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[期刊] 中国农业科学
[作者]
姚文 朱伟云 韩正康 Antoon D L Akkermans Barbara Williams Seerp Tamminga
以取自3头安装有永久性瘤胃瘘管的土种山羊的瘤胃内容物为材料,经过DNA抽提和PCR扩增,扩增产物利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE,一种DNA指纹技术)分析瘤胃细菌在两种日粮条件下的多样性.同时利用基因序列分析技术,分析了16个在DGGE胶上有匹配带的克隆的16S rDNA序列,并与现有的数据库进行了比较.结果表明,饲喂基础日粮时3头山羊瘤胃内容物的DGGE图谱有一定的相似性(43%～55%);饲料中添加大豆黄酮一定程度上影响了瘤胃细菌的组成,DGGE 谱带变化程度分别为 1 号 36% 、2 号 46% 、3 号 30%。基因序列分析表明,DGGE图谱中优势条带的16S rDNA基因序列中有...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王小芬 王伟东 高丽娟 崔宗均
结合笔者等多年积累的经验详细介绍环境微生物学研究中变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术应用全步骤:从环境样品中直接提取总DNA,利用5′端含GC夹子的引物PCR 16S rDNA的部分片段,将PCR产物在含有浓度线形递增的变性剂的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳分析,使不同来源的DNA片段在电泳胶中分离,从胶中切出分离的DNA片段测定碱基序列,进行分类分析。PCR-DGGE技术能够检测不可培养的微生物基因,而DGGE技术与克隆等其他技术结合更能发挥其分离作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
周新倩 杨锐 吴小凯 黄艳花
为研究浙江近海浒苔Ｕｌｖａ ｓｐｐ．（ＥｎｔＥｒｏｍｏｒｐｈａ ｓｐｐ．）外生细菌多样性，采用传统的形态学和１６ｓ ｒＤｎａ测序分析的方法，从舟山朱家尖、宁海国华电厂和奉化南沙３个地区分离到可培养的浒苔外生细菌及其周围海水细菌６５株。根据细菌菌落特征和革兰氏染色结果等将分离到的细菌分为２６种表型。１６ｓ ｒＤｎａ序列测序比对发现：菌株与不动杆菌属（ａｃｉｎＥｔｏｂａｃｔＥｒ）、交替单胞菌属（ａｌｔＥｒｏｍｏｎａｓ）、弧菌属（ｖｉｂｒｉｏ）、假交替单胞菌属（ｐｓＥＵＤｏａｌｔＥｒｏｍｏｎａｓ）、微小杆菌属（ＥｘｉｇＵｏｂａｃｔＥｒｉＵｍ）、芽孢杆菌属（ｂａｃｉｌｌＵｓ）、赤细菌属（Ｅｒｙｔｈｒｏ．．．
关键词：
浒苔 16S rDNA 外生细菌 多样性
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈芸 刘旗 邓俊良 任志华 杨颜铱 高爽
采用MiSeq高通量测序技术分析川中黑山羊瘤胃细菌的多样性及菌群结构。选用3只140日龄健康公羊,其平均体质量为(15.53±0.21)kg,饲喂10 d后,于150日龄时采集瘤胃液(样品A),40 d后再次采集瘤胃液(样品F),提取瘤胃液细菌基因组DNA,对细菌16S rDNA序列V4区进行MiSeq测序。结果显示:1)从样品A与样品F中共获得高质量序列338 830条,聚类后得3 400个运算分类单位(OTU);2)样品A的α多样性指数高于样品F的,但其差异无统计学意义;3)门水平上,样品A最高相对丰
[期刊] 中国水产科学
[作者]
费来华 李赟 陈家鑫
运用PCR扩增10种海参的16SrDNA部分序列,并测序。获得大小为566bp的序列,利用DNAsp4.0软件分析比较10种海参的碱基组成、各碱基变异位点数、插入或缺失位点数,并采用MEGA4.0软件分析彼此间的遗传距离。结果发现,10种海参富含AT碱基,A+T的含量平均为57.0%,不同种海参间发生碱基转换、颠换及发生插入或缺失变异的位点数差异很大,10种海参彼此间的遗传距离在0.007~0.316之间。所得结果与GenBank中10种海参的相应序列进行比对分析,同时用MEGA4.0和PAUP*4.0软件构建进化树,分析其亲缘关系。结果表明,利用16SrDNA序列的差异可以将分属于海参科(H...
