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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘文枝 曾令兵 张辉 杨星 徐进 江南 周勇 马杰
鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)感染异育银鲫(Carassius auratus gibelio)是近年新出现的一种严重病毒性疾病,已经造成重大经济损失,目前缺乏有关该病发病机理的相关研究。以CyHV-2感染异育银鲫的患病鱼内脏组织超微过滤匀浆液,腹腔注射感染健康异育银鲫,分别对感染组与对照组鲫尾静脉采血,进行白细胞分类计数、吞噬细胞活性检测以及血清生化指标测定与分析。结果表明,与对照组相比较,感染组鲫血细胞总数变化不明显,但单核细胞和淋巴细胞百分比显著上升,其中淋巴细胞上升呈极显著差异(P<0.01),单核细胞上升呈显著差异(0.01
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭俊杰 张琪 贾路路 林蠡 袁军法 曾令兵 周勇 刘学芹
利用PCR方法扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)ORF25基因的部分基因序列,并将扩增产物连接到原核表达载体pGEX-KG,成功构建了CyHV-2-ORF25-KG重组质粒。IPTG将其诱导后,SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表达,分子质量大小为42ku,且主要以包涵体形式存在;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,多次免疫后通过细胞融合,筛选出1株单抗5C6;经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,这株单抗可以识别CyHV-2ORF25蛋白。
[期刊] 水产学报
[作者]
夏思瑶 王浩 Patorida Podok 许丹 姜有声 吕利群 佐野元彦
为研究鲤疱疹病毒Ⅱ型（Ｃｙ ＨＶ－２）体外感染复制特征以及异育银鲫抗病毒免疫应答反应。本实验采用组织块培养法建立了异育银鲫背鳍细胞的原代培养体系。结果显示，在１０ ｄ左右可观察到组织块迁移分离出新的单层细胞，３周左右细胞可覆盖底部面积为２５Ｃｍ２培养瓶的底部；经Ｃｙ ＨＶ－２悬液感染离体培养的原代细胞，３ ｄ后病毒滴度增殖至１０６拷贝／ｍ Ｌ；在病毒感染６ ｄ后出现典型的细胞病变效应；Ｃｙ ＨＶ－２感染原代细胞后，分析前期通过鱼体水平实验鉴定出的与该病毒感染相关的免疫基因：ＰＮＰ５ａ、ｍＰＯ、ｍＨＣⅠ、ＬｙＺ－Ｃ、ＩＬ－１１、ＩＴＬＮ、ＰＮＰ５ａ和ｄＵＳＰ，ＲｅａＬ－ＴＩｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ结果．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
卢俊 陆宏达 岳蒙蒙 操艮萍
以患鲤疱疹病毒２型（Ｃｙｐｒｉｎｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ２，Ｃｙ ｈｖ－２）疾病的异育银鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｇｉｂｅｌｉｏ）肾脏为实验材料，采用－２０℃冷冻、１００％乙醇、ｄａｆａｎｏ＇ｓ液、１０％福尔马林、Ｚｅｎｋｅｒ＇ｓ液、Ｍüｌｌｅｒ＇ｓ液、２．５％戊二醛、ｈｅｌｌｙ＇ｓ液、ＭｏｓｓＭａｎ＇ｓ液、ｂｏｕｉｎ＇ｓ液和Ｃａｒｎｏｙ＇ｓ液不同方法进行保存，通过微量分光光度计检测和琼脂糖凝胶电泳探讨不同保存方法对病毒ｄｎａ提取效果、常规ｐＣｒ扩增效果和巢式ｐＣｒ扩增效果的影响。结果表明：从病鱼肾脏中提取ｄｎａ时，除１００％乙醇保存方法与－２０℃冷冻保存组一样可以提取高质．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
周瑶佳 田思璐 许佳雪 李尹麒 杨悦 耿毅 黄小丽 陈德芳 汪开毓 欧阳萍
