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[期刊] 华北农学报
[作者]
李淼 李春玲 宋帅 杨冬霞
为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与噬菌体重组蛋白、糖基转移酶/荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC型硝酸盐/磺酸盐/碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性;2个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中...
关键词：
副猪嗜血杆菌 抑制性差减杂交 毒力基因
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴芳 蔡建平 陆承平 范红结
为寻找鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可能的毒力基因,以鸭疫里氏杆菌2型(RA2)毒力株RAF2及弱毒力株LY-58为研究对象,通过抑制性差减杂交(SSH)试验,从RAF2株中获得14个特异性差异基因片段。经同源性分析,其中6个差异基因片段分别与外膜蛋白、ATP结合蛋白、转录调节因子、氨基酸通透酶、胞外蛋白编码基因有同源性,为可能的毒力基因;4个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关;另外4个差异基因片段未找到同源序列。利用PCR对上述10个可能与毒力相关的差异基因片段在13株分别属于8个不同血清型RA中的分布进行了检测,结果表明除8型外,以上差...
关键词：
鸭疫里氏杆菌 抑制性差减杂交 毒力基因
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
周媛媛 张学谅 王静 陈欣 李睿 尹荣兰 王超 黄晨 尹荣焕
为探究副猪嗜血杆菌同一血清型不同菌株间毒力相关基因的差异以及LpxC基因的遗传特性,本试验设计35种毒力相关基因的特异性引物,对副猪嗜血杆菌血清型4型的两种菌株进行PCR验证,并将两株菌株的LpxC基因连接到T5载体上,转化到大肠杆菌感受态细胞中进行克隆及测序,得到921bp目的片段。在NCBI上进行比对分析,运用DNA star软件对LpxC基因进行核苷酸同源性比对,同时对LpxC基因编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明:35种毒力相关基因中除SapA基因,其余34种在两个菌株中共同存在,两株HPS的LpxC基因序列与各参考菌株之间的同源性均在97%～100%之间,说明LpxC基因在副猪嗜血杆菌中保守存在。系统进化树结果显示XM1602菌株LpxC基因与SH0165菌株处于同一分支,FS0035菌株LpxC基因与ZJ0906菌株处于同一分支。同时,菌株FS0035和XM1602的LpxC基因编码的蛋白质等电点分别为5.59和5.45;该蛋白质为亲水性蛋白,无跨膜结构;二级结构包括α螺旋、伸展链、β转角和无规卷曲。结果证实,同一血清4型,两株不同的副猪嗜血杆菌菌株在毒力相关基因上存在一定的差异;LpxC基因在两个菌株中保守性较高,变异性较低。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王大鹏 吴家强 于江 丛晓燕 杜以军 孙文博 张玉玉 时建立 李俊 周顺 王金宝
本文对副猪嗜血杆菌血清5型生长曲线进行了研究。结果表明:种子液接种后6 h开始进入对数生长期,培养24 h后活菌数达到最高峰,20～30 h活菌数维持在同一个水平,进入稳定期,30 h后活菌数呈现下降趋势,进入衰退期。该曲线提供了副猪嗜血杆菌生长规律,为疫苗研制提供了理论基础。
关键词：
副猪嗜血杆菌 血清5型 生长曲线 致病力
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵良友 高雪丽 刘超男 申海龙 姜南 万伟泉 吕晓萍 郑世民
为了探究副猪嗜血杆菌外膜脂蛋白编码基因vacJ在其致病中的作用,以血清5型临诊分离株HS49为研究对象,构建了vacJ基因缺失菌株(ΔvacJ),进而比较了野生株与缺失株在生长特性、对细胞的黏附及入侵和毒力等方面的差异。结果显示,与野生株相比较,缺失vacJ后的菌株生长速率明显下降,对PK-15细胞的黏附和入侵能力则明显降低,形成生物被膜的能力也显著下降。缺失vacJ菌株对Balb/C小鼠感染模型的LD_(50)是野生株的14倍,表明vacJ基因敲除后,副猪嗜血杆菌毒力明显下降。表明vacJ基因与副猪嗜血
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈欣 刘维哲 王超 黄晨 李睿 尹荣兰 陈媛媛 尹荣焕
