与马流产沙门氏菌全菌抗原进行免疫共沉淀（pull down）试验，筛选出马流产沙门氏菌优势抗原；根据质谱分析结果找到优势抗原基因，将优势抗原基因与其他3种致马流产沙门氏菌病的鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、肠炎沙门氏菌进行序列比对验证其保守性；其次根据抗原性分析对优势抗原编码基因进行分段表达，设计3对引物，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增沙门氏菌优势抗原基因并将其分别克隆至原核表达载体pET28a；测序分析后将构建正确的重组质粒分别转化入大肠杆菌(Escherichia coli E.coli)Rosetta(DE3)中并加入0.6 mmol·L~(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖甘(Isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG）进行诱导表达，观察蛋白的表达形式；蛋白纯化后通过Western blot验证蛋白的反应原性和广谱性；然后利用纯化后蛋白作为包被抗原，通过对包被抗原量、血清和第二抗体浓度等条件进行优化建立马流产沙门氏菌病间接ELISA抗体诊断方法，并对该方法的特异性、敏感性进行评估。最后将该方法应用于试验感染马血清及临床样本的检测，并将检测结果同凝集试验结果比较。【结果】筛选出的马流产沙门氏菌优势抗原是ompA(Outer Membrane Protein, OMP)，通过序列比对，该蛋白氨基酸序列与同属鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、肠炎沙门氏菌同源性99.4%—100%，具有很好的保守性；PCR扩增后成功获得3条与预期符合的目的基因；成功构建了pET28a-ompA1、pET28a-ompA2、pET28a-ompA33个重组质粒。SDS-PAGE结果表明，在24℃、0.6 mmol·L~(-1) IPTG诱导5 h下，含有pET28a-ompA1、pET28a-ompA2、pET28a-ompA3的重组菌均表达了相应蛋白，其中重组ompA1和ompA2蛋白以包涵体形式表达，重组ompA3蛋白以可溶性形式表达；Western blot显示，重组蛋白ompA3可与马流产沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、肠炎沙门氏菌阳性血清发生特异性反应，证明重组ompA3蛋白具有良好的反应原性，可以作为沙门氏菌属抗血清检测用抗原；以ompA3蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法，在最大P/N比确定的最佳反应条件如下：最佳包被抗原浓度为1μg·mL~(-1)，待检血清（1﹕200）37℃作用1 h，酶标抗马二抗（1﹕10 000稀释），TMB在37℃孵育10 min，待检血清OD450>0.143判定为阳性，特异性试验结果显示，该包被抗原与常见马传染病阳性血清无交叉反应。通过对沙门氏菌静脉注射感染马的血清样品进行抗体检测，iELISA可以持续监测抗体阳性到116 d，相比微量凝集（69 d）多监测了47 d，因此iELISA具有更好的敏感性。利用建立的iELISA方法对8个不同牧场180份血清进行抗体检测，其抗体平均阳性检出率为63.3%，比微量凝集阳性检出率高53.9%。【结论】成功筛选到了马流产沙门氏菌病4种病原的共同优势抗原ompA，实现了对该蛋白的可溶性表达，建立了马流产沙门氏菌病通用型iELISA抗体诊断方法，该方法可以实现对临床样本马流产沙门氏菌抗体的检测，该方法具有特异性强、敏感性高，可以作为马流产沙门菌病抗体检测的一种有效工具。

【目的】克隆鸡白痢沙门氏菌侵袭蛋白A（invA）基因并进行原核表达，分析重组蛋白invA的抗原性，为沙门氏菌快速诊断试纸条和新型表位疫苗的研发提供理论依据。【方法】以鸡白痢沙门氏菌野毒株为供试菌，克隆其invA基因，对invA基因编码的蛋白进行生物信息学分析。将invA基因克隆到pET-30a原核表达载体上，构建原核重组表达质粒pET-30a-invA，将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析，检测其目的蛋白的表达情况和免疫反应特性。