为探究疾病病因和流行特点，对病鱼进行剖检、病理学观察、分子生物学检测及人工感染实验。结果显示，患病鲫临床表现为离群独游、浮头、全身发黑、体表出血。剖检发现鳃、肝脏、肾脏等器官出血、肿胀和坏死，鳔点状出血。组织病理观察显示，鳃呼吸上皮细胞肿胀、坏死及脱落；肾脏局灶性坏死；脾脏组织广泛变性坏死，造血系统崩解；肝脏发生空泡变性和坏死。透射电镜观察到脾脏和肾脏中存在4种不同大小的病毒颗粒，分别为DNA病毒内核、空衣壳、实心衣壳和有包膜的成熟病毒粒子。未成熟的病毒粒子存在于细胞核，成熟的病毒粒子存在于细胞质。电镜下可见鲤疱疹病毒II型（CyHV-2）在细胞核内完成核酸复制和核衣壳装配，囊膜蛋白在出核后获得。细胞核萎缩、核染色质边缘化，线粒体肿胀、坏死、嵴断裂，细胞质空泡化。取病鱼组织匀浆滤菌后接种到EPC及FHM细胞系，盲传3代后未见细胞病变。通过腹腔注射病鱼组织匀浆进行人工感染实验，实验组鲫表现出与自然感染鲫相同的临床症状而对照组鲫正常，实验组累积死亡率为80%。用PCR方法检测CyHV-2的解旋酶基因片段，扩增出预期大小相符的目的条带。利用邻近法对该病毒的解旋酶基因进行系统发育分析，结果显示与CyHV-2（YZ-01）的同源性为99%。以上实验结果证实了CyHV-2是这次疾病暴发的原因。
关键词：
鲫 鲤疱疹病毒2型 组织病理 超微病理
[期刊] 淡水渔业
[作者]
范腾飞 叶应旺 胡王 江河 蒋启欢 陆剑锋
为研究灭活疫苗对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的血液和生化指标的影响,将异育银鲫随机分为对照组、感染组和免疫组,在处理后18 h和36 h时断尾采血,分离得到抗凝血和血清,分别测定8项血液指标和13项与免疫相关的生化指标。处理后18 h,感染组与对照组相比,谷丙转氨酶、谷草转氨酶、Cl-差异显著,其他指标无显著差异,而免疫组与对照组之间均无差异;处理后36h,感染组9项指标(MCH、MCHC、WBC、RBC、Cl-、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、糖)出现极显著差异,8项指标(MCV、HGB、H...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐进 曾令兵 杨德国 张辉 马杰 江南 范玉顶
采用细胞培养、超薄切片电镜观察、巢式PCR检测以及病毒DNA克隆与测序分析等技术,从湖北武汉一循环水养殖系统中患出血病异育银鲫(Carassius auratusgibelio)体内分离鉴定了一株鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)病毒,命名为鲤疱疹病毒2型武汉株(CyHV-2-WH)。患病鱼组织匀浆液接种锦鲤鳍条细胞系(Koi-Fin)可产生典型的细胞病变效应。用患病鱼组织匀浆液与细胞培养物分别人工感染异育银鲫,均可重复出与自然发病相同的症状,死亡率达100%。患病鱼脾与肾脏组织超薄切片电镜观察结果显示,病毒为具囊膜的球形病毒,囊膜直径为170~200...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
龚国淑 冷怀琼 张咏梅 谢桂蓉
当年生早酥梨幼苗接种茎痘病毒（ＳＰＶ）后，定期测定其叶片的核酸、蛋白质、可溶性糖、叶绿素和矿质元素等含量。结果表明，病株中ＰＮＡ、蛋白质、可溶性糖含量在接种ＳＰＶ前期增加，后期降低；与健株相比，病株ＤＮＡ、Ｆｅ、Ｃｕ增加，叶绿素、Ｐ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｏ、Ｂ等矿质元素的含量降低。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
沈永林 顾有方 毛鑫智 高利华
为深入了解动物感染肝片吸虫后的疾病发展及免疫功能变化,本研究以山羊实验感染肝片吸虫囊蚴(200个和500个/只),连续17周,每周颈静脉采血1次,测定血液参数,血清酶、总蛋白及蛋白组分.结果:感染山羊血液的 RBC、Hb、PCV 均明显下降;血液指数 MCV,MCH,MCHC 变化不明显;WBC 和嗜酸性白细胞明显增加;血清中 AST 从第2周后开始上升,第8与第9周达高峰,GGT 于感染后第7与8周开始升高,第10与11周达到高峰;血清总蛋白前10周有缓慢上升趋势,以后呈直线下降,白蛋白显著减少,α-球
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
於叶兵 江世贵 林黑着 王煜恒 王爱民
在基础料中分别添加4%的鱼油、豆油、猪油、花生油和混合油(鱼油、豆油、猪油质量比为3∶4∶3),制成5种等氮试验饲料,饲喂初始体质量为(6.04±0.05)g的异育银鲫60 d,以考察5种脂肪源对异育银鲫形体指标和血清生化指标的影响。结果表明:猪油组的肝体指数与脏体指数均最高,猪油组肝体指数显著高于鱼油组,猪油组脏体指数显著高于混合油组(P0.05);各试验组总蛋白(TP)含量和白蛋白(ALB)含量的变化趋势相似,均为鱼油组显著高于猪油组(P0.05);各试验组谷草转氨酶(AST)活性和谷丙转氨酶(ALT...
