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[期刊] 中国水产科学
[作者]
俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 董在杰
GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio var.jian)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a'和1b'),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录...
[期刊] 华北农学报
[作者]
魏可鹏 俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 夏正龙
旨为查找建鲤(Cyprinus carpio var.jian)胰岛素样生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factor binding pro-teins 1,IGFBP1)基因上与增重相关的SNP位点。利用基因克隆,Clustal W比较8个个体的DNA序列,筛选SNP位点。并采用PCR-RFLP方法检测了其中2个位点(1b-E1-A210G,1b-E3-C108T)在913尾建鲤(♂469,♀444)中的基因型分布。成功分离得到了建鲤IGFBP1的2条DNA序列,并在1a、1b上分别找到7个和24个SNPs位点,其中,1a外显子上有2个,1b外显子上有4个。检测的...
关键词：
建鲤 IGFBP1 SNP 增重 相关性
[期刊] 华北农学报
[作者]
李红霞 李建林 唐永凯 俞菊华 阮瑞霞 魏可鹏 夏正龙 董在杰
应用RT-PCR及PCR分离到鲤鱼2个jlGHSR2s基因,jlGHSR2a和2b,分别编码366,367个氨基酸,相似性高达98%,和金鱼、斑马鱼GHSR2的相似性高达95%。jlGHSR2s基因的内含子位于起始密码子793 bp后,2a和2b内含子的长度和序列均存在明显差异。试验首次发现了jlGHSR2a的转录变体(Variant)jlGHSR2a',由选择性剪切靠近内含子的57 bp外显子1和保留靠近外显子2的28 bp内含子构成,编码350个氨基酸,缺失最后2个跨膜区,剪切序列两端碱基为CT-AC。荧光定量RT-PCR结果表明,jlGHSRs在脑和精巢表达量最高,1s在检测的组织均有表...
关键词：
建鲤 生长激素促泌素受体 转录变体 表达
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李红霞 刘楠楠 浦天宁 魏可鹏 俞菊华 李建林 唐永凯
机体生长主要受到促生长激素释放激素—生长激素—胰岛素样生长因子(GHRH-GH-IGFs)生长轴调控,类胰岛素生长因子IGF-Ⅰ是生长激素(GH)发挥生物学功能的重要传导因子。实验特异性扩增了建鲤(Cyprinus carpio var.jian)IGF-Ⅰa基因的5个外显子和3个内含子(内含子1、内含子3和内含子4)。通过比对10尾建鲤的序列,共找到SNPs位点8个。使用PCR-RFLP方法检测了5个家系共372尾建鲤的内含子1_C175G,12个家系共987尾的内含子1_A993G和内含子4_A511C 3个位点。内含子1_C175G雌雄个体均以GG型频率为最高,分别是0.44和0.43;...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
马晓 胡毅 熊钢 何湘蓉 王晓清
生长激素(growthhormone,GH)参与动物的生长、发育等代谢过程.GH发挥生理作用,首先是与靶细胞膜表面的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合,启动细胞内信号传导,促进胰岛素样生长因子(Insulin_like growth factor,IGF_I)的表达,再通过血液循环到达生物体局部组织,促进细胞的代谢过程.GHR是一种特异、高效的膜蛋白.GHR对GH的功能发挥有重要的影响,其在细胞内的表达量对生长激素发挥作用有重要影响,从而影响了生物器官组织的生理功能.就生长激素受体及生长激素受体基因的研究进展进行综述.
关键词：
生长激素受体 基因 结构 表达 调节
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马骞 柳淑芳 庄志猛 唐启升
根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物,用于扩增半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因序列。随后,分别利用表达载体pET-32a和pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ基因ORF全序列及不同ORF片段的6个重组质粒,并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示:重组GH的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带,重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSG...
[期刊] 水产学报
[作者]
邓利 张为民 林浩然 郑汉其
采用黑鲷生长激素（ｓｅａｂｒｅａｍ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ，ｂｒＧＨ）放射免疫测定法（ｂｒＧＨ ＲＩＡ）及黑鲷生长激素放射受体测定法（ｂｒＧＨ ＲＲＡ），研究了不同季节（３月、６月、９月及 １２月）黑鲷血清ＧＨ水平及肝脏和性腺中生长激素受体（ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＨＲ）水平的变化，同时测定了黑鲷白肌及肝脏ＲＮＡ－ＤＮＡ比率及黑鲷肥满度（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，Ｋ）和性腺指数（ｇｏｎａｄｏｓｏｍａｔｉｃ ｉｎｄｅｘ，ＧＳＩ）的季节变化。黑鲷血清ＧＨ水平于６月出现高峰，显著高于３月、９月至１２月的水平（Ｐ＜０．０１）。黑鲷肝脏中ＧＨＲ水平在９月及１２月显...
