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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘萍花 方敦煌 吴祖建
通过筛选特异性引物,优化多重PCR体系中的Mg2+、d NTP Mixture、Taq DNA聚合酶浓度,退火温度等反应条件,建立了多重PCR同时检测4种病菌(烟草黑胫病菌、根黑腐病菌、猝倒病菌和立枯病菌)的技术体系,得到265、364、400和541 bp共4条特异性条带,对应的病菌分别为猝倒病菌、黑胫病菌、根黑腐病菌、立枯病菌.该检测体系的灵敏度可达10-2ng·μL-1基因组DNA.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
韩广涛 杨志辉 朱杰华 赵冬梅 韩彦卿
【目的】利用双重PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌(Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus)和黑胫病菌(Pectobacterium atroseptica)。【方法】根据GenBank上发表的马铃薯环腐病菌pCS1质粒上纤维素酶A基因序列,对比近缘种及马铃薯上几种重要病原菌的核苷酸序列,设计并合成了1对特异性引物CMS1/CMS2,将设计的引物与已发表的PCR检测马铃薯黑胫病菌特异性引物ECA1f/ECA2r结合,经过条件优化后,建立了双重PCR体系。【结果】利用引物CMS1/CMS2扩增出了1条913 bp的马铃薯环腐病菌特异性条带。检测灵敏度...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李斌
采用稀释平板涂布法对29份根际土样进行分离,共获得239株放线菌,采用平板对峙培养法筛选得到48株对烟草黑胫病菌有拮抗作用的菌株,占筛选菌株的20.1%,根据形态和培养特征,48株拮抗放线菌被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)和诺卡氏菌属(Nocardia),以链霉菌属为主,占拮抗菌的97.92%。对拮抗作用较好的4株放线菌进行了发酵液拮抗活性的测定,结果表明,4株放线菌平均抑制率为59.80%,其中菌株A27-12最高,为70.59%,菌株A30-19抑制率最低为50.00%,两者呈显著差异。4株菌株的温室盆栽防效测定结果表明,菌株A30-19效果最好,其平均防效为78.79%,与5...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周向平 肖启明 罗宽 巢进 田慧
为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑菌效果均在66%以上.根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌.
关键词：
烟草黑胫病菌 内生细菌 拮抗 定殖 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王革 郑小波 陆家云 李天飞
云南省烟草黑胫病菌对甲霜灵抗性的检测王革１郑小波１陆家云１李天飞２（１南京农业大学植保系，农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京２１００９５；２云南省烟草科学研究所）ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＲＥＳＩＳＴＡＮＣＥＯＦＢＬＡＣＫＳＨＡＮＫＴＯＭＥＴＡＬ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张丽芳 陈海如 方敦煌 赵兴能
烟草青枯病、黑胫病和猝倒病是烟草生产中的重要病害,常发生复合侵染。以3种重要烟草病原菌基因组DNA作为目的基因,分别设计3对特异性引物,通过优化引物和模板浓度,摸索扩增参数,建立了能同时检测3种病害的多重聚合酶链式反应(Multiplex polymerase chain reaction,mPCR)体系。结果表明,多重PCR能分别扩增出长度为461,364,265 bp的特异性目的条带,能同时检测3种病原菌DNA的最低检出限为1.01 ng/μL,该多重PCR检测体系反应准确、快速、高效,为同时检测以上3种烟草病害提供了新的方法,对烟草复合侵染病害的诊断和防治提供了重要的指导作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马国胜 高智谋 曹舜
【目的】探究烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的寄主范围,为烟草黑胫病菌的相关研究提供理论依据,为烟草黑胫病菌所致病害的综合防治提供决策依据。【方法】人工模拟烟草黑胫病菌在田间的侵染途径,采用菌丝块创伤和不创伤接种61种农作物及杂草的活体或离体组织,结合柯赫氏法则鉴定,对烟草黑胫病菌的寄主范围进行较为系统的大样本研究。【结果】烟草黑胫病菌在人工创伤条件下可侵染21科41属51种植物,在不创伤条件下可侵染10科15属16种植物,首次发现烟草黑胫病菌在人工创伤接种条件下可以侵染21科40属47种植物,在人工不创伤接种条件下可以侵染10科12...
关键词：
烟草黑胫病菌 人工接种 寄主范围
[期刊] 西南农业学报
[作者]
白羽祥 朱媛 杨焕文 王戈 徐照丽 李正风
【目的】探讨烟草根系分泌物中酚酸和有机酸对烟草黑胫病菌生长的影响,为明确根系分泌物组分与黑胫病菌互作机制提供理论依据。【方法】采用外源添加方法,比较了不同酚酸和有机酸对黑胫病菌菌丝生长、孢子囊产生量及游动孢子的影响。【结果】不同酚酸物质在低浓度时促进了黑胫病菌菌丝生长和孢子囊产生量,但随着浓度增加促进作用减小甚至转变为抑制作用;除高浓度香草酸和香豆酸直接抑制游动孢子释放,其他酚酸各浓度均表现为促进作用。除添加0.05 g/L苹果酸表现为促进作用外,其他有机酸对黑胫病菌菌丝生长具表现为抑制作用;苹果酸、乳酸
关键词：
烟草 黑胫病 酚酸 有机酸 菌落生长
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马国胜 高智谋
目的对烟草黑胫病菌的若干培养性状进行研究,进一步了解烟草黑胫病菌的培养特性的稳定性,为烟草黑胫病的相关研究和综合治理提供试验依据。方法从安徽10个主要生产烟草的市(县)多点采集发生烟草黑胫病的烟株,采用组织分离法进行病原菌分离,经纯化后获得69个烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae Breda de Haan var.nicotianae Waterh.)菌株,对其进行游动孢子囊的诱导、配对培养、生长特性测定等进行研究。结果烟草黑胫病菌的主要培养性状为:异宗配合,与标准相对交配型菌株配对培养可以产生有性器官;卵孢子球形,满器或不满器,雄器围生,藏卵器小;孢子囊多近球形,...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杜桂萍 周建国 邓金奇 罗宽 刘丹 蔡勇 肖启明
用平板菌落计数法确定7种抗菌素对烟草青枯菌生长和抑制杂菌的最高浓度,通过正交试验确定药剂的最佳组合:安必仙9.996×10-5μg/mL、氧氟沙星9.990×10-7μg/mL、罗红霉素2.998×10-6μg/mL、头孢拉定3.000×10-6μg/mL、乙酰螺旋霉素1.998×10-5μg/mL、克拉霉素2.999×10-5μg/mL、阿奇霉素1.999×10-6μg/mL.利用以上最佳浓度配比的选择培养基检测湖南湘西、永州、郴州烟田土样中青枯菌,结果表明:湘西土样中青枯菌含量较大,永州次之,郴州相对较少,与青枯病发生的严重程度呈正相关,其中加青枯菌拮抗菌肥土壤中的含菌量明显少于未加菌肥土...
