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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李闯 彭志清 李寅琛 吴升山 林鹿 曾宪海
为实现酵母阳性转化子的高效筛选，亟需寻找一种快速、简便的菌落PCR方法用于酵母的分子遗传鉴定.以酿酒酵母为底盘微生物，转化重组质粒或染色体整合片段，挑选抗性筛选单菌落，采用不同预处理方法处理菌体以进行菌落PCR检测，并对结果进行分析.相比其他预处理方法，使用微波冻融法制备的模板进行菌落PCR检测，稳定性好、检测性能强，适用于短链DNA以及3 000 bp以上目的片段的扩增；同时，该方法可进行毕赤酵母阳性克隆的筛选.表明微波冻融法通用性较强，制备的模板适合不同遗传背景以及基因操作方式下酵母菌落PCR检测.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
江正强 齐金姗 邓红 区显聪 李里特
为从自然界中筛选出耐冷冻酵母菌 ,从土壤、谷物、果蔬、空气等不同来源筛选分离得到 6 0多株酵母菌 ,通过模拟面团预发酵进行耐冷冻酵母菌的初筛选 ,并通过普通面团预发酵进一步筛选 ,得到了 3株耐冷冻酵母菌 ,编号为 FTY2 8,FTY 31和 FTY 5 6。这 3株耐冷冻酵母菌冷冻 7d后存活率和相对发酵力均超过80 ,且海藻糖质量分数大大高于耐冷冻性较差的酵母菌 ,其质量分数最高达 16 .2。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王丽敏 李军 胡小松
利用酵母粉葡萄糖琼脂培养基对 15个批次苹果原料样本中的酵母菌进行分离 ,并用API 2 0CAUX菌种鉴定系统进行鉴定 ,得到的 2 5株酵母菌分别属于假丝酵母菌属、酿酒酵母菌属和克勒克酵母菌属的 6个种 :克柔 /平常假丝酵母菌 (Candidakrusei) 13株 ,酿酒酵母菌 (Saccharomycescerevisiae) 5株 ,克勒克酵母菌属酵母菌 (Kloeck eraspp .) 2株 ,木蓝假丝酵母菌 (C .magnoliae) 2株 ,热带假丝酵母菌 (C .tropicalis)和乳酒假丝酵母菌 (C .kefyr)各 1株 ,鉴定准确率均超过 95 % ,其中模...
关键词：
苹果 酵母菌 API菌种鉴定系统
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚廷山 周常勇 胡军华 冉春 李鸿筠 刘浩强 肖田
利用微波热震惊提取固体表面柑桔溃疡病基因组DNA并加以优化,所得到的基因组DNA可作为PCR反应的模板进行16SrDNA基因有效扩增。与柑桔溃疡病基因组DNA其他抽提方法相比较,微波法更适用于该病的快速检测,具有快速、简便、费用低廉等特点,且对设备的要求不高,用特异性引物XCF/XCR可实现柑桔溃疡病菌的快速鉴定。
关键词：
柑桔溃疡病 微波 基因组DNA抽提
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘英 吕文洲 郭康权 吴成强 杨敏
初步探讨了营养源对异常酵母菌处理高含油废水系统的恢复能力。结果表明,废水中补充氮源可使酵母菌的油降解活性和沉降性能大大提高,有机物的化学需氧量、油去除率分别比不补充氮源时提高85%和88%;添加Ca2+对处理能力有一定提高作用,有机物的化学需氧量、油去除率分别提高了40%和47%;补充磷源和Fe3+对系统的恢复作用不明显。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王兴兴 丁梦帆 潘迎捷 王永杰
运用实时荧光定量PCR方法分析西藏开菲尔粒中细菌与酵母菌的数量变化规律,需要有效提取其微生物总基因组DNA。本文通过同时添加溶菌酶与溶壁酶优化实验方案,成功获得西藏开菲尔粒中微生物的总基因组DNA。荧光定量PCR分析提取自培养1、4、8和12周的西藏开菲尔粒的微生物总基因组DNA,结果显示:4个时间点细菌16S rRNA与酵母菌26S rRNA基因拷贝数均分别约为每微升107拷贝与105拷贝,表明细菌与酵母菌的数量相对稳定。该结果为进一步研究西藏开菲尔粒中细菌与酵母菌间的共生关系奠定了一定的基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