本研究采用叶盘漂浮法测定了来自黑龙江省、吉林省、辽宁省、北京、山东省、江苏省、湖北省和广东省８个省份１３个黄瓜主产区的３６个黄瓜霜霉病菌株对甲霜灵的抗药性。结果表明，黄瓜霜霉菌对甲霜灵的ＥＣ＿（５０）值为１．３２７７～１７１．５４８０μｇ／ｍＬ，平均ＥＣ＿（５０）值为６４．６７８２μｇ／ｍＬ；３６株菌株中，有３个中抗菌株，占总菌株数的８．３％；３３个高抗菌株，占９１．７％，为优势群体，无敏感菌株和低抗菌株。各地区采集的黄瓜霜霉菌对甲霜灵抗性水平范围２８．２５～３６４９．９６倍，平均抗性水平为１３７６．１３倍；除黑龙江省齐齐哈尔检测到１株中抗菌株和辽宁省海城检测到２株中抗菌株外，其余菌株对甲霜灵．．．

为了解猪源致病性沙门氏菌的耐药状况,建立一种可以快速准确灵敏的确定沙门氏菌耐药表型的检测方法,以满足生产中的实时检测监控及用药指导的需求。所开发的检测方法基于竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification, CAMP)与微流控芯片于一体的检测技术,分别以β-内酰胺类耐药基因bla_(TEM-1),四环素类耐药基因tetB,氨基糖苷类耐药基因aadA1,这些基因的保守区域片段为靶序列,应用CAMP引物设计推荐规则,设计特异性CAMP引物,通过条件优化建立一种快速检测沙门氏菌耐药基因的方法,并且对该方法的特异性及灵敏度等方面进行了评估。结果表明:所开发的CAMP检测体系可有效检出沙门氏菌,并检测养殖场所实地采集的沙门氏菌不同菌株中bla_(TEM-1)、tetB、aadA1共3种耐药基因,检测结果与测序结果一致,显示出良好的特异性。并且应用本试验建立的CAMP检测方法,沙门氏菌invA基因检测灵敏度最低限为10拷贝,bla_(TEM-1)基因检测灵敏度最低限为102拷贝,aadA1基因检测灵敏度最低限为102拷贝,tetB基因检测灵敏度最低限为103拷贝。本研究所开发的CAMP检测体系,可快速有效地检测沙门氏菌耐药基因,检测体系可使用实时荧光定量PCR设备进行结果判读,也可以使用实验室水浴等温控设备进行基于颜色变化的裸眼结果判读,并可结合微流控芯片进一步提高反应体系密封性,显著减少了试剂用量,降低了对检测设备的需求,从而节约检测成本,将为养殖现场对沙门氏菌耐药状况的实时监测及用药参考提供便捷有力的技术手段。

小菜蛾抗药性的研究上海动植物检疫局王旭中国农业大学昆虫系高希武郑炳宗一、抗性发生状况小菜蛾是目前世界上抗性发生最为严重的十字花科蔬菜害虫，据估计每年防治小菜蛾的费用达１０亿美元。Ａｎｋｅｒｓｍｉｔ（１９５３）最早报道了小菜蛾在印度尼西亚爪哇岛对ＤＤＴ...