关键词：
黑鲷 生长激素 生长激素受体 季节变化
[期刊] 水产学报
[作者]
孙效文 梁利群 闫学春 曹顶臣
报道了转生长激素基因鲤阳性群体的建立和"超级鲤"的获得。给出了"超级鲤"和对照组连续4年的生长实验结果及"超级鲤"子代连续3年的生长对照的体重数据。结果显示,外源生长激素基因对受体鲤具有快速生长效应,但具有这种超速生长作用的个体在转基因鲤群体中占极少数。此效应能传递给子代,子代中快速生长个体的比例大大高于转基因实验群体。
关键词：
鲤 生长激素基因 快速生长效应
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李雨萌 洪盼 兰海楠 吴天成 郑鑫
【目的】制备生长激素受体的单克隆抗体，探讨其对生长激素受体的激活作用，为研究生长激素模拟物提供新思路。【方法】以生长激素受体胞外域（ＧＨＢＰ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，通过杂交瘤技术制备抗生长激素受体的单克隆抗体，用流式技术筛选抗体，通过流式、激光共聚焦显微镜观察研究该单克隆抗体对生长激素受体的激活作用，然后通过Ｗｅｓｔｅｒｎ－ＢＬｏｔ等技术手段研究其胞内的信号通路。【结果】通过杂交瘤技术共获得了３０个分泌抗生长激素受体的单克隆抗体，经流式分析筛选到具有受体激动剂活性的单克隆抗体（命名为Ｌ８）。竞争性结合分析结果表明，Ｌ８在受体上的结合表位与生长激素重叠；激光共聚焦观察结果表明，Ｌ８不但能结合到细胞．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
马广智 林浩然 张为民
采用ＣｄＣｌ２浸没法处理鲤，研究镉对鲤血清促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）水平的影响。结果表明：较高浓度镉（ＣｄＣｌ２９ｍｇ／Ｌ）处理引起血清ＧｔＨ水平降低，ＧＨ水平升高；提高水中钙浓度，能使由镉引起的ＧｔＨ水平的降低恢复到正常水平，并对镉引起的ＧＨ水平升高起延迟作用；镉处理使鲤对ＬＨＲＨ－Ａ刺激ＧｔＨ分泌的反应性下降，提高水中钙浓度也不能恢复正常。实验结果提示：镉引起的ＧｔＨ和ＧＨ的变化可能主要是镉干扰了钙的生理作用。
关键词：
镉,鲤,促性腺激素,生长激素
[期刊] 水产学报
[作者]
刘士力 贾永义 刘加林 郑建波 迟美丽 程顺 蒋文枰 顾志敏 赵金良
为了更好地研究翘嘴鲌两种生长激素受体(GHR)的结构和功能,实验以翘嘴鲌转录组中获得的mRNA为基础,对其DNA序列进行了克隆。在进行生物信息学分析的同时,对其中的多态性微卫星位点在120尾同批繁殖、同塘养殖的翘嘴鲌个体中进行了分析。GHR1的cDNA序列长度为3 498 bp,开放阅读框(ORF)为1 818 bp,编码605个氨基酸;GHR2的cDNA序列长度为1 743 bp,ORF为1 743 bp,编码580个氨基酸;GHR1和GHR2氨基酸序列均由信号肽、胞外区、跨膜区、胞内区组成,相似度为37.2%。二者在结构上存在较大的差异:GHR1胞外区有7个半胱氨酸残基,而GHR2只有5个,且GHR1比GHR2多3个N-糖基化位点;在胞内区,GHR1存在10个酪氨酸残基而GHR2只有5个,这些差异表明二者可能具有不同的生物学功能。同源氨基酸序列比对发现,GHR与其他鲤科鱼类的同源基因保守性较高。翘嘴鲌2个GHR各包含9个内含子,其中GHR1内含子1和2序列在10 kb以上,本实验没有对其进行扩增。所获得的序列中共发现了6个微卫星位点:GHR1中微卫星位点(CT)_6位于第2外显子中,为信号肽编码序列的一部分,位于第8内含子中的(AC)_5经检测没有多态性;GHR2中具有4个微卫星位点,位于第1内含子中的(TG)_5及第7个内含子中的(TATC)_5(AT)_(15)(AC)_(11)(AT)_(14)(TG)_6和(TA)_(15)属于高度多态性位点(PIC>0.5),第6个内含子中的(GAAG)_5属中度多态性位点(PIC=0.463)。第7内含子中的2个微卫星位点检测到基因型数目分别为50和61,具有良好的个体识别潜力。关联分析结果表明这4个多态性微卫星位点与生长性状具有一定相关性。翘嘴鲌GHR基因的克隆以及序列中微卫星的特征分析为深入研究其生物学功能及分子标记辅助育种提供助力与参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 夏正龙 董在杰
为获得与建鲤增重相关的分子标记进行建鲤分子育种,实验在建鲤心肌型脂肪酸结合蛋白(FABP)基因上筛选了与增重相关的SNP位点。首先使用PCR扩增到2个建鲤FABP3基因,jlFABP3a和3b基因,两个基因均有4个外显子和3个内含子组成,3a和3b阅读框相似性为93%,编码133个氨基酸,相似性为94%,内含子长度和序列存在着明显差异。jlFABP3的系统进化和传统的分类地位一致。通过序列比对,在3a和3b上分别找到26和25个SNP位点。构建PCR-RFLP法检测了其中3个SNPs在建鲤群体中的分布,并与增重进行相关分析,结果显示,C30G与检测群体雌、雄鱼鱼种阶段和雌鱼成鱼阶段增重显著相关...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李发弟 夏东 陈杰 赵茹茜
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马细兰 张勇 刘晓春 林浩然
选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰度。结果表明,30～110日龄,雄鱼特定生长率呈不断上升趋势,至80～110日龄达到最高,之后开始下降;雄鱼肝脏中2种GHR基因表达的发育性变化趋势不相同,30～110日龄,GHR1mRNA表达逐渐上升,110日龄达到最高,随后开始下降,其发育性变化与特定生长率显著正相关(R=0.96,P<0.01);GHR2mRNA表达在60...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 杨弘 董在杰 夏德全 史瀛仙 季肖东 沈玉 孙伟勇
采用显微注射方法，将带有小鼠ＭＴ－１基因启动顺序与人生长激素ｈＧＨ基因顺序重组的线状ＤＮＡ片段，注入团头鲂和鲤的受精卵，获得成活的实验鱼。经斑点、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫和酶联等方法检测，表明外源基因在受体鱼中得到整合、转录、翻译和表达，并具促生长效应。转基因雌鱼和雄鱼有性繁殖所获得的子鱼带有外源基因，表明外源基因能通过性细胞传递给子代，并仍具促生长效应。
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