关键词：
异育银鲫 脂肪源 形体 血液生化指标
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵欣 贾鹏 刘莹 王津津 史秀杰 潘广 郑晓聪 于力 何俊强 刘荭 吴志新
本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果表明,与qPCR相比,ddPCR具有相同的特异性,其灵敏性比qPCR低20倍。在定量CyHV-2 DNA时,ddPCR(R2=0.994)和qPCR(R2=0.994)均表现出良好
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙佳鑫 石连玉 姜晓娜 李池陶 葛彦龙 胡雪松 张晓峰 贾智英
以F_(4)为实验材料,利用实时荧光定量PCR技术以TK和ORF72基因为病毒标志基因，分析镜鲤抗疱疹病毒（CyHV-3）选育抗病品系F_(4)在病毒感染不同阶段中的表达量。结果显示：（1）两个基因不同感染阶段脾、肾组织表达量趋势一致，24～144h呈上升趋势，144～288h呈下降趋势，且在144h脾、肾组织的病毒表达量均达到最高。（2）脾组织两个基因表达量均低于肾组织。选育组两个基因在120h均达到差异极显著(P<0.01)，未选育组两个基因均在96～144h差异极显著（P<0.01）。（3）选育组两个基因表达量低于未选育组。脾、肾组织TK基因均在96～168h差异极显著(P<0.01)；脾、肾组织ORF72基因均在96～192h差异极显著(P<0.01)，其中脾组织216h也差异极显著(P<0.01)。以上结果说明选育组抗病性能强于未选育组，其中肾组织抗病性能强于脾组织，且经选育肾组织抗病免疫性能得到提高。目前，未见其他鱼类的选育种在抗病性状上达到一个稳定阶段，本研究在对于病毒表达量的研究当中可对其他鱼类提供重要的指导作用。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈俊杰 李媛媛 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍
为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
程帆 孙秀梅 薛秀恒 王菊花 李培英 周杰 刘力源 张淑静
【目的】研究犊牛感染鼠隐孢子虫后血液生化指标、营养物质代谢相关酶及激素的变化,初步探讨隐孢子虫病的致病机理。【方法】给犊牛腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液致其免疫力低下,然后通过经口感染鼠隐孢子虫卵囊构建隐孢子虫感染犊牛动物模型。采集模型组和对照组犊牛隐孢子虫感染前和感染后第14、28天的血液,测定血液中K+、Na+、Cl-、Ca2+、Mg2+、血糖的浓度,以及总蛋白、白蛋白、5-羟色胺、白介素-2的质量浓度和酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶的活性。【结果】经口感染鼠隐孢子虫卵囊犊牛粪便中检出了大小、形态与感染卵囊基本相同的隐孢子虫卵囊,表明隐孢子虫感染犊牛动物模型构建成功。隐孢子虫...
关键词：
隐孢子虫 犊牛 动物模型 血液生化指标
[期刊] 淡水渔业
[作者]
姚峰 甄恕其 杨严鸥
在(28±1)℃水温条件下,以4种循环饥饿的投喂方式饲养初始体重为1.58 g的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)幼鱼,研究其补偿生长和部分生理生化指标的变化。实验分为四组,第一组每天投喂,为对照组,第二组投喂4 d后饥饿1 d,第三组投喂2 d后饥饿1 d,第四组投喂1 d后饥饿1 d,4种方式分别以C、R1/4、R1/2和R1/1表示,试验持续60 d。结果显示,3个试验组的实际摄食率均显著高于对照组(P<0.05),但饲料转化效率均显著低于对照组,导致3个试验组的特定生长率显著下降,体重未赶上对照组,而且饥饿时间越长,体重增长率越低。鱼体的蛋白质、灰分含量未受...
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