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[期刊] 水产学报
[作者]
王锐 王秀华 王玉娟 韩雯 黄倢
为了实现对目标细菌的有效示踪,实验以异硫氰酸荧光素(FITC)为标记物,分别设置FITC标记浓度0.2、2、20、50、100、200μg/mL,标记时间1、15、30、60、120、240 min,研究了FITC标记浓度与标记时间对鳗弧菌标记效果的影响,同时对在不同温度(25、4、-20、-70℃)及不同时间(24、48、96、192 h)存储条件下鳗弧菌标记荧光的稳定性进行了比较,对标记鳗弧菌经甲醛灭活后的荧光变化进行了观察,研究了不同光照条件(0、150、1 500、25 000 lx)对标记鳗弧菌的荧光衰减影响,以及在-20和-70℃条件下反复冻融对标记鳗弧菌荧光强度的影响。结果表明,...
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
余婷玉 方志远 黄卫 王淋荆 徐宁
将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg(2+)浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析TAT-LUC的敏感性和可靠性。表明:在含Mg(2+)浓度为50mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.5mmol/L的IPTG,22℃诱导16h可获得大量高活性的TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
闫丽 李晨 张庆利 戈蕾 黄倢
采用带正电的尼龙膜作为片基,利用手动芯片点样仪将鳗弧菌6个毒力基因的寡核苷酸探针点样于膜基底上,然后进行紫外交联,制备膜芯片。制备好的膜芯片与6个毒力基因的带有地高辛标记的PCR产物进行杂交,通过观察杂交信号来判断是否含有该基因。通过对膜芯片点样浓度、杂交时间及洗膜步骤进行优化,确定所设计膜芯片最适杂交时间为30min、点样探针最适浓度50μmol/L、洗膜过程只需要3步,时间缩短了45min。
关键词：
基因芯片 尼龙膜 鳗弧菌 毒力基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
周兴本 刘士冲 郭修武 王丛丛 李坤 郭印山 李成祥
为探明葡萄在不同生长时期的光合特性与土壤水分含量之间关系。以2年生无核白鸡心葡萄为试材,研究了不同土壤水分条件(处理Ⅰ50%、处理Ⅱ65%、处理Ⅲ80%)对无核白鸡心葡萄光合特性和荧光特性的影响。结果表明,无核白鸡心葡萄在新梢生长期、坐果期和转色期均以80%田间持水量(处理Ⅲ)时的光合速率较高,而采后期以65%田间持水量(处理Ⅱ)的光合速率较高。在水分利用效率方面,新梢生长期和采收后与处理的田间持水量呈负相关,坐果期和转色期与处理的田间持水量呈正相关。各个荧光参数在不同时期的变化总体上随处理的田间持水量增加而增大,PI各时期的变化与光合指标在各时期的变化相似,有一定相关性。PI在新梢生长期、坐...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
林强 李宁求 付小哲 刘礼辉 石存斌 吴淑勤
以副溶血弧菌毒素调控基因(toxin regulations,toxR)作为靶标基因,设计特异性引物及TaqMan探针,以含toxR基因的质粒为模板,建立质粒拷贝数与CT值的标准曲线,分别采用含toxR基因质粒、纯培养的副溶血弧菌和添加副溶血弧菌的牡蛎(Ostrea)模拟样品进行灵敏度试验,结果表明,其灵敏度分别为15拷贝、18 CFU/mL和180 CFU/mL。同一个样品的30次重复性试验表明,试验内及试验间的变异系数分别为0.95%和1.5%。结果显示,本研究建立的副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于牡蛎等水产品中副溶血弧菌的定量检测。
关键词：
副溶血弧菌 荧光定量PCR toxR基因
[期刊] 水产学报
[作者]
高会会 侯立婷 李槿年 黄安宁
为了示踪研究拟态弧菌感染草鱼的动态过程,将增强型绿色荧光蛋白编码基因EGFP克隆至质粒p BAD24,并转化到拟态弧菌04-14菌株构建荧光标记重组菌。重组菌经阿拉伯糖诱导后,能高效表达EGFP蛋白;荧光显微镜观察和流式细胞仪检测均发现重组菌能够发出明显的绿色荧光信号,且传至30代后质粒稳定率仍为100%;生物学特性检测结果显示,与野生株相比,重组菌的形态、生长特性和细胞黏附性均未发生明显改变。用标记重组菌浸泡感染草鱼,定点采集鳃、肠道、肌肉、头肾、脾脏和肝脏,借助荧光信号检测4 d内细菌在不同组织脏器中的动态分布。结果发现感染4 h后即可在肠道和鳃中检测到绿色荧光信号,标记菌检出量分别为3....