为研究凝结芽孢杆菌对感染肠炎沙门氏菌蛋鸡肠道形态、抗氧化能力及沙门氏菌定植的影响,将400只沙门氏菌阴性蛋鸡随机分成4组,每2组分在环境条件相同的2个安全隔离舍,每组设5次重复,每个重复20只鸡。对照组(I组和III组)饲喂基础饲粮,试验组(II组和IV组)在基础饲粮上添加2.5×1010cfu/kg凝结芽孢杆菌。饲喂1周后,试验组连续两天定量口服沙门氏菌菌液,对照组口服等量无菌PBS溶液,饲养3周。结果表明:1)日粮添加凝结芽孢杆菌极显著增加十二指肠绒毛宽度和绒毛吸收表面积(PBC <0.01),显著降低绒毛宽度(PSE<0.05),沙门氏菌可以显著增加血浆SOD和TAOC(PSE<0.05);添加凝结芽孢杆菌显著降低血浆中SOD和MDA的含量(PBC<0.05)。3)在攻毒后第1天、第14天和第21天,日粮添加凝结芽孢杆菌可显著降低盲肠沙门氏菌拷贝数(PBC<0.05)。综上,产蛋后期蛋鸡感染肠炎沙门氏菌后,日粮添加凝结芽孢杆菌可改善肠道形态,提升其抗氧化能力,降低盲肠沙门氏菌定植数量,缓解病源性感染应激,保证了蛋鸡机体健康。

本文参照GB/T13091-2002和GB4789.4-2010方法对1份骨粉样品进行沙门氏菌检测。结果表明:25 g样品中检出沙门氏菌,经血清分型确认为利卡沙门氏菌,该沙门氏菌血清型在四川省属首次检出。同时对样品受污染原因进行了研究,旨在为避免骨粉类产品受沙门氏菌污染提供意见与参考。

　用毒害艾美耳球虫杨凌株(YLn)感染14日龄雏鸡,检测毒害艾美耳球虫的致病性及其对4种常用抗球虫药的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性4个等级。结果表明,该虫株对雏鸡有很强的致病性,每羽鸡经口接种1×105个孢子化卵囊时,致死率达63.3%;该虫株对地克株利有完全抗药性,对马杜拉霉素有轻度抗药性,对氯羟吡啶和氯苯胍无抗药性。

[目的]探讨5种藏药、7味中药对藏猪源沙门氏菌的抑菌效果。[方法]采用煎煮法制备5种藏药(石榴健胃丸、仁青芒觉、十五味黑药丸、仁青常觉、仁青二十五味马宝丸等藏药方剂)、7味中药(石榴皮、诃子、炒白术、黄连、败酱草、红藤、薏苡仁)的水煎剂,再采用打孔法制备藏药及中药药敏片。采用药敏纸片法检测33株西藏藏猪源沙门氏菌对5种藏药、7味中药及6种常用抗菌药物的敏感性,并对黄连、仁青芒觉进行体内抑菌试验。[结果]33株藏猪源沙门氏菌对藏药仁青芒觉普遍表现为敏感(69.70%),对中药黄连普遍表现为敏感(69.70%),对氯霉素(100%)、链霉素(100%)、丁胺卡那(100%)、庆大霉素(100%)等4种常用抗菌药物均表现为敏感。体内抑菌试验表明:灌胃营养肉汤的对照组小鼠大多数死亡,致死率达到95.45%,说明攻毒液对小鼠均具有高致病性;仁青芒觉或中药黄连组小鼠死亡率明显降低,保护率均达90%以上。[结论]仁青芒觉和黄连对藏猪源沙门氏菌具有一定的抑制作用,氯霉素、链霉素、丁胺卡那、庆大霉素对藏猪源沙门氏菌敏感,且抗菌药物对藏猪源沙门氏菌的抑菌效果比仁青芒觉和黄连好,在抗生素耐药性泛滥的形势下,仁青芒觉和黄连是防治沙门氏菌病一个很不错的选择。

【目的】筛选仔猪痢疾病原菌沙门氏菌特异性噬菌体,为噬菌体制剂的研制和仔猪痢疾的生物防治提供参考。【方法】从患痢疾仔猪粪便中分离致病菌沙门氏菌,鉴定后以其为宿主菌,从生活污水中筛选、纯化出特异性噬菌体,并以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为对照,检测该噬菌体的特异性。【结果】分离到了致病菌沙门氏菌,并得到了纯化的沙门氏菌噬菌体;经检测,该噬菌体只能裂解沙门氏菌,而对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌没有作用。【结论】得到了纯化的可裂解沙门氏菌的特异性噬菌体。