关键词：
烟草青枯病 抗菌素 选择培养基 检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王革 郑小波 陆家云 李天飞
１９９４～１９９５年从云南省不同地区采集烟草黑胫病标本，经分离鉴定共获得烟草黑胫病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈ－ｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａ）１０４个菌株。交配型测定结果表明：烟草疫霉菌的Ａ２交配型在云南省占绝对优势，分离到的１０４个菌株中，８９株为Ａ２交配型，占总数的８５．６％；１４株Ａ０交配型，占１３．５％；１株为Ａ１Ａ２交配型（同宗配合），仅占０．９％。对同宗配合烟草疫霉菌株的同宗配合性状在无性和有性后代的遗传测定结果表明，该性状可在游动孢子后代和卵孢子后代稳定遗传
关键词：
烟草疫霉 交配型 分布 同宗配合 遗传
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王革 郑小波 陆家云 李天飞
将分离自云南省不同地区的２１株黑胫病菌（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｎｉｃｏｔｉａｎａｅＢｒｅｄａｄｅＨａａｎ）接种烟草品种Ｋ３２６、Ｇ２８和红大，测定其对不同烟草品种的致病力。经统计分析，发现其对烟草的致病力有差异。采用菌丝块创伤和不创伤两种接种方法测定致病力的结果不同。对不同地区的黑胫病菌间的致病力以及由烟草和非烟草寄主上获得的烟草疫霉菌株的致病力进行了比较，结果表明，云南省黑胫病菌的致病力较强，由烟草上获得的烟草疫霉菌株对烟草的致病力强于非烟草菌株。实验结果还发现，供试的３个烟草品种，以Ｋ３２６对云南省烟草黑胫病菌的抗病性最强，红大品种较感病。
关键词：
烟草黑胫病 烟草疫霉 致病力 云南省
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
李河 宋光桃 何末军 郝艳 周国英
为建立油茶Camellia oleifera根腐病菌层生镰刀菌Fusarium proliferatum的巢式聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系,扩增层生镰刀菌核糖体DNA基因间隔序列(ITS)区并测定其序列,比较该序列与GenBank中近似种的ITS序列差异,设计了特异性引物GF1和GR2,利用该对引物与ITS1和ITS4进行巢式PCR扩增检测层生镰刀菌。结果显示,巢式PCR对层生镰刀菌的检测灵敏度可达100ag基因组DNA,比常规扩增方法提高了1万倍。利用设计的GF1/GR2特异性引物与ITS区通用引物进行巢式PCR扩增,可灵敏地扩增出油茶根腐病菌层生镰刀菌DNA。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李欣 崔秀明 刘迪秋 孙恬 郭爱玲 陈军
为了建立一种准确、快速检测三七根腐病病原真菌尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR方法,基于尖孢镰刀菌脂肪酸ω-羟化酶基因设计了实时荧光定量PCR的特异性引物对Fo-QF和Fo-QR,制备了该基因的重组质粒标准品,建立了尖孢镰刀菌的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。从三七种植区采集到14个具有根腐病、黑斑病典型症状的三七病株及三七种植土壤样品,并提取了这些样品的总DNA,运用本研究建立的荧光定量PCR方法进行了检测。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法特异性强,脂肪酸ω-羟化酶基因只以尖孢镰刀菌DNA为模板扩增出特异的PCR产物。此外,该方法灵敏度高,检测模板浓度可低至0. 35 pg/μL。构建的荧光定量PCR标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线的吸收峰单一,扩增效率好。利用该定量检测体系,能从几种不同的三七病株中快速检测出携带尖孢镰刀菌的根腐病病株,从而达到准确诊断的目的。本方法不仅能明确三七种植土壤以及三七病株中尖孢镰刀菌数量的动态变化,并且可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的快速分子检测提供技术支持。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王革 郑小波 陆家云 李天飞
将实验条件下制备、提取的黑胫病菌厚垣孢子、菌丝体悬浮液定量加入含水量分别为４０％和７０％的灭菌土壤中，分别于４℃、２５℃和室温下保存，定期检测。结果表明：厚垣孢子在各处理土壤中至少可存活８个月，主要以细胞壁加厚、原生质浓缩的休眠状态存活，而菌丝体只能单独在土壤中存活２个月。在土壤中存活３个月内的厚垣孢子可用选择性培养基直接分离检测，３个月后需用诱捕的方法才能检测出来。温度对厚垣孢子、菌丝体的存活影响明显，低温有利两者的存活，不同含水量对两者的存活影响不明显。
关键词：
烟草黑胫病菌 厚垣孢子 菌丝体 存活
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