载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)作为胆固醇代谢过程中的关键因子,参与脂蛋白转运和性腺发育。为进一步了解该基因的作用,本实验克隆并测序了异源四倍体鲫鲤及其父母本ApoE基因的全长序列。异源四倍体鲫鲤、红鲫和鲤的ApoE全长分别为1393 bp、1384 bp和1396 bp,均编码281个氨基酸。序列对比表明,异源四倍体鲫鲤ApoE与父本鲤更为相似。另外有2个氨基酸位点发生了与父母本均不同的变异,证明异源四倍体鲫鲤除了有杂交特征外也产生了变异。通过Mega软件构建的哺乳动物ApoE进化树与系统分类相一致:鲤科鱼类的ApoE聚类在一起而分离于其它物种。Real time P...

在优化RAPD检测条件的基础上,从100个随机引物中筛选出60个扩增较好的引物对异源四倍体鲫鲤及其原始亲本红鲫和湘江野鲤相互间扩增DNA片段的异同性进行比较研究。结果显示,60个引物共产生1554条带,单一引物扩增的DNA片段数在6～20条之间,片段大小在200～3500bp之间。遗传相似率分析表明,异源四倍体鲫鲤与其原始母本红鲫的相似率为69.41%,与其原始父本野鲤的相似率为64.47%,说明异源四倍体鲫鲤接受原始母本红鲫的遗传物质要多一些;而红鲫和野鲤之间的相似率为42.18%,说明两者的基因组成有较大的相似性,从分子水平证实了红鲫和野鲤的远缘杂交具有较大的亲和性。在分析中,还发现异源四...

用密度梯度离心和ＤＮａｓｅ　Ⅰ、ＲＮａｓｅ消化法从异源四倍体鲫鲤（Ｆ８）和鲫鲤Ｆ２肝组织中提取和纯化线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）。用９种限制性内切酶对异源四倍体鲫鲤和鲫鲤Ｆ２的ｍｔＤＮＡ进行了分析，结果表明ＸｂａⅠ和ＢｇｌⅡ两种限制性内切酶在异源四倍体鲫鲤ｍｔＤＮＡ上存在酶切位点多态性。通过凝胶电泳测得异源四倍体鲫鲤ｍｔＤＮＡ相对分子量平均约 １０．２９ × １０６道尔顿，分子大小为 １６．２０ｋｂ；鲫鲤 Ｆ２ ｍｔＤＮＡ相对分子量为 １０． １８ × １０６道尔顿，分子大小为１６．０２ｋｂ。根据单酶解和双酶解的片段数目和分子大小，构建了异源四倍体鲫鲤ｍｔＤＮＡ的７种限制性内切酶（Ｋｐｎ　Ⅰ、Ｐ...

试验以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus,Ma)为研究对象,采用PCR技术克隆获得trim63a基因(tripartite motif containing 63,又名肌肉环状指基因1)的cDNA部分序列,生物信息学分析结果显示,Matrim63a基因cDNA的编码序列(coding sequence,CDs)为1 035bp,编码344个氨基酸,与硬骨鱼类相似度较高。采用荧光定量PCR技术检测人工繁殖获得的二倍体(D×D)和四倍体(T×T)胚胎不同发育时期Matrim63a的表达量以及泥鳅二倍体(D)和四倍体(T)成鱼不同组织中Ma-trim63a的表达量,基因表达分析结果显示,Ma-trim63a在泥鳅二倍体和四倍体成鱼肌肉中的相对表达量最高,其次是心脏;Ma-trim63a在泥鳅二倍体和四倍体胚胎的13个发育时期均有表达,但是不同倍性的胚胎表达差异较大。

为了探寻不同倍性鱼生殖育性的表观遗传调控规律，实验基于不同倍性鲫鲤精巢的转录本信息库设计引物克隆了不同倍性鲫鲤的ＭｅＣＰ２基因。序列比对结果发现，在远缘杂交的过程中基因组发生了遗传重组和变异。基于序列公共部分设计引物，通过半定量ＰＣＲ和实时定量ＰＣＲ的方法分析了ＭｅＣＰ２基因在不同倍性鱼发育过程中的时空表达特征。结果还发现，ＭｅＣＰ２基因在所有组织中都有表达，但在脑组织中的表达量最高；纵向对比性腺的发育过程，ＭｅＣＰ２基因的表达量会随着性腺发育成熟而下降；横向对比不同倍性鱼的性腺发育，ＭｅＣＰ２基因在三倍体鱼卵巢中的表达量明显高于二倍体和四倍体鱼，但在精巢中的表达量随鱼的倍性增加而增加。研究表．．．