宋育阳 白稳红 刘延琳
利用WL营养琼脂培养基,对宁夏御马葡萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离得到的105株葡萄酒相关酵母进行初步鉴定和聚类,进而对代表性菌株进行26S rDNA D1/D2区的序列分析。结果表明:供试酵母菌株经分类鉴定应归入4属5种,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyveri、假丝酵母Candida zemplinin、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和巴氏酵母Saccharo-myces pastorianus,分别占分离菌株总数的3%、8%、1%、1%和87%;非酿酒酵母non-Saccharom...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘树文 王玉霞 陶怀泉 车兆虹 武胜叶
【目的】研究SO2和酒精处理对葡萄酒自然发酵醪液中酵母菌群数量和种类的影响。【方法】分别对葡萄酒自然发酵醪液进行60,80,100 mg/L SO2处理和体积分数5%,10%,15%酒精处理,并分离不同发酵时期葡萄醪液中的酵母菌。应用5.8S-ITS扩增片段的RFLP分析检测技术,结合WL营养琼脂培养基上的菌落形态及颜色,对分离的酵母菌进行鉴定。【结果】无论是SO2处理还是酒精处理,发酵后期优势菌群主要为酿酒酵母;SO2处理主要对SO2敏感的酵母菌群影响较大,同时酵母菌群还受发酵产物酒精的影响,发酵中后期除酿酒酵母外只能分离到少量耐SO2的拜耳接合酵母和贝酵母;酒精处理中,发酵初期主要分离到的...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王娜 何成霞 邹强 苟兴华 陈松 吴昊俣 蔡心析 许天恒
【目的】人微小纤溶酶原是由261个氨基酸组成的肽链,位于人纤溶酶原第549～790位,含有纤溶酶原活性区域,被激活后具有纤溶活性,能够降解纤维蛋白。本文旨在优化人微小纤溶酶原cDNA在毕赤酵母中的表达条件。【方法】在NCBI中获取人微小纤溶酶原氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性原理,设计对应的DNA序列,然后进行人工合成。合成的基因序列经测序验证后酶切与表达载体pPICZαA连接形成重组表达质粒pPICZαA-mPlg,转入大肠杆菌JM109中扩增质粒,提取阳性菌落中的重组质粒,双酶切获得人微小纤溶酶原的表达单元,然后构建4拷贝(表达单元)pPICZαA-mPlg,单酶切线性化质粒。然后电转化导入感受态毕赤酵母SMD1168中,经表型筛选、PCR筛选阳性克隆,获得高表达人微小纤溶酶原工程菌。培养工程菌后,甲醇诱导工程菌细胞让人微小纤溶酶c DNA表达,用SDS-PAGE检查其分子量,发色底物法检测微小纤溶酶原活性,通过发酵条件优化提高人微小纤溶酶原的产量,用SP-Sepharose fast flow凝胶层析方法纯化目标蛋白。【结果】SDS-PAGE检测到符合人微小纤溶酶原分子量大小的蛋白条带,同时发色底物法检测出样品中含有纤溶活性,其水平达到90 U/mL。【结论】本文为后续进行大规模表达人微小纤溶酶原打下了基础。
关键词：
人微小纤溶酶原 甲醇诱导 发色底物法
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
梁建芬 李勇
考察了natamycin对酵母菌生长繁殖的影响 ,确定了其最低抑菌浓度及最佳添加时间。结果表明 :natamycin对酵母的生长繁殖有明显的抑制作用 ,其最小抑菌浓度为 2 5 μg·mL-1;其抑菌效果与其浓度成正相关 ,与加入natamycin时酵母菌的初始活菌数成负相关 ;在酵母菌生长延迟期加入natamycin抑菌效果明显好于稳定期加入。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
卢曼 陈小兵 王兴兴 潘迎捷 王永杰