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张小能 杨先乐 曹海鹏 胡鲲 安健 黄志华
试验采用海藻酸钠包埋法对噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)进行固定化,制备得到噬菌蛭弧菌颗粒。以噬菌蛭弧菌活菌数为考核指标,优化噬菌蛭弧菌固定化条件。通过单因素试验和正交试验,评价了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)、玉米油浓度、包埋温度、搅拌时间、搅拌速度和交联时间对噬菌蛭弧菌固定化的影响。结果表明,作为载体配方优化因素的海藻酸钠浓度和玉米油浓度对活菌数具有显著性影响,而氯化钙浓度和蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)影响不显著;作为过程优化因素的温度和搅拌速度对活菌数具有显著性影响,而搅拌时间和交联时间影响不显著。...
关键词：
噬菌蛭弧菌 颗粒剂 制备 优化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李亮亮 牛森 刘文娥 秦蓁 李海锋
研究结果表明 ,荧光定糖法测定纤维素酶活力的反应最佳条件 :反应液浓度为46.7mg·g-1,反应时间为10min,反应温度为150℃。将荧光定糖法与滤纸酶活测定法相结合应用于纤维素酶蛋白组分及土壤纤维素酶活力的研究与测定。
关键词：
纤维素酶 滤纸酶活测定法 荧光定糖法
[期刊] 华北农学报
[作者]
孟祥馨悦 刘丰 崔宇婷 王佳慧 冯志忠 张会慧
为明确不同形态氮素对谷子幼苗叶片光合能力的影响,为谷子合理施用氮肥提供科学依据,研究了在低氮条件下施用硝态氮(NO_3--N)、铵态氮(NH_4+-N)以及硝酸铵(NH_4NO_3)处理下谷子幼苗的生长及叶片PSⅡ光合性能。结果表明,施用不同形态氮素均明显促进了谷子幼苗的生长,但在NO_3--N和NH_4NO_3处理下谷子幼苗叶片的PSⅡ反应中心活性、电子传递效率及光合作用能力均明显高于NH_4+-N处理,而NH_4NO_3仅稍低于NO_3--N处理。NH_4+-N处理下谷子幼苗叶片Fm、Fv/Fm、Fv
关键词：
谷子 氮形态 叶绿素荧光 PSⅡ
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
孙乃东 李航 齐飞 王美杰 张会慧 田野 王娟 王晶英
为了研究丁香属植物在淹水条件下对酸碱胁迫的响应,以紫丁香Syringa oblata和小叶丁香Syringa microphylla为试验材料,在盆栽淹水环境下研究了5种pH值条件对2种丁香叶绿素含量及叶绿素荧光特性的影响。结果表明:淹水时,紫丁香在碱性胁迫条件下相对叶绿素含量降低得最快,2种胁迫下受到的光抑制程度较强,在酸性胁迫条件下光合电子传递速率较慢,热耗散变化程度不明显;小叶丁香在酸性胁迫条件下相对叶绿素含量降低得最快,热耗散升高较快,2种胁迫下受到的光抑制程度较弱,光合电子传递速率较慢;在淹水条件下,紫丁香的抗酸性较强,小叶丁香的抗碱性较强。
关键词：
丁香属 淹水胁迫 酸碱胁迫 叶绿素荧光
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘云国 陈松林
牙鲆(Paralichthys olivaceus)感病群体和抗病群体通过注射鳗弧菌(Vibrio anguillarum)获得。利用61对AFLP引物组合扫描了牙鲆感病群体和抗病群体各20个个体,结果共扩增出3 200条带,8条AFLP带在2个群体中显示了极大的差异(P<0.01),其中有2条带是在抗病群体中出现的高显性基因频率的标记,另外6条带是在感病群体中出现的高显性基因频率的标记。这些标记很可能是与抗病性相关的候选标记。这些抗病性候选标记的获得为实现牙鲆分子标记辅助育种和抗病基因克隆奠定了一定基础。[中国水产科学,2007,14(1):155-159]
关键词：
牙鲆 鳗弧菌 AFLP标记 抗病力
[期刊] 水产学报
[作者]
高磊 李健 王群 刘淇
利用Western-blot技术,对鳗弧菌L-18株的OMPs和IROMPs的免疫反应性进行了分析,并通过免疫牙鲆比较二者免疫保护力的差异,以期从IROMPs方向探索开发鳗弧菌新型鱼用疫苗,并为研究其免疫原理提供重要的科学依据。结果表明,培养基中加入不同浓度的联铁剂,鳗弧菌L-18株的生长和铁载体的表达出现规律性变化,其中加入100~130μmol.L-12,2′-联吡啶为最适合限铁条件,此时铁载体的表达量最高且生长受抑制程度较小。在此条件下,菌株表达出74.3 ku和77.4 ku的IROMPs,其中77.4 ku蛋白具有免疫反应性,为重要抗原。用全菌灭活疫苗、OMPs、IROMPs分别腹腔...
