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[期刊] 西南农业学报
[作者]
秦毅斌 苏乾莲 赵硕 梁家幸 李斌 卢冰霞 周展宏 陈忠伟 何颖 段群棚 周英宁 蒋冬福 赵武
【目的】建立猪捷申病毒(PTV)反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的检测方法,并应用于广西猪群PTV感染诊断。【方法】通过对GenBank中登录的PTV不同血清型基因序列,在5’端保守区设计一对特异性引物,经退火温度摸索及特异性和敏感性试验,建立PTV的RT-PCR检测方法,并对广西部分猪场腹泻病例进行猪捷申病的感染诊断。【结果】所建立的方法能特异性地扩增PTV,不能扩增猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪A群轮状病毒、猪C群轮状病毒、猪丁型冠状病毒。建立的方法具有较高的敏感性,可检测低至1.16 pg/μl的质粒模板及12.15 pg/μl的核酸模板。应用建立的RT-PCR方法对2018年3月-2019年4月从广西部分猪场采集的235份病猪腹泻粪便进行PTV临床检测,PTV阳性为24份,阳性率为10.21%。【结论】建立的PTV RT-PCR方法简单特异、灵敏度高,可适用于实验室PTV检测诊断。广西部分受检猪场已存在PTV感染,应予以警惕,加强监测与防控。
关键词：
猪捷申病毒 诊断 临床检测
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡薛英 程国富 周诗其 唐万勇 马立保 倪心
1999年 1月至 3月武汉市某种猪场发生了以高热、高死亡率为特征的传染病。哺乳仔猪的发病率为6 6 .7% ,死亡率为 5 8.3 % ;断奶仔猪的发病率为 5 3.6 % ,死亡率为 12 .3 % ,造成巨大经济损失。经流行病学调查 ,病理变化观察和免疫荧光抗体检查 ,确诊该种猪场所暴发的传染病为猪瘟。此外 ,用间接血凝试验对 2 1日龄超前免疫仔猪的血清中猪瘟抗体水平进行了检测 ,结果表明仔猪的免疫合格率为 78.9%
关键词：
免疫猪 猪瘟 诊断
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴素丽 孙惠玲 张平 张培君 钱永华 高立娜
采用ELISA、PCR、RT-PCR及细胞培养等方法对山东某猪场流产、死胎及出生后几天死亡的小猪进行猪瘟病毒(CSFV),伪狂犬病毒(PRV),圆环病毒2型(PCV-2),细小病毒(PPV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)五种繁殖障碍性疾病进行检测,并应用ELISA猪瘟抗原检测试剂盒检测猪瘟病毒。检测结果表明,猪瘟病毒与圆环病毒2型为阳性,猪繁殖与呼吸综合征病毒、细小病毒、伪狂犬病毒均为阴性。根据结果判定该猪场发生猪瘟病毒与圆环病毒2型混合感染的繁殖障碍性疾病,其中以猪瘟感染最为严重。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵丽 崔保安 文英会 陈红英
根据Genbank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了PRV和PPV的单项PCR诊断方法,通过优化PCR条件最终成功地建立了PRV和PPV的复合PCR诊断方法。敏感性检测结果表明,对PRV的检测可以达到10-10.5/100μL TCID50、对PPV的检测可以达到10-9.5/100μL TCID50。对20头份病、死猪的血清、淋巴结、肺、肝等组织进行检测,结果5头份PRV阳性,3头份PPV阳性,其中3头份PRV和PPV同时为阳性,其余猪为阴性,健康猪对照样品全部阴性。结果表明,PRV和PPV复合PCR诊断...
[期刊] 林业科学
[作者]
李永 徐启聪 田国忠 郭民伟 朴春根
Crotalaria witches'-broom phytoplasma (CrWB) collected from Hainan Province,was classified and identified by sequencing techniques and Virtual RFLP.Two different type universal primer pairs of phytoplasma were used to amplify a 1.8 kb fragment of 16S rDNA and a 1.3 kb fragment of rp gene.The PCR-amp...