西藏开菲尔粒(俗称藏灵菇)是由多种乳酸菌(间或少量醋酸菌)和酵母菌共生而成一种外形酷似菜花的白色或乳黄色团状聚合体,是目前已知的唯一可用于酸奶制作的天然野生菌种资源。采用扫描电镜、分离培养、26S rRNA基因测序与序列分析、荧光原位杂交(FISH)相结合的技术方法,对西藏开菲尔粒中的酵母菌进行了分离培养、鉴定和形态观察。结果显示:西藏开菲尔粒中酵母菌多为球形(2.0~5.0μm)或椭圆形(1.0~3.0×2.0~4.0μm);从西藏开菲尔粒中分离出的16株酵母菌分属于酿酒酵母属(Saccharomyces)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、亚罗酵母属(Yarrowia)这3个属中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宋安东 贾翠英 陈红歌 吴云汉
以野生型苹果酒酵母菌Y02为出发菌株,以8×1015cm-2注入剂量对出发菌株Y02进行诱变处理,得到1株形态特征具有明显差别的特异突变株ION -11dry。发酵试验表明,该特异突变株的产酒率比出发菌株提高22.4%,是一株优良的产苹果酒酵母菌菌株。对特异突变株与出发菌株在碳源同化、氮源同化、酵母菌菌体蛋白SDS-PAGE凝胶电泳等方面的研究结果表明,特异突变株ION -11dry是一株与出发菌株Y02有显著差别的优良菌株。
关键词：
苹果酒 酵母菌 离子注入 诱变处理
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郝孔利 张子辉 王珊珊 张杰
从喂食聚乙烯塑料印度谷螟(Plodia interpunctella (Hübener))幼虫的肠道液中分离筛选出1株能还原Cr(Ⅵ)的酵母菌ZJH-1,通过形态特征和分子生物学鉴定该菌株为季也蒙毕赤酵母菌(Pichia guilliermondii)。该菌株对Cr(Ⅵ)的最小抑菌浓度(MIC)为17mmol/L,在含有50mg/L Cr(Ⅵ)的条件下,对其他重金属的MIC分别为Cu(Ⅱ)13 mmol/L、Pb(Ⅱ)6 mmol/L、Ag(Ⅰ)4 mmol/L、Mn(Ⅱ)16 mmol/L、Ni(Ⅱ)3mmol/L、Co(Ⅱ)3mmol/L、Cd(Ⅱ)0.9mmol/L和Hg(Ⅱ)0.2mmol/L。以Cr(Ⅵ)还原率为指标,考察了温度、pH、接种量、供电子体以及不同重金属离子对Cr(Ⅵ)还原率的影响,结果表明:在酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基(YPD)中,菌株ZJH-1还原Cr(Ⅵ)的较优pH和温度分别为9.0和40℃;在最适条件下,接种量为8%时,Cr(Ⅵ)的还原效果最佳;当葡萄糖作为供电子体时,48h内Cr(Ⅵ)的还原率为100%;菌株在含有不同重金属离子的培养液中,除Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)和Co(Ⅱ)外,菌株ZJH-1还原Cr(Ⅵ)的能力和生长能力均受到抑制,抑制顺序为Mn(Ⅱ)>Hg(Ⅱ)>Ag(Ⅰ)>Ni(Ⅱ)>Cd(Ⅱ)。对菌株ZJH-1还原Cr(Ⅵ)能力的初步研究结果表明,菌株ZJH-1在Cr(Ⅵ)污染修复中具有良好的应用潜力。
[期刊] 湖南农业大学学报
[作者]
胡亚平 李宗军 王燕 欧亦群
为筛选酿造枸杞酒的优良酵母菌种 ,从枸杞发酵醪中分离得到 47个酵母菌株 ,乙醇发酵试验初筛后得到 5个性能较好的菌株 .通过进一步的生理生化试验及性能测定 ,Y9和 Y33菌株是发酵性能优良的菌株 ,尤以 Y9菌株性能最好 ,其发酵酒含乙醇 1 5 % ,可耐 1 5 %～ 1 7%的酒精 ,可在 6 0 %的糖液中发酵 .
关键词：
枸杞 酿造酒 酵母菌属 筛选
[期刊] 水产学报
[作者]
许文军 徐汉祥 施慧 钱冬
2002-2003年,舟山市暂养梭子蟹连续发生被称为“乳化病”的暴发性疾病,并导致大量死亡。发病主要集中在每年10月至翌年2月低水温期的海捕暂养梭子蟹,病蟹蟹体消瘦,肌肉萎缩,横切步足,在断口处有乳白色的液体流出,打开蟹盖,盖内可见大量乳白色液体。从乳白色液体内能镜检出大量酵母菌样微生物,菌体大小为(2.3~7.8)μm×(1.3~6.5)μm,多数呈卵圆形,细胞大多单个或成对排列,多边芽殖。同时,显微组织病理观察可见病蟹肌肉、心脏、肝胰脏以及鳃等部位也可发现相同菌体。该菌可生长在TCBS上形成白色菌落,在孟加拉红上形成红色菌落,经菌体形态、培养特性及生理生化反应,鉴定为假丝酵母菌属酵母菌(C...
关键词：
三疣梭子蟹 假丝酵母菌病 组织病理
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