关键词：
海参 16SrDNA 系统发生
[期刊] 中国农业科学
[作者]
毛华明 马松成 陈静 邓卫东 和天宝
【目的】研究大额牛(Bos frontalis)瘤胃细菌16S rRNA基因序列,为揭示大额牛瘤胃细菌组成的多样性以及开发这一珍稀生物资源提供分子生物学依据。【方法】采用细菌通用引物F27和R1492对目标基因进行PCR扩增,克隆、测序后利用Neighbor-joining方法构建系统进化树。【结果】共获得147个16S rRNA基因序列,在GenBank登录号为DQ673466～DQ673612。按照97%的相似性标准,这些序列被分为86个操作分类单元。有16个序列与已培养菌的序列相似性≥97%,占总序列的10.9%;另有22个序列与已培养菌的序列相似性为90%～97%,占总序列的15%;剩...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韦玥瑞 李科南 张晓东 娜梅拉 娜仁花
研究不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃液细菌多样性及群落结构的影响。选择24只健康的8月龄、体重约25kg的内蒙古绒山羊母羊,随机分为4组,每组6只,分别为苜蓿组(G1)、苜蓿补饲精料组(G2)、玉米秸秆组(G3)和玉米秸秆补饲精料组(G4),试验期共25d,其中预饲期20d。在正式试验期第5天,经口腔采集瘤胃液,利用高通量测序技术进行瘤胃细菌多样性分析。结果表明:基于相似性>97%的原则,4组样品共产生1 399个操作分类单元(OTU),共享OTU 1 040个,约占总数的74.34%;各组α多样性指数指标无显著性差异(P>0.05)。各组门水平最优势菌为拟杆菌门,科水平最优势菌为普雷沃氏菌科,属水平最优势菌为普雷沃氏菌属,在所有占总细菌比例大于1%的瘤胃细菌中,G2组软壁菌门比例显著高于G3和G4组(P<0.05),G1组毛螺旋菌科比例显著(P0.05)。综合得出,不同饲粮类型条件下,内蒙古绒山羊最优势菌门为拟杆菌门,最优势菌科是普雷沃氏菌科,最优势菌属是普雷沃氏菌属;不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃菌群结构影响不明显。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
曾燕 倪学勤 曾东 简平 王剑 唐雨蕊
为探讨蒙古羊瘤胃液相和固相细菌的多样性,采用变性梯度凝胶电泳技术结合聚合酶链式反应(PCRDGGE)及条带的克隆测序,比较瘤胃液相和固相细菌的差异,同时采用聚类分析和主成分分析(PCA)方法分析瘤胃液相和固相细菌的多样性。结果表明:1)瘤胃液相和固相样品均含有物种丰富的细菌菌群,但液相比固相具有更高的平均条带数,分别为30条和24条;2)瘤胃液相样品比固相样品具有更高的多样性指数、均匀度和丰富度,其数值分别为3.45、0.90和30.20及3.23、0.84和24.62;3)同一动物个体瘤胃液相样品和固相样品聚类在一起,相似性系数均高达0.81;4)共性条带测序结果表明瘤胃的优势细菌主要是Un...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
曹蕾 徐波 朱万里 张国华 黄木坤 应辰哲 何水林
利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题..