关键词：
猪屎豆丛枝病 植原体 分子鉴定 序列测定
[期刊] 华北农学报
[作者]
孔秋莲 叶军 岳玲 陈志军 包英姿 徐赟 郭卡 袁忠谊 戚文元
桔小实蝇是直接危害果蔬生产并对出口贸易形成重要影响的有害生物群,口岸检疫对其鉴定依赖形态观察。本试验利用特异的嵌套式PCR引物对桔小实蝇rDNA基因片段进行扩增,达到快速、可靠鉴定出柑橘果实中微量桔小实蝇卵,通过进一步序列分析,确定该实蝇与近缘种的关系。本试验建立的分子鉴定体系,可应用于口岸桔小实蝇卵快速、准确检疫,并能确定样本的种属关系。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张宝俊 李志岗 郭明霞 徐玉梅 王建明
采用自行设计的、能对镰刀菌18srDNA进行特异性扩增的1对引物,利用PCR-RFLP对尖孢镰刀菌以不同方式侵染的植株进行跟踪检测。结果表明,应用PCR-RFLP检测程序可检测出处于侵染初期和潜育期的枯萎病菌,说明PCR-RFLP能够快速、灵敏、准确地对枯萎病进行早期诊断。
[期刊] 水产学报
[作者]
葛明峰 郑晓叶 王国良
为预防与控制大黄鱼溃疡病的发生,本研究利用特异多重PCR技术,对象山县养殖大黄鱼的3种致病弧菌感染情况进行了流行病学调查。每月在各定点网箱组随机采集大黄鱼肝、肾、脾、肌肉等组织进行感染情况的检测。结果显示,3种致病弧菌对大黄鱼的感染率存在一定的差异性。溶藻弧菌、哈维弧菌对大黄鱼的感染率整体高于副溶血弧菌;从感染组织分析,与肝脏、肾脏相比3种致病弧菌更易感染肌肉、脾脏;3种致病弧菌对不同鱼龄的大黄鱼感染率各不相同。研究还表明,3种致病弧菌在各个采样时间点均有感染,其中7—9月为弧菌感染高峰期,而台风后的感染率较台风前都有一定提高。另外,根据大黄鱼溃疡病发生与3种致病弧菌感染率关系的研究可知,在大...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
董伟 唐琴 卓如意 孙志良 刘静
为建立一种快速、准确的仔猪大肠杆菌病诊断方法,从某猪场腹泻病死的小猪采取病料,经处理后取处理病料腹腔注射12只小白鼠,同时以灭菌生理盐水作对照.24 h内,注入病料的小白鼠全部死亡.采取死亡小白鼠的肝脏,充分研磨后加灭菌生理盐水作1∶5稀释,向稀释液中加入适量大肠杆菌兔血清抗体,混匀后分别于5,10,30 min时取病料涂片,用荧光标记的抗兔IgG抗体染色,荧光显微镜观察.结果显示:从死亡小白鼠病料涂片中能检测出大肠杆菌,其形态与标准大肠杆菌革兰氏染色形态一致.接种生理盐水小鼠未出现死亡,处死后取病料,以同样的方法进行检测,未检测出大肠杆菌.
关键词：
大肠杆菌病 免疫荧光技术 诊断
[期刊] 华北农学报
[作者]
路斌 王一成 吴润 袁秀芳 徐丽华 李军星 王朝文
通过对Genbank登录的CSFV、PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析,找出CSFV的E2基因,PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域[1]。利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物,通过对PCR反应条件的优化,确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度,建立了多重二温式PCR方法检测CSFV、PRRSV和JEV。其扩增的目的片断大小分别为CSFV(482 bp)、PRRSV(576 bp)和JEV(375 bp),将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,从而大大节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苗得园 杨兵 李富强 张培君 龚玉梅 李永清 付磊 高配亮
在伪狂犬病病毒种特异性单克隆抗体的基础上建立了检测该病毒抗原的单抗夹心LAB -ELISA方法。结果表明 ,该方法不与其他常见病原体产生交叉反应 ,抗原的最低检出含量为 8 9μg/mL。检测时最佳采样部位是猪脑及扁桃体。对人工感染兔、自然感染猪以及临床可疑病猪的检出率分别为 75% ,75%及 72 7% ,因此本方法是一种具有良好特异性及较好敏感性的诊断方法。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
濮俊毅 黄新新 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12h后呈败血症病变,96h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死...
关键词：
斑马鱼 猪链球菌2型 半数致死量
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李彬 杜露平 何孔旺 孙冰 倪艳秀 温立斌 张雪寒
为提高猪Hokovirus(PHoV)检测的敏感性和简便性,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立了一种敏感、特异、快速、简便、实用的检测PHoV的技术。针对PHoV VP1/2基因保守区设计4条引物,进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化并检测其敏感性和特异性。结果表明,所建立的方法最佳反应时间为60 min,反应温度为65℃,该方法具有良好的特异性,与其它常见动物病毒(PRRSV、PCV2、CSFV、PRV、PPV、JEV)无交叉反应,对PHoV的最低检出量为10拷贝,其敏感性是PCR方法的10倍,且通过加入荧光染料可直接判定结果。研究表明,该方法特异性强、敏感性高,且操作简便、检测...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周诗其 程国富 熊道焕
硒是人类及动物机体不可缺少的微量元素之一,它对维持机体内环境的稳定,增加机体的防御适应能力等方面起着非常重要的作用。动物通过食物获得机体所需量的硒,摄入过多或过少,会导致动物发生硒中毒或硒缺乏症。作者对湖北省宣恩县沙地乡哺乳仔猪自然发生以脱毛、蹄裂为主要临床症状的病例,进行了组织含硒量测定、病理剖检、组织形态观察,诊断为硒中毒。特将结果报道如下:
关键词：
哺乳仔猪 自然硒中毒 病理变化
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