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[期刊] 水产学报
[作者]
郭长明 袁橙 武彩红 朱善元 刘广锦 陆承平 刘永杰
以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型,比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异,利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定,以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株GD201008-001、A909的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率,比较二者致病性差异;提取全菌蛋白,经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定,质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库(Uni Prot数据库)鉴定及定量分析,
[期刊] 水产学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 陈明 周宇 谭芸 甘西
为研究罗非鱼感染无乳链球菌前后肝脏组织蛋白质的表达变化。本研究以吉富罗非鱼为材料,采用双向电泳技术分析其在无乳链球菌感染胁迫下24 h、48~144 h、12 d与对照组(未感染)肝脏组织蛋白质组的变化,对差异表达蛋白进行质谱分析鉴定。结果显示:吉富罗非鱼在无乳链球菌胁迫下,3个实验组的蛋白质图谱与对照组相比存在显著差异,共有30个蛋白质点发生显著改变,其中13个表达上调,15个下调,2个蛋白质点在感染12 d后消失。通过MALDI-TOF/TOF 4800质谱分析和数据库检索对这些蛋白质进行了功能分类,发现它们涉及到能量代谢、细胞防御与应激、消化免疫、抗氧化与排毒等许多方面。推测这些蛋白质可...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘家星 汪开毓 陈德芳 刘韬 贺扬 曾宇鲲 蒋洁
为检测罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白ＥＦ－Ｔｕ（延伸因子Ｔｕ，ＥｌｏｎｇａＴｉｏｎ ＦａｃＴｏｒ Ｔｕ）的抗原性，本实验克隆了罗非鱼源无乳链球菌Ｈｎ０３０３的ＥＦ－Ｔｕ基因序列，并进行了蛋白相关性质的预测和系统发育树的构建。通过原核表达得到ＥＦ－Ｔｕ重组蛋白，同时利用纯化的蛋白免疫家兔获得多克隆兔抗ＥＦ－Ｔｕ重组蛋白血清以用于ＥＦ－Ｔｕ蛋白抗原性检测。结果显示，罗非鱼源无乳链球菌Ｈｎ０３０３ ＥＦ－Ｔｕ基因有１个由１１９７个碱基组成的ｏｒＦ，编码３９８个氨基酸。生物信息学分析显示其分子式为ｃ＿（１９３３）Ｈ＿（３０９６）ｎ＿（５３２）ｏ＿（６１５）Ｓ＿（１１），分子质量为４３．９８１ ｋｕ，理论等．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘鸿艳 张耀光 张松林 沈志强 马永彪
为评价罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)BX2012株脂蛋白(lipoprotein)的免疫原性及其对奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的保护效果,以无乳链球菌脂蛋白基因序列(GenBank序列号:CP000114.1,SAK_0321)的B细胞线性抗原表位区设计特异性引物进行扩增,构建重组表达载体,将截短表达的脂蛋白制备成亚单位疫苗,同时制备灭活疫苗进行免疫比对。结果显示:重组表达载体p ET-32
[期刊] 水产学报
[作者]
陈雪 可小丽 卢迈新 刘志刚 高风英 朱华平 曹建萌
LrrG蛋白是无乳链球菌较保守的表面蛋白之一。为获得罗非鱼源无乳链球菌LrrG蛋白并探讨其在罗非鱼体内的免疫原性,本实验根据GenBank中已报道的人源无乳链球菌LrrG基因序列,设计特异性引物,扩增获得罗非鱼源无乳链球菌的LrrG基因。分析表明,其ORF为2 361 bp,编码786个氨基酸,与人源无乳链球菌LrrG基因核苷酸序列的相似性高达98.48%。LrrG蛋白含有3个保守的LRR结构域,并可形成多个抗原表位。将LrrG基因片段克隆转入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)/LrrG,E.coli BL21(DE3)22℃诱导表达6 h。SDS-PAGE显示...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘念 孙研研 白皓 华登科 薛夫光 刘冉冉 李冬立 文杰 陈继兰
【目的】中国地方鸡种如北京油鸡、清远麻鸡存在喙畸形现象,表现为上下喙咬合不全,呈交叉状。严重影响鸡饮水和采食,从而影响个体发育和生产性能的发挥,造成一定经济损失。笔者根据喙畸形个体的系谱记录,发现喙畸形的形成受到遗传因素的影响,但具体机制尚不明确。蛋白是行使各种生物学功能的最终形式之一,喙畸形个体的发生可能是由于核心蛋白或者相关调控蛋白代谢异常造成的。利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)技术以及生物信息学分析方法,筛选鸡畸形喙与正常喙中差异表达的蛋白,作为喙畸形相关的重要候选蛋白,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
牟希东 徐猛 杨叶欣 顾党恩 罗渡 危起伟 胡隐昌
采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术对杀螺剂胁迫下福寿螺肝脏蛋白质组进行研究,以期从蛋白质组学水平了解福寿螺对杀螺剂四聚乙醛的胁迫应答。结果鉴定到108个具有定量信息的差异蛋白(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘观斌 王淼 卢迈新 可小丽 刘志刚 朱华平 高风英 曹建萌
从尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）肠道内容物中分离筛选出具有反硝化能力并拮抗无乳链球菌（ｓｔｒｅｐｔＯｃＯｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）的芽孢杆菌好氧菌株，并对其中拮抗性最强的１株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、１６ｓ ｒｒｎａ基因序列鉴定，进一步研究其最适生长条件、水解淀粉和蛋白的能力，并进行菌株药物敏感试验及安全性检测。经鉴定，筛选出的菌株（命名为ｎＹ ５）为蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）。在反硝化性能检测培养基中接种１％的ｎＹ５菌液后，对５０ ｍｇ／ｌ的亚硝酸盐氮１２ ｈ去除效率达到１００％；对本实验室保存的２１株不同来源的无乳链球菌均有拮抗作．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