[期刊] 华北农学报
[作者]
李新海 焦少杰 傅骏骅 张世煌 袁力行 李明顺
利用 35个SSR引物和 14个玉米自交系直接比较了 3%Metaphor琼脂糖凝胶和 12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR位点多态性水平的影响。结果表明 ,两种凝胶系统检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在显著差异 ,12 %聚丙烯酰胺凝胶在区分微小差异片段能力上明显高于 3%Metaphor琼脂糖凝胶。另一方面在两种电泳检测系统下 ,14个自交系之间的遗传相似系数相关性 (r =0 516)达到了极显著水平 (P
关键词：
玉米 SSR标记 遗传变异 多态性信息量
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王梦芝 王洪荣 徐爱秋 张洁 陈旭伟
【目的】研究以稻草为主的日粮条件下徐淮白山羊瘤胃细菌和原虫的类群结构。【方法】以4只安装瘤胃瘘管的徐淮山羊为试验动物,PCR扩增瘤胃细菌16SrDNA序列,利用分子克隆与测序分析、细胞计数等技术,解析瘤胃细菌和原虫群体的类群组成。【结果】获得的细菌克隆基本归为两簇:与瘤胃球菌R.bromii YE282相似性为95%的XHGR1、与瘤胃R-7菌相似性为98%的XHGR3,XHGR2位于另立的R.flavefaciens簇。瘤胃球菌属细菌占细菌克隆总数的比例较高(33.33%),原虫生物量略低于细菌,占瘤胃生物总量的44.83%。群体主要有内毛属、双毛亚科、前毛属、头毛属和等毛科等原虫,其中内毛...
关键词：
山羊 稻草 瘤胃 细菌 原虫 群体
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王国娟 曹妍 王芳 马焕成 郑艳玲 伍建榕
苏铁为古老孑遗植物，被誉为＂植物界的大熊猫＂和＂活化石＂。为了研究苏铁珊瑚状根内生放线菌的多样性，通过１６Ｓ ｒ ＤＮＡ克隆文库开展了珊瑚状根内生放线菌种群多样性研究，从１６Ｓ ｒ ＤＮＡ克隆文库中随机挑选了１６４个克隆子进行序列测定，对测序结果进行了ＢｌＡＳｔ对比，结果表明，苏铁珊瑚状根中放线菌多样性十分丰富，存在５个目７个科１０个属，主要类群为短小杆菌属ＣｕｒｔｏＢＡＣｔｅｒｉｕｍ、利夫森氏菌属ｌｅｉｆＳｏＮｉＡ、考克氏菌ＫｏＣｕｒｉＡ、鸟氨酸微菌属ｏｒＮｉｔｈｉＮｉｍｉＣｒｏＢｉｕｍ、微球菌属ｍｉＣｒｏＣｏＣＣｕＳ、丙酸杆菌属ＰｒｏＰｉｏＮｉＢＡＣｔｅｒｉｕｍ、链霉菌属ＳｔｒｅＰｔｏｍｙ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
兰海燕 李立会
随着世界各国经济贸易和农业科学技术的发展 ,特别是植物新品种保护法的实施 ,品种鉴定越来越引起人们的关注。大量证据显示 ,凝胶电泳技术在作物品种鉴定中起着举足轻重的作用。对各种凝胶电泳技术现状做了全面综述 ,包括电泳方法的发展过程、电泳方法间的比较、影响因素、应用范围、己取得的成就和未来的发展方向。随着我国植物新品种保护范围的不断扩大 ,电泳方法必将在作物品种鉴定中发挥更大的作用。
关键词：
蛋白质 凝胶电泳 作物品种鉴定 种子检验
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨承剑 韦升菊 梁辛 梁贤威 邹彩霞
选取3头5岁左右的健康雌性德昌水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库,分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌区系组成。结果表明:试验共获得99个16S rRNA基因序列,RDP分析表明94.2%的序列为甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为19个分类操作单元,其中96个序列(17个OTUs)占总序列的97.0%,与已知细菌的16S rRNA序列的相似性≥97%;3个序列(2个OTUs)占总序列的3.0%,与已知细菌16S r...
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