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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李大志 陈霄 邓子牛 杨宇红 熊兴耀 谢丙炎
应用cDNA-AFLP技术研究番茄根部组织应答BABA(β-Aminobutyric Acid,β-氨基丁酸)诱导后基因转录谱,得到与植物获得性抗性相关的差异表达片段29条,克隆测序后获得10个上调基因片断.经过生物信息学分析和功能预测,其同源基因都是植物体在抗病、抗逆反应中的表达序列标签.根据功能可将其分为5类:第1类是防御反应基因,为病程相关蛋白基因P69家族成员,具有蛋白水解酶功能;第2类是转运蛋白基因,负责细胞内外离子、水和小分子物质的跨膜运输;第3类是信号传导蛋白,是Ca2+信号传导途径上重要的功能蛋白;第4类是分子伴侣蛋白BIF1,协助蛋白质的复性;第5类属功能未知基因.研究表明:...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭秀林 张正斌 李景娟 李广敏
cDNA-AFLP技术是以mRNA反转录的cDNA为模板进行AFLP分析,在保留AFLP多态性丰富、稳定性高、无需了解序列信息等优点的同时,集中显示了基因组表达序列的多态性差异,可对生物体转录组进行全面、系统的分析,并已成功地用于基因差异显示、表达基因遗传连锁作图和基因克隆等方面。文章综述了cDNA-AFLP在植物抗逆性相关基因表达特性分析及基因分离方面的应用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
霍秀爱 杨炳艳 刘云婷 段会军
为了探讨乙烯利调控玉米生长的分子机理,以郑单958为材料,拔节期叶面喷施225 mL/hm2浓度的乙烯利,同体积清水为对照。在不同时间取茎端分生组织样品,采用cDNA-AFLP(RT-PCR)进行基因差异表达分析。结果表明,利用70条引物共扩增1 635条片段,其中上调表达的有600条,占总条带的36.7%;下调表达的有564条,占总条带的34.5%;无差异表达的有471条,占总条带数的28.8%。选择重复扩增稳定的30条差异片断进行回收测序,经过BlastX比对分析这些差异表达基因片段,按功能可分为信号转导相关基因(6.7%)、抗性相关基因(16.7%)、能量与代谢相关基因(20.0%)、转...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张军科 杜敬 李爽 朱自果 王跃进
【目的】从环化的中国华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后的叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因序列。【方法】根据植物抗病基因在氨基酸水平上的保守结构域NBS的P-loop区和LRR设计特异引物,采用三维文库筛选法,对环化的葡萄白粉菌接种诱导后的叶片cDNA文库进行PCR筛选。【结果】共建组池24个,每个组池中含有单菌落768个,包含18432个克隆。从中筛选出具有抗病基因保守序列的阳性克隆585个,其中具有NBS保守序列引物筛选出330个,LRR保守序列引物筛选出255个。对获得的阳性克隆中的插入片段进行了测序,经生物信息学分析去除重复序列后,获得422条具有抗病基因保守结构域的基因...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张军科 王静 王跃进 张朝红 徐炎
【目的】从中国野生华东葡萄白河35-1经白粉菌接种诱导后叶片所构建的cDNA文库中,筛选抗病相关基因。【方法】根据植物抗病基因保守序列NBS位点设计特异引物,对葡萄白粉病接种诱导后的环化cDNA文库进行菌落PCR筛选,从随机挑选的大量菌落中筛选出82个PCR阳性菌落,提取阳性菌落的质粒进一步进行PCR检测确认,对确认的36个阳性质粒插入片段进行了测序。【结果】测序结果和序列生物信息学分析结果均表明,有3个基因序列与Genbank中的已知序列有较高的同源性,其中1个基因序列与葡萄抗白粉病基因(DT661587.1)序列同源性达99%,另外2个基因序列与水分胁迫下葡萄特异表达基因(DT031657...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨婷婷 赵凯 朱海山
