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[期刊] 西南农业学报
[作者]
张书祥 何奇松 孔子荣 郭建刚 周庆安 黄胜斌 韩银华 熊毅
【目的】了解广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的感染情况,为广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的监督及防控工作提供参考。【方法】通过对Nsp2基因的分析,合成新的特异性诊断引物,并利用RT-PCR的方法对广西贵港地区111个规模猪场采集的1865份扁桃体同时进行高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征的分子流行病学调查。【结果】25个猪场检出92份猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点总阳性率为22. 5%,样品总阳性率为4. 93%。其中9个猪场检测出24份高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为8. 10%,样品阳性率为1. 29%; 18个猪场检测出68份经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为16. 2%,样品阳性率为3. 65%; 2个猪场同时检测出高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒。【结论】广西贵港地区规模猪场感染猪繁殖与呼吸障碍综合征的现象较为严重。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝雪峰 关贵全 李有全 马米玲 刘爱红 马新龙 江丽丽 殷宏 罗建勋
为了研制有效的PRRS疫苗,参照GenBank中公布的猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型ATCCVR-2332基因序列,用Primer 5.0软件分别设计合成了针对PRRSVORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的特异性引物,利用RT-PCR从HN-HW株分别扩增得到了大小约771,904,564,670,619和586 bp的片段,并将扩增的片段插入pGEM-Teasy载体,然后转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中,挑取阳性克隆PCR和酶切鉴定后进行测序。利用DNAStar软件将HN-HW株ORF2-7基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列与ATCC VR-23...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨春华 韩志涛 胡慧 钟毅 王冬 祝建新
参照GenBank上登录的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)美洲型AF494042株ORF5基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR扩增出PRRSV河南09分离株(HN-09)的ORF5基因,经与pGEM-T Easy载体连接后,筛选出阳性重组质粒进行序列测定,并利用DNASTAR软件对序列进行分析。结果表明,扩增片段长度为721 bp,与预期目的片段大小一致,测序验证其为PRRSV的ORF5基因。序列分析表明,HN-09株与AF494042的同源性为93.5%,与山西、山东近年分离株的同源性为97.8%~99.2%,与河北、安徽、黑龙江等省分离株的同源性为93.4%~98.7%,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘辉 熊金凤 邹浩勇 陈杨 杨维红 何启盖
根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR。CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性。以-βactin为对照,利用本方法...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曹剑波 李彬 陈焕春 肖少波
对高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(HP-PRRSV)人工感染的成年猪脏器进行透射电子显微镜观察,结果发现,肺部组织细胞病变最严重,部分毛细血管破裂,毛细血管内皮细胞裂解,肺泡巨噬细胞线粒体嵴肿胀严重;脑部组织神经元细胞凋亡和胶质细胞坏死;肾脏和淋巴结组织中均出现病毒的复制和线粒体嵴的肿胀。该结果为阐明HP-PRRSV的致病机理提供了实验依据。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 简中友 马志勇 蔡宝祥 张振兴
中国某地区猪繁殖和呼吸综合征流行病学调查及病毒分离姜平简中友马志勇蔡宝祥张振兴（南京农业大学畜禽传染病研究室，南京２１００９５）ＥＰＩＺＯＯＴＩＯＬＯＧＹＡＮＤＶＩＲＵＳＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＰＯＲＣＩＮＥＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＶＥＡＮＤＲＥＳＰＩＲ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王小敏 何孔旺 周忠涛 茅爱华 俞正玉 汪伟 倪艳秀 温立斌 张雪寒 郭容利 李彬 于洋
从江苏某猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。利用细胞传代的方法对PRRSV检测阳性,PPV和PRV检测阴性的猪血清进行病毒分离。通过RT-PCR、CPE和IFA对PRRSV分离毒株进行鉴定,并测定其TCID50。测序获得Nsp2和ORF5基因,并利用DNAStar软件进行序列同源性和进化分析。成功分离获得1株PRRSV毒株,该毒株能够在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,免疫荧光检测可观察到特异性荧光,TCID50为105.5。Nsp2...