关键词：
鳗弧菌 铁调节外膜蛋白 牙鲆
[期刊] 水产学报
[作者]
李宁求 余露军 付小哲 刘礼辉 林强 常藕琴 石存斌 黄志斌 吴淑勤
菌蜕具有完整细菌表面抗原结构,可诱导机体的体液和细胞免疫应答,成为疫苗制备的候选之一,为了探讨鳗鲡迟缓爱德华氏菌菌蜕疫苗的可行性,实验采用基因重组技术构建了噬菌体PhiX174裂解酶基因(Lysis E)的温控表达载体,转化迟缓爱德华氏菌,成功制备其菌蜕,并对菌蜕形态、溶菌动力学、裂解效率以及制备条件等进行了研究。结果表明,细菌菌蜕表面形成溶菌孔道,细胞因内容物流失而发生明显的皱缩;构建的迟缓爱德华氏菌诱导后1 h开始裂解,5 h后裂解基本完成,裂解效率为99.99%,冷冻干燥后重悬涂布平板,未检出活菌,电镜观察表明冻干前后细胞形态未见明显变化;构建的迟缓爱德华氏菌分别在OD600值为0.4和...
关键词：
鳗鲡 迟缓爱德华氏菌 菌蜕 条件优化
[期刊] 水产学报
[作者]
鄢庆枇 陈强 邹文政 马甡 庄峙厦 王小如
研究了不同环境条件下溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附作用。采用细菌计数法测定溶藻弧菌的粘附作用。粘附的细菌经SYBR GreenⅠ染色后在荧光显微镜下观察,用数码相机拍照后在电脑上计数。试验结果表明,溶藻弧菌对大黄鱼肠粘液的粘附量随菌浓度的升高而升高,并在1~1.5h内趋于饱和;粘附作用在15~30℃、pH偏酸时较强;盐度在5~35范围内对前肠粘液的粘附作用影响不明显,后肠粘液的粘附作用在此范围内随盐度增大而加强,在盐度为0时,溶藻弧菌对前、后肠粘液都无粘附作用;56℃热处理5min及60℃处理1h均能大幅减弱溶藻弧菌对两种肠粘液的粘附作用,表明溶藻弧菌表面的某些热敏结构在粘附作用中起着重要作用。...
关键词：
溶藻弧菌 大黄鱼 粘附作用 粘液
[期刊] 中国农业科学
[作者]
年洪娟 张杰 樊利强 刘朔 宋福平 黄大昉
【目的】探索荧光假单胞菌的分类方法,分离筛选拮抗性较强的荧光假单胞菌。【方法】利用紫外下产生荧光的特性,采用梯度稀释及鞭毛染色的方法,对采自云南、海南、山东和新疆的488份植物根际土壤进行分离筛选,分离菌株进行ARDRA分析,采用室内平板对峙法筛选对植物病原真菌具有较强拮抗作用的菌株,并对其进行生理生化分析和分子鉴定。【结果】分离筛选到102株紫外下产生荧光的杆状单极生鞭毛菌株。ARDRA分析产生荧光假单胞菌类型、恶臭假单胞菌类型以及一个未知的谱带类型。以油菜立枯病菌作为靶标菌,筛选到25株具有拮抗作用的菌株,其中TC222产生的抑菌圈最大,进一步的生测结果表明该菌株对9种重要的植物病原真菌如...
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