副猪嗜血杆菌(HPS)是感染猪产生浆膜炎、关节炎、脑膜炎的病原菌,为明确辽宁省副猪嗜血杆菌tbp A基因的保守性、遗传变异情况以及功能,以复苏培养后的菌株为研究对象,利用细菌学常规技术和PCR方法对HPS及其血清型进行验证,将目的基因连接于T5载体上,并转化到大肠杆菌感受态细胞中,获得克隆质粒,对不同血清型该基因序列进行PCR鉴定。通过NCBI网站中BLAST进行序列比对,并且运用DNA star软件进行核苷酸同源性分析和遗传变异规律分析。通过在线软件对tbp A编码蛋白的氨基酸组成、分子量、等电点、亲疏水性以及二级结构等进行分析。结果表明:从保存菌的HPS中成功复苏了4型、5型、9型和14型菌株;经PCR扩增这4种血清型HPS的tbp A基因长度均为2700bp;tbp A基因与参考菌株核苷酸同源性范围为86.5%~97.9%,4型和5型tbp A基因与84~(-1)5995、84~(-1)7975、H425亲缘性较近,9型tbp A基因与SW124和174亲缘性较近;14型tbp A基因与NO.4亲缘性较近;4种血清型tbp A基因与瑞典菌株D74在两个不同分支上,具有较远的亲缘关系。4种血清型tbp A基因编码蛋白分别有874,871,918,915个氨基酸组成;等电点分别为9.51,9.30,8.65,8.76;该蛋白属于亲水性蛋白;该蛋白的二级结构主要由α螺旋、无规则卷曲和伸展链构成。tbp A基因与美国株84~(-1)5995(KT588784.1)、德国株H425(KT588778.1)、日本株NO.4(KT588774.1)同源性相对较高,亲缘关系较近,但是也存在一定的差异性,该结果可为建立HPS最新基因突变跟踪提供参考依据;同时,通过对tbp A蛋白进行生物学信息分析,为进一步研究tbp A基因的功能奠定了分子基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
宋帅 李春玲 杨冬霞 李淼
副猪嗜血杆菌可引起猪的格氏病,其不同毒力菌株分子水平上的差异还不清楚。从广东省不同地区猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1～H9),并对其16SrRNA基因进行鉴定和分析。经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定,所分离的9株细菌为阳性副猪嗜血杆菌,具有卫星现象和不溶血特征。用hhdA基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,所获得的hhdA基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165、HPS59的hhdA基因的同源性为98%～99%,获得的分离菌株hhdA基因的同源性为99.0%～99.9%,菌株H1(5型)、H2(5型)、H8(4型)、H9(12型)hhdA基因在遗传进化关系上处于同一进化分...
关键词：
副猪嗜血杆菌 hhdA基因 克隆
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋帅 李春玲 杨冬霞 李淼
为了明确副猪嗜血杆菌致病菌株的毒力相关因子,从广东省不同地区发病猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1~H9),并对其hhdB基因进行了鉴定和分析。结果显示,所分离的9株细菌经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定为副猪嗜血杆菌阳性,并具有卫星现象和不溶血特征。用hhdB基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,序列分析表明,所获得的hhdB基因序列与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165的hhdB基因同源性为99%,分离菌株hh-dB基因之间序列同源性为97.5%~99.8%,推导的氨基酸序列与少数放线杆菌、杜克雷嗜血杆菌的溶血素激活蛋白具有一定的相似性。RT-PCR扩增到了hhdB基因的目的条带,...
关键词：
副猪嗜血杆菌 hhdB基因 克隆 分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
忽占利 李军星 胡松华 王一成 袁秀芳 徐丽华
为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示:对磺胺类耐药的分离株比例高达86.30%,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65.75%,60.27%,50.68%,50.68%,46.58%,对大环内酯类耐药仅为28.77%。PCR分析显示:97.26%的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84.93%。其中喹诺酮类耐药基因Aac(6')-1b的检出率为76.71%,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为...
关键词：
副猪嗜血杆菌 耐药性 耐药基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
李军星 王一成 袁秀芳 徐丽华 曹会敏 申世川 张鲁滨
CDT毒素是多种革兰氏阴性致病菌的毒力因子。为了阐明CDT毒素在副猪嗜血杆菌不同菌株中的分布及其遗传变异情况,本试验对从浙江省不同地区猪场临床发病猪中分离到的41个副猪嗜血杆菌分离株进行了CDT基因PCR扩增,并对其中21个分离株CDT 3个亚基进行了基因测序及氨基酸序列分析。结果表明:所有41个临床分离株中都可以检测到CDT 3个亚基的基因,其中cdtA蛋白的氨基酸序列在不同副猪嗜血杆菌菌株中最为保守,同源性≥97.8%;cdtB及cdtC蛋白氨基酸序列变化较大,同源性均≥92.1%。其中cdtB亚基与牛DNase I活性关键位点的氨基酸残基具有一致性,且这些位点的氨基酸残基在不同菌株中高度...