赵长臣 江小燕 刘春花 张德峰 罗霞 曾伟伟 陈总会 黄志斌
为查明梭鲈(Lucioperca lucioperca)凸眼病病原,从患病梭鲈病灶眼、肝、脾和肾分离纯化病原菌,进行了生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析,并开展人工感染试验,测定其血清型及MLST分型,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。结果显示:分离菌株(命名为SL1701株)为本次引发梭鲈病害的致病菌,Ib-ST261型。回归感染实验证实,分离得到的细菌SL1701对健康梭鲈具有非常强的致病性,4.5×105CFU/m L时可使80%受感染梭鲈死亡,并可复制出自然发病鱼的症状。菌株SL1701革兰氏染色为阳性链球菌,γ溶血,生理生化特性与普通无乳链球菌基本一致,16S rRNA基因序列与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)同源性最高,综合判定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。药敏试验结果显示:分离菌株SL1701对氟苯尼考、氟罗沙星等17种抗生素高度敏感,对青霉素、磷霉素等8种抗生素耐药。结果表明,分离菌株SL1701为Ib-ST261型无乳链球菌,养殖时可选用氟苯尼考及氟罗沙星等药物进行防控。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨永新 王加启 卜登攀 张乐颖 李珊珊 张春林 周凌云
为分析初乳与常乳乳蛋白的表达变化,揭示乳蛋白分泌及乳腺易感疾病的机理,采用二维凝胶电泳结合液相色谱串联质谱的方法分析了产后第1天、第7天和第21天牛乳中蛋白表达变化。结果发现,相对于第7天和第21天牛乳蛋白的表达丰度,第1天牛乳蛋白中有5个蛋白表达量增加;而第7天与第21天牛乳蛋白表达无变化。且第1天牛乳蛋白表达量增加的是具有免疫活性的免疫球蛋白M和G以及运输功能的白蛋白和转铁蛋白等。结果表明由初乳向常乳转换过程中,这些乳蛋白表达量的降低可能与乳腺易感乳房炎等疾病相关。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高明明 王淑杰 刘永刚 姜成刚 王刚 涂亚斌 蔡雪辉
【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白,以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品,应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系,并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结果】获得了分辨率及重复性良好的双向电泳(2-DE)图谱,且得到3个具有免疫反应性的蛋白质点,经质谱鉴定其归属于1个蛋白,即乳酸脱氢酶(LDH)。生物信息学预测表明,该蛋白分子质量为35 420ku,理论等电点为5.05,具有2个跨膜区,分别位于第10~28位和第110~129位,并根据预测分析结果成功模拟了蛋白质的三级结构。【结论】从猪链球菌WH07菌株中筛选并鉴定了1...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高明明 王淑杰 刘永刚 姜成刚 王刚 涂亚斌 蔡雪辉
【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白，以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品，应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系，并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结果】获得了分辨率及重复性良好的双向电泳（2DE）图谱，且得到3个具有免疫反应性的蛋白质点，经质谱鉴定其归属于1个蛋白，即乳酸脱氢酶（LDH）。生物信息学预测表明，该蛋白分子质量为 35 420 ku，理论等电点为5.05，具有2个跨膜区，分别位于第10～28位和第110～129位，并根据预测分析结果成功模拟了蛋白质的三级结构。【结论】从猪链球菌WH07菌株中筛选并鉴定了...
[期刊] 水产学报
[作者]
王蓓 简纪常 鲁义善 蔡双虎 黄郁葱 汤菊芬 李桂欢 吴灶和
为了对罗非鱼源无乳链球菌ZQ0910株毒力相关转录调控因子rovS进行克隆及表达研究,实验根据GenBank上登录的相关基因设计引物,采用PCR方法扩增该株细菌的rovS基因,然后将该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果显示,该基因有849个碱基,编码282个氨基酸;同源基因序列比对显示,无乳链球菌ZQ0910株与无乳链球菌2 603 V与ATCC13813的rovS基因的同源性最高;经IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为34 ku;用亲和层析后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经ELISA检测效价达到1∶51...
[期刊] 华北农学报
[作者]
阚威 王华 马友记 赵兴绪 张勇
为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列,经ORF分析和B细胞表位预测,利用Primer 5.0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物,添加酶切位点和真核表达元件,以分离株无乳链球菌的基因组为模板,PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序,经测序确定无误后,连接pcDNATM3.1 V5-His A(pcDNA-cfb)真核载体,转化DH5α感受态细胞,提取...
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