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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张红琳 杨利国 王诚
采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一条相对分子质量为 32 0 0 0的带 ,SDS PAGE电泳分析发现有两条相对分子质量分别为 14 0 0 0～ 15 0 0 0和 170 0 0～ 180 0 0的带 ,即β、α亚基。
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然
通过免疫亲和层析对类猪圆环病毒因子P1纯化进行了研究。采用环氧活化及NHS活化的琼脂糖凝胶,与兔抗P1表位肽抗体偶联,对P1进行了免疫亲和吸附,通过电镜技术证实获得了纯化病毒。结果表明,免疫亲和层析是有效的P1病毒纯化方法。
关键词：
类猪圆环病毒因子P1 纯化 免疫亲和层析
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张红琳 杨利国 李斌 茆达干
通过分离纯化卵泡抑制素受体,确定其受体类型,旨在为抑制素的作用机制研究奠定基础。采集30头长白猪垂体组织制备膜蛋白,用亲和层析法从该蛋白组分中分离、纯化出抑制素受体。SDS-PAGE结果发现该受体提取物中有6种蛋白,分子质量从14 ku到130 ku不等,表明抑制素受体可能不是特异性的单一受体,而是共受体。改良的ELISA结果证实,该受体提取物特异性活性为99 U/mg,能与抑制素结合,且与剂量呈正相关(R=0.993)。
关键词：
猪 抑制素 亲和层析法 受体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施振旦 李明 刘丽 黎敏义 秦清明
【目的】通过免疫抑制素和卵泡抑素促进精子发生,在夏季热应激状态下保持公猪精液品质。【方法】在夏季热应激状态下对精液品质出现下降的成年种公猪单独免疫抑制素、或联合免疫抑制素α亚基和卵泡抑素重组蛋白(n=6)3次,每次间隔21 d;然后在9周试验期间定期采血测定血液抗体效价、FSH和睾酮浓度,每周采精观察精子活力和精子密度作为精液品质指标。【结果】抑制素单独免疫、抑制素和卵泡抑素联合免疫都使猪血液中抗抑制素的抗体效价显著高于对照组值(P<0.01),联合免疫也使猪血液中抗卵泡抑素的抗体效价显著高于对照组值(P<0.01)。单独免疫或联合免疫都显著升高了血液FSH浓度;联合免疫还升高了血液睾酮水平。...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马雪云 韩建秋 高淑霞 牛钟相
利用抗鸡C3 21肽抗体制备免疫亲和层析柱,对鸡补体C3d进行了分离,并采用间接酶联免疫吸附实验(间接ELISA),对洗脱液中的C3d组分进行了检测,以SDS-PAGE电泳方法对分离到的C3d进行了检测。结果表明,利用亲和柱层析能够分离得到纯度较高的C3d蛋白,为鸡血清中C3d的提取纯化提供了较为简便的方法。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
牛树理 叶荣 杨利国
为研究中和内源抑制素对排卵的影响，用猪精液抑制素粗品，对产后２￣５个月的２５头母黄牛进行主动免疫。粗制品用福氏完全佐剂乳化后间隔２０ｄ免疫两次。在配种后第１０ｄ对１１头发情母牛经直肠触摸卵巢，同时颈静脉采血。根据血清孕酮水平与排卵数之间的线性回归关系测定血清孕酮，采用直肠触摸黄体数推算排卵率。排２个以上卵的母牛占３６％（４／１１）。结果表明，用猪精液抑制素主动免疫黄牛可以提高其排卵率。
关键词：
抑制素 猪 精液 主动免疫 黄牛
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王水莲 薛立群 邓立新 崔先利 杨利国
【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组,每组肉牛分别注射0.75(T1)、1.5(T2)、2.25(T3)、3.0mg/头(T4)pcISI质粒、3.0mg/头pcMV-S空质粒(C1)和3mL/头生理盐水(C2),初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著(P<0.05);T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0.05);T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著(P<0....