以番茄抗病品系(CLN2037E)为研究材料,应用SMART技术构建晚疫病诱导的番茄叶片cDNA表达文库,并进行生物信息学分析。成功构建的cDNA文库的克隆数为2.3×109,重组率为96%,通过PCR检测,插入片段范围在0.1~2.0 kb之间。从文库中随机挑取110个克隆进行测序,最终得到107条差异表达ESTs序列。GenBank提交的序列号为GT742146-GT742150;GT865998-GT866099。利用BLAST进行同源性分析:75条ESTs与其他物种同源性较高,视为已知基因,功能涉及能量代谢的占42.7%、细胞内生命活动与信号传导的占10.7%、基因转录和翻译的占9.3...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李亚茹 王银磊 赵丽萍 杨玛丽 姜静 赵统敏 余文贵
对抗病基因进行抗性评价是番茄抗病育种的重要环节。选用６种抗病番茄材料和２种感病番茄材料，利用携带番茄黄化曲叶病毒（ＴｏｍａＴｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ，Ｔｙｌｃｖ）的烟粉虱对所选番茄材料幼苗接种病毒，统计分析各材料的病情指数、病株率和带毒率，鉴定不同基因型番茄材料的抗性水平。结果表明，所有接种材料中均可以检测到携带Ｔｙｌｃｖ，其中含有Ｔｙ－２和Ｔｙ－５基因的番茄材料对江苏地区Ｔｙｌｃｖ病毒种类抗性较好，Ｔｙ－３次之，Ｔｙ－１抗性相对较弱，Ｔｙ－３ａ在樱桃番茄中抗性强于大果型番茄。本试验为抗病育种过程中对抗病基因的选择提供了一定的参考依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宁玉波 王红艳 乔康 刘秀梅 王开运
【目的】诱导抗病剂可以诱导寄主植株产生系统抗病性，具有持效性和广谱性的特点。论文以番茄植株为模式植物，番茄灰霉菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）为目标菌，进行温室盆栽试验，以期明确灵芝多糖诱导剂对番茄灰霉病的诱导抗性。【方法】用一定质量浓度的灵芝多糖溶液（５０、１００、２００和４００ ｍｇ·Ｌ～（－１））喷雾处理盆栽番茄植株第１、２片真叶（正反面），每２ ｄ喷施１次，共诱导３次，最后一次诱导２ ｄ后全株喷雾接种供试菌孢子悬浮液（（１—２）×１０～６个孢子／ｍ Ｌ），对照组施用等量清水代替灵芝多糖溶液，与各处理平行喷雾接种番茄灰霉菌孢子悬浮液。在接种孢子悬浮液之前用注射器将番茄苗茎基部刺伤，．．．
关键词：
灵芝多糖 番茄 灰霉病 诱导抗性 防御酶
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘榛 张延安 化娟莉
本研究对来自10个国家,国内27家单位抗黄化曲叶病毒病的239个番茄品种进行抗病基因的分子鉴定并分析,结果表明:Ty-1和Ty-3a是当前番茄抗黄化曲叶病毒病育种中利用的主要基因,携带复合基因的杂种也主要是这两对基因的利用。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
余朝阁 周娣 李琳琳 张亢亢 李天来 刘志恒
为探索化学诱抗剂诱导番茄抗灰霉病与钙的关系,采用水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、β-氨基丁酸(BABA)和龙胆酸(GA)分别处理番茄秧苗第3叶片,处理后0,1,2,3,4,5d分别取番茄第3叶片(诱导叶)和第5叶片(非诱导叶),测定可溶性钙和全钙含量。同时,在诱抗剂处理后第5天,用灰霉菌(Botrytis cinerea)接种第3叶片和第5叶片,然后调查发病程度。结果表明:诱抗剂处理均显著降低番茄诱导叶和非诱导叶的病情指数,处理后诱导叶和非诱导叶病情指数分别比低于对照17.6%~32.6%和11.1%~31.8%;诱抗剂处理同时显著提高诱导叶片和非诱导叶片中可溶性钙含量、全钙含量及可溶...