采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa256aa),TGF-β功能区(281aa375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C

IL-8是最早发现的趋化因子,属于CXC亚家族,与鱼类非特异性免疫水平关系密切。实验采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)方法,从淇河鲫总RNA反转录产物中获得了641 bp IL-8cDNA序列,其中包含102 bp的5'非编码区,242 bp的3'非编码区和297 bp的开放阅读框。该基因编码由98个氨基酸残基组成的前体蛋白,前22个氨基酸残基为信号肽。肽链中含有4个保守半胱氨酸,前2个半胱氨酸被1个精氨酸分隔,形成CXC结构。第一个半胱氨酸前缺乏ELR基序,其组成是DPR。由氨基酸同源性分析和进化分析可知,淇河鲫IL-8与鲤、鳙、草鱼、鲢等鲤科鱼类的进化关系较近,与鲤IL-8的同...

为了解彭泽鲫(Carassius auratus var.pengsenensis)♀×兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)♂杂交四倍体子代的细胞遗传特性,本研究以彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代为研究对象,以彭泽鲫雌核发育子代为内参,采用流式细胞仪测量其DNA相对含量,并对彭泽鲫雌核发育子代与杂交四倍体子代进行红细胞形态、大小的比较,另取杂交四倍体子代肌肉、鳍条组织块进行细胞培养,制作染色体标本,对其进行染色体计数及核型分析。结果显示:杂交四倍体子代仍为四倍体,其红细胞长轴、表面积、体积、核长轴、核表面积、核体积均显著大于彭泽鲫雌核发育子代。从形态上看,杂交四倍体子代红细胞相较于彭泽鲫雌核发育子代更长,辅助证明杂交四倍体子代为四倍体。杂交四倍体子代染色体组由200+条染色体组成,核型公式为4n=42m+64sm+62st+32t, NF=368,多出的染色体为超数染色体,未发现有异型性染色体,杂交四倍体子代属于中位演化类群。综上表明,彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代仍为四倍体。

对包括白细胞介素-2（interleukin-2）在内的细胞因子具有调控作用。本研究克隆得到长度为1685 bp的鲤（Cyprinus carpio）CISH基因（cytokine inducible SH-2 containing protein，CISH）的cDNA全长序列，开放阅读框（ORF）长666 bp，编码221个氨基酸，预测蛋白质分子量为24.91 kD。鲤CISH具有典型的SOCS家族结构特征，含有N区、中央SH2结构域和C端SOCS box结构域。系统进化分析表明，鲤CISH与同属鲤科的草鱼和斑马鱼的亲缘关系最近。鲤CISH基因的mRNA表达水平在血液中最高，肝脏中最低。嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）刺激后，鲤CISH在血液中表达量在12-24 h出现显著上升，在第48 h恢复正常水平，暗示鲤CISH在抵抗细菌感染过程中起作用。

【目的】通过对华南8号木薯及其四倍体块根淀粉含量与结构及蛋白质组学分析,揭示染色体加倍对木薯块根淀粉含量与结构的影响及其蛋白质调控机制。【方法】植后10个月收获木薯块根,采用空、水重测定块根鲜薯的淀粉含量,分光光度法分别测定淀粉中支链淀粉与直链淀粉的比例,采用Excel 2013和DPS v7.05统计软件对数据进行分析,差异显著性标准采用新复极差法,通过扫描电镜对块根淀粉体的大小、形态及数量进行显微结构观察,利用蛋白质印迹(Western blot)技术对参与淀粉合成与降解的酶表达水平进行验证,采用双向电泳技术分离块根蛋白质,Delta 2D软件分析差异倍数在2.0以上的差异蛋白质点,并通过...