关键词：
副猪嗜血杆菌 CDT 同源性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马艳平 张杰 陈豪泰 马丽娜 丁耀忠 杨生海 刘永生
副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPG)是鸡传染性鼻炎的病原菌。近年来,北京、陕西、四川等地证明了该病的发生。为了了解该病在山东省的流行状况,从山东德州地区5个鸡场的20只疑似鸡传染性鼻炎鸡体内共分离到6株细菌,经细菌分离培养、生化试验、鸡胚接种试验和16s rDNA基因序列分析等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。并经玻片凝集试验、Dot-ELISA、血凝试验分型研究,证实6株分离菌株均为副猪嗜血杆菌A型。从而为以后鸡传染性鼻炎的免疫治疗提供理论依据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
车勇良 陈如敬 王隆柏 江斌 吴学敏 刘玉涛 严山 庄向生 周伦江
【目的】建立一种可快速检测副猪嗜血杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。【方法】根据GenBank中副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白(PalA)基因序列,在其保守区域设计外引物、内引物和环引物用于LAMP检测。优化副猪嗜血杆菌LAMP检测的反应体系,在反应产物中加入SYBR GreenⅠ,对检测结果进行肉眼判定,建立副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,评价该检测方法的特异性、敏感性。用建立的副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法对临床分离的8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测。从疑似患副猪嗜血杆菌病的猪体内采集10种体液,用所建立的可视化LAMP检测方法进行检测。【结果】建立了副猪嗜血杆菌可视化LAMP...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高艳 张定全 杨增岐 梁留存 刘海金 吴朋朋 高小龙 常旭东 杜恩岐
【目的】建立快速检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法,以便能够对副猪嗜血杆菌病进行快速、准确的诊断。【方法】利用9株(Ea、Ec、Ew、A1、A2、B1、B2、C1、C2)副猪嗜血杆菌陕西分离株制备平板凝集抗原,用其免疫健康家兔制备血清抗体,建立副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法,对制备抗原的优势菌株进行筛选,并对该方法的特异性、敏感性、抗原最佳工作浓度进行检测。【结果】选出Ew株作为制备抗原的种子菌株,成功建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法;该方法具有良好的特异性和敏感性,抗原最适工作浓度为8×109 CFU/mL。采用本试验建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法对临床血清样品的检测结果与...
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋帅 李春玲 臧莹安 郭海祥 李淼 杨冬霞 徐志宏
为了建立一种准确、快速的副猪嗜血杆菌病原夹心ＥＬＩＳＡ检测方法，以副猪嗜血杆菌外膜蛋白Ｐ５的特异性单克隆抗体１Ｅ２作为捕获抗体，兔抗副猪嗜血杆菌多克隆抗体作为检测抗体，通过方阵滴定优化夹心ＥＬＩＳＡ检测方法最佳反应条件，并对该检测方法进行特异性、敏感性验证以及临床样品的检测应用。结果显示，该检测方法中单克隆抗体１Ｅ２最佳包被浓度为３．４３４μｇ／ｍ Ｌ，兔抗副猪嗜血杆菌多抗的最佳稀释浓度为３．３５０μｇ／ｍ Ｌ，用１０ ｍｇ／ｍ Ｌ明胶３７℃封闭１ ｈ优于其他封闭液，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多体最佳使用浓度为１∶４ ０００。该检测方法的特异性试验结果显示可检测出１５个血清型的副猪嗜血杆菌病．．．
关键词：
副猪嗜血杆菌 单克隆抗体 夹心ELISA
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡旭旺 刘正飞 陈焕春 吴斌 金梅林 Pat Blackall
从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到 32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌 16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增, 将 822bp扩增片段连入T 载体后测序, 再与GenBank(M75065 )中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株 16SrRNA序列的同源性为 97%以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis, Hps)。将其中的 15株按Kieletein Rapp Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清 5型 3株、血清 4型 4株、血清 13型2株、...
关键词：
副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 PCR 血清型
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