关键词：
化学诱抗剂 诱导抗病 番茄灰霉病 钙含量
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谭卫萍 庞学群 张昭其 黄雪梅
【目的】研究β-氨基丁酸(BABA)对采后香蕉果实抗病性的诱导作用和贮藏期果皮活性氧含量、抗病相关酶及基因表达量的变化,为探索抗病保鲜新技术提供理论依据。【方法】香蕉果实经5 g·L-1 BABA溶液低压渗透处理,或预先用3.14 mg·L-1的二苯基碘(活性氧合成酶NADPH氧化酶的专一性抑制剂,diphenylene iodonium,DPI)低压渗透,再做BABA溶液低压渗透处理。处理后0、3、6、12、24、48、72 h分别接种2?105个/mL炭疽病菌孢子于果皮上,并测定接种果实在(20±2)℃、85%—95%湿度(RH)下贮藏5—16 d的病斑直径;测定处理24 h后接种果实在(...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曹士先 程曦 蒋正中 盛亮 上官明珠 邓威威 韦朝领
【目的】发掘茶树被茶尺蠖取食诱导的相关防御基因及其分子防御机制。【方法】利用cDNA-AFLP筛选茶树叶片被其主要害虫茶尺蠖取食后差异表达片段(transcript-derived fragment,TDF),并对其进行生物信息学分析和相关验证;运用qRT-PCR(quantitative real-time PCR)研究部分差异基因的表达规律。【结果】茶树被茶尺蠖取食后,共发现231条TDF,经PCR验证和测序后,成功获得134条EST(expressed sequence tags)序列,其中上调与下调表达的TDF数量分别为81和53条,各占测序获得序列的60.4%与39.6%;利用BLA...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄河 王顺利 戴思兰
【目的】筛选菊花中抗白锈病相关基因,研究菊花抗白锈病的分子机理。【方法】以菊花中对白锈病完全免疫的品种‘紫荷’为供试材料,对其叶片喷施106个白锈病冬孢子/mL蒸馏水,处理时间梯度为0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,使用cDNA-AFLP技术分析这一接种过程中的差异表达基因,并采用RT-PCR方法对表达结果进行验证。利用RACE技术克隆其中重要蛋白基因的cDNA全长,采用MEGA 4.0程序进行序列分析。【结果】利用76对引物组合,共筛选出了约4 950条差异表达的cDNA片段,对其中80个表达差异显著的片段进行测序,最终得到51个差异片段的核苷酸序列。...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 傅星源 连森阳 李昂
【目的】寻找与番鸭就巢性状相关的表达基因,了解其就巢调控的分子机理。【方法】采用cDNA-AFLP(cDNA-amplified fragment length polymorphism)技术分析遗传背景相近的RF系白羽番鸭就巢个体和非就巢个体脑垂体基因表达差异。【结果】筛选到与就巢行为相关差异表达片段82条,选取其中15条进行测序。将测序结果在GenBank数据库进行BLAST比较和分析,发现8个片段(53.3%)与已知基因具有较高同源性,涉及与繁殖性能紧密相关的下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)上的功能基因,如GnRH基因、FSH基...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
汪智渊 吴汉章 薛宝娣 陈永萱
以土壤农杆菌为介导，用叶盘法转化获得的转ＣＭＶ－ＣＰ基因（黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因）番茄工程植株，通过连续选择和自交，得到Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４和Ｒ５代的转化番茄植株。１９９３～１９９４年采用人工接种和田间自然发病两种方式鉴定转化植株对ＣＭＶ病毒的田间抗性。结果表明，转基因番茄植株对ＣＭＶ侵染有高度抗性。人工接种Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４代转化植株的防病效果达５０％～７３％。有５０％以上的转基因植株始终未被ＣＭＶ病毒侵染，表现为免疫抗性。自然条件下，Ｒ２～Ｒ５代转化植株的防病效果达５７％～７９％。转化植株的产量比对照人工接种的高１０～６０倍，比自然发病的增加５倍以上
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