关键词：
抑制素 基因免疫 卵泡 黄体 肉牛
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
梁田田 卢玉平 潘迎捷 方国锋 林昕 黄天娇 卢瑛
调查并比较了野生横纹东方鲀(Takifugu oblongus)与养殖的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)、暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)的毒性。随机选取17尾野生横纹东方鲀并用2%乙酸两次煮沸法提取各组织中河鲀毒素TTX,超滤离心去除杂蛋白,之后采用本实验室制备的免疫磁珠层析试纸条做定性检测,并对筛选出来的典型样本用国标小鼠生物法定量检测毒素含量与定性检测作对照,分析对比各组织TTX含量。野生横纹东方鲀肌肉和精巢TTX含量在0～7μg/g组织,由于个体差异处于无毒或弱毒水平;肝脏和卵巢TTX含量在4～400μg/g组织范围内,属于强毒水平;养殖菊黄东方鲀和暗纹东方鲀各组织均处于无毒水平。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王进荣 杨利国 王元兴
用人工合成人抑制素α亚基 (1 2 6Gly .Tyr)片段与KLH连接作完全抗原免疫产蛋三黄母鸡 ,用放免法测定排卵周期外周血中雌二醇和孕酮的水平 ,观察产蛋率的变化。宰杀后卵巢称重 ,各期卵泡分类计数。结果免疫组产蛋率、大白泡、小白泡和小黄泡数比对照组高 (P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何国声 顾越星 何波 徐梅倩 曹杰 朱顺海 黄维义
为了探明大片吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)的多肽组分和酶活力以供今后进行 GST 的免疫原性和各种蠕虫 GST 的交叉免疫原性的研究,本试验首次用亲和层析法对大片吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)进行提取,用 SDS-PAGE 分析了大片吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)的多肽组分,用1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为底物测定了 GST 酶活力.电泳染色结果表明,大片吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)至少有2条带,其分子量为29.9～24.5kD,其中主带2条,分别为28.3和26.2kD。酶活力测定结果表明,提取的 GST 可获得10.44μmol·min~(-1)·mg~(-1)以上的酶比活性.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
岳群华 袁建龙 郝斐 靳木子 王景园 杨文亮 刘东军 仓明
【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张小冬 程瑞禾 夏银
研究了抑制素主动免疫对母羊促卵泡素（ＦＳＨ）、促黄体素（ＬＨ）、孕酮（Ｐ）、雌二醇（Ｅ２）以及妊娠、产羔的影响。１５只发情季节考力代母羊平均分成３组：人抑制素α亚基（１－２６）Ｔｙｒ·Ｇｌｙ合成肽免疫组（Ｈ组）、猪精液抑制素免疫组（Ｓ组）和对照组（Ｃ组）。Ｈ组在初次免疫后即产生了抑制素抗体，第２次加强免疫后抗体滴度最高可达１∶６４０００。Ｓ组和Ｃ组均未产生可与人抑制素合成肽结合的抗体。Ｈ组母羊在第一次加强免疫后，血清ＦＳＨ和Ｐ的水平显著高于Ｃ组（Ｐ＜０．０５）。Ｓ组母羊Ｅ２浓度在初次和第一次加强免疫后显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。各组血清ＬＨ水平未有显著变化。Ｈ组和Ｓ组母羊妊娠期分别为１４８...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王立斌 王强龙 潘阳阳 黄振华 赵天 丁天翊 刘敏清 崔燕 余四九
【目的】研究地西泮结合抑制剂(diazepam binding inhibitor,DBI)在牦牛不同大小卵泡中的表达水平与定位,探讨DBI蛋白在牦牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采集牦牛卵巢组织,分离不同大小(直径<3 mm,直径3～8 mm,直径>8 mm)的卵泡。采用实时荧光定量方法(q RT-PCR)检测DBI基因m RNA在牦牛不同大小卵泡中的相对表达量,并利用蛋白免疫印迹技术(Western-blotting,WB)检测DBI蛋白的表达情况。采用免疫组织化学方法(immunohisto chemistry,IHC)定位DBI蛋白在雌性牦牛完整成熟卵泡中的分布情况。采用免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测DBI在牦牛卵母细胞中的定位。【结果】DBI基因m RNA和DBI蛋白在牦牛不同大小卵泡中均表达,但表达水平存在显著差异(P<0.05),表达量随着牦牛卵泡直径的增大而显著上升。DBI蛋白在牦牛成熟卵泡中的颗粒细胞、卵丘细胞均有分布;在卵母细胞中主要定位于细胞质、细胞核。【结论】DBI在类固醇激素合成与卵母细胞成熟过程中具有重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李超 梅承 朱玉林 薛建华 钟寿坤 麻柱 张胜利 施振旦
【目的】研究免疫抑制素提高奶牛超数排卵的效率以提高胚胎产量。【方法】免疫组首次免疫抑制素α亚基融合蛋白(1mg·头-1)与白油佐剂混合乳液,首免后第28、56d分别进行2次加强免疫,剂量为0.5mg·头-1。对照组同时注射生理盐水与白油佐剂的混合乳液。在第二次加强免疫后10d,采用FSH四日递减法进行超排处理,并根据母牛发情表现进行人工授精,试验一使用常规冷冻精液输精,试验二使用分离的雌性精子输精,输精后第7天进行冲胚。【结果】主动免疫抑制素能够有效提高血液抗抑制素抗体效价。试验一,免疫抑制素组头均获胚/卵总数为(15.8±2.8)枚,显著高于对照组(8.3±1.5)枚(P<0.05);头均可...
关键词：
奶牛 免疫抑制素 超数排卵 胚胎产量
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
姜卫星 刘友生 薛立群 陈小军 杨利国 王水莲
为探讨双拷贝抑制素pcISI基因疫苗纯度和剂量对肉牛黄体发育的影响,将150头同期发情的南阳黄牛随机分为8个试验组和2个对照组,试验组用pcISI按2种纯度、4种剂量(0.75、1.50、2.25、3.00 mg/头)进行免疫处理,2个对照组分别用空质粒和生理盐水进行处理;初次免疫21 d后进行加强免疫。结果表明:无论用高纯度还是低纯度疫苗免疫,2.25 mg/头剂量处理对黄体的作用效果最明显,且抗体水平与黄体发育密切相关,2.25 mg/头抑制素融合表达质粒组的黄体显著大于0.75 mg/头组(P<0.05),抗体阳性牛两侧黄体显著比抗体阴性牛的大(P<0.05)。
关键词：
肉牛 抑制素 基因免疫 黄体发育
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