【目的】基于白桦四倍体与二倍体杂交产生的子代（三倍体）测定分析结果，选出生长与材质性状兼优的杂交优势亲本及组合，为种子园的亲本选配提供理论依据。【方法】以白桦测交系交配设计获得的40个杂交组合10年生杂种试验林为研究对象，测定各杂交组合的生长、材性和保存率等性状，利用SPSS22.0、WinNCⅡ等软件对各性状进行方差、配合力及效应值分析，采用隶属函数法并结合主成分分析综合评价各性状，选择杂交优势亲本及组合。【结果】1）不同亲本杂交组合间的生长、材性和保存率等性状方差分析显示（除木材密度和保存率性状外），7个性状的组合间方差、配合力方差均达显著或极显著水平；7个性状的变异系数在6.34%～55.29%之间，广义遗传力和狭义遗传力分别在38.83%～73.72%和22.23%～68.48%之间，其中部分性状家系间变异较大、遗传能力较强。2）树高、胸径、材积、木质素含量和纤维长宽比5个性状的一般配合力（GCA）效应以及特殊配合力（SCA）效应差异均达显著或极显著水平。双亲的加性效应对胸径、材积等生长性状以及纤维素、半纤维素、纤维长宽比等材质性状具有明显影响，母本的加性效应远大于父本，且占主导地位，各性状中母本的方差分量在43.11%～94.15%之间，父本在0～4.86%之间。由特殊配合力效应分析发现，SCA仅对木质素含量和树高的控制较强，分别为52.03%和44.55%。3）根据亲本及杂交组合间各性状配合力效应值，采用隶属函数并结合主成分分析对各亲本及组合进行综合评价发现，父本F4、F7和F10为优异父本，Q19和Q103为生长或木材纤维性状的优异母本，其中Q103的材积遗传增益达8.60%。选择Q33×F1、Q103×F10、Q13×F12和Q19×F11为生长或纤维性状的优异杂交组合，其中Q33×F1和Q103×F10组合的材积遗传增益分别为16.33%和15.62%。【结论】白桦母本加性效应为本研究性状表现的主要贡献者；依据白桦三倍体家系生长、材性的各配合力效应值，最终选出优异父本3个（F4、F7和F10）、母本2个（Q19和Q103），优良杂交组合4个（Q33×F1、Q103×F10、Q13×F12和Q19×F11）。

为研究雌核发育二倍体鲫鲤产生二倍体卵子的分子机制,实验采用PCR和cDNA末端快速分离法,克隆获得了雌核发育二倍体鲫鲤第三代(G3)、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的细胞周期相关基因——cdc2基因cDNA全序列。结果显示,4种不同倍性鱼cdc2基因均编码含有302个氨基酸蛋白,而且编码的蛋白都含有与其他CDK激酶相当保守的序列PSTAVRE;同源性分析发现,4种鱼cdc2基因编码的氨基酸序列之间的相似度大于97.6%,说明Cdc2蛋白在这4种不同倍性鱼中具有高度保守性。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)对cdc2基因在G3、二倍体红鲫、三倍体湘云鲫及四倍体鲫鲤早期卵巢中...

为研究性腺型芳香化酶P450aromA(cyp19a1a基因编码)在不同倍性鲫鲤卵巢发育过程中的作用,实验采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(RACE),获得了二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和四倍体鲫鲤的cyp19a1a基因cDNA全长。结果显示,3种鱼cyp19a1a基因均编码517个氨基酸残基,而且编码的蛋白都包含P450aromA特有的跨膜螺旋区、I-螺旋区、Ozol’s肽区、芳香化酶特异保守区以及血红素结合区。采用RT-PCR分析cyp19a1a基因mRNA在3种不同倍性鱼类组织中的表达情况,结果显示,cyp19a1a基因主要在实验鱼的卵巢中表达,其次在精巢、脑、脾脏有少量表达。采用实时...

为了解催乳素受体(Prolactin Receptor,PRLR)的基因序列及其在建鲤(Cyprinus carpio var.jian)渗透调节组织中的表达情况,采用同源克隆和末端快速扩增(rapid amplication of cDNA ends,RACE)的方法分离克隆了建鲤PRLR基因全长cDNA,得到2 440 bp的全长cDNA,包括1 821 bp的开放阅读框(ORF),213 bp的5′末端非编码区(UTR)以及406 bp的3′末端非编码区(UTR)。对该基因序列和推测的氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示:建鲤与其他硬骨鱼类该基因的氨基酸序列相似度在37.46%～87....

采用热休克阻止受精卵第一次卵裂的方法诱导颖鲤四倍体。运用正交试验对影响热休克诱导效果的主要三个因素，即处理起始时间（TB）、处理温度（TT）及处理持续时间（TP）进行了筛选。颖鲤受精卵在受精后（水温22℃）52、55、58、61、64和67min时以40、41、42℃的高温持续处理1、1．5、2min，胚胎的四倍化率为0％－67．89％。试验表明，诱导四倍体颖鲤的较适条件为受精后58min和66min左右以40．3－41．3℃处理1－1．5min。