[期刊] 华北农学报
[作者]
韩一超 刘文俊 姚敬明 吴忻 王娟萍 武守艳 陈剑波 孟帆 郭慧慧 杨丽华 雷宇平 樊振华
采用RT-PCR方法,分段扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Shanxi-6株15个基因片段,并将这15个片段分别连接到pMD18-T载体上进行克隆测序、拼接后,得到PRRSV Shanxi-6株全基因组长15 320 bp(不包含PolyA尾),包含9个开放阅读框,5'UTR长189 bp,3'UTR长150 bp。基因组序列分析结果表明,Shanxi-6株与欧洲型代表毒株LV的核苷酸序列同源性为54.35%,与美洲型代表毒株VR-2332的核苷酸序列同源性为88.80%,与HPPRRSV毒株(JXA1、HUN4、HuN、HUB1)亲缘关系最近,核苷酸序列同源性高达97.44%~97...
关键词：
猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因组 序列分析
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜平 简中友 马志永 蔡家利 蔡宝祥
在对国内某地区７个患病猪群流行病学调查的基础上，用Ｍａｒｃ１４５细胞培养从４个猪群流产胎儿分离到３株导致细胞病变的病毒———Ｊ１、Ｊ２和Ｊ３株。它们对氯仿和热（５６℃，１ｈ）、甲醛、酸、碱均敏感。病毒粒子呈球状，直径３０～８０ｎｍ，负染后病毒粒子大小８０～１００ｎｍ，在Ｍａｒｃ１４５细胞质内增殖，５溴２′脱氧尿核苷（ＢＵＤＲ）对其无抑制作用。结合血清学试验，鉴定３个毒株均为猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ），可能为美洲型ＰＲＲＳＶ。
关键词：
猪繁殖和呼吸综合征病毒 分离 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
李和平 吴发兴 李晓成 陈德坤
通过设计2对引物,建立了PRRSV的套式PCR方法,PRRSV细胞毒稀释10 000倍,依然能扩增出相应的片断,多次重复能得到一致的结果,非PRRSV病毒(猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒)均未扩增出相应片断。应用该方法对各地样品进行检测,表明建立的套式PCR方法适合进行流行病学调查。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
任慧英 郭鑫 杨汉春 王芳 赵东升 杜希珍
目的检测PRRSVGP5DNA重组质粒在猪体诱导的免疫反应以及细胞因子的佐剂效应。方法将表达PRRSVGP5的DNA重组质粒与表达3种细胞因子的重组质粒联合免疫SPF猪,经3次免疫后人工感染PRRSV,检测体液免疫、细胞免疫以及攻毒保护性反应。结果重组质粒pCI-GP5可诱导免疫猪产生中和抗体,效价达1:19.2,并可诱导机体产生较强的细胞免疫,攻毒后组织中PRRSV核酸的检出率下降39%,表明表达PRRSVGP5的DNA重组质粒pCI-GP5可诱导一定的免疫效力。pcDNA-IL-4与pCI-GP5共免可将中和抗体效价提高到1:35.5,且可增强细胞免疫反应,与对照组相比,病毒血症的出现频率...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
娄忠子 王天户 杨宪勇 刘思当
选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV ATCC VR-2332株)并与猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)人工共同接种,在不同时期取外周血,进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测,比较不同接种组中各指标的差异性。外周血淋巴细胞采用碘化丙啶(PI)单染色法染色,借助流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明,两病毒感染对外周血各种指标都有一定的影响,WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TB IL感染组高于对照组;RBC、HGB、PLT及ALB感染组低于对照组;PRRSV单独感染以及与PCV2在混合感染的变化规律基本相同,但混合感染多项指标的变化幅度更大;MCV及TP无...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨艳艳 乔松林 李睿 郭军庆 李青梅 滕蔓 王丽 赵东 李学伍 邓瑞广 张改平
为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3%H_2O_2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
严亚贤 孙建和 王恒安 刘永德 华修国
对猪繁殖 呼吸综合征病毒 (PRRSV)上海分离株 (SH1)的理化特性和结构蛋白进行研究。结果表明 ,SH1分离株能致Marc 145细胞典型病变 ,TCID50 为 10 5 9mL-1,对氯仿和乙醚、酸 (pH5 5以下 )、碱 (pH8以上 )、热 (水浴 5 6℃ 10min以上、 37℃ 2 4h以上、 2 8℃ 48h以上 )均敏感。病毒负染可见以具囊膜的球形为主 ,囊膜上有纤突 ,大小为 60～85nm。超薄切片可见病毒存在于细胞浆中。SH1分离株的病毒培养液经差速离心和非线性蔗糖密度梯度纯化 ,SDS PAGE显示病毒结构蛋白的相对分子质量为 2 40 0 0 ,195 ...
[期刊] 世界农业
[作者]
汤德元 汪忠荣 袁东波 李春燕
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