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[期刊] 西南农业学报
[作者]
谢志勤 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 温娟 张振荣 黄海强
应用牛结核变态反应、PCR和分离培养3种方法,对奶水牛进行牛结核病检测,比较3种检测方法的符合率。结果表明,1850头奶水牛中有78头奶水牛的皮内变态反应结果为阳性,而对变态反应阳性的牛样品进行PCR检测和分离鉴定,分别鉴定出4份和2份牛分枝杆菌。阳性检出率以变态反应为最高(4.22%),PCR和分离鉴定的较低,分别为0.21%和0.11%。变态反应与PCR检测、分离鉴定的符合率较差,而PCR检测与分离鉴定的符合率相对较接近。因此建议,在对奶水牛群进行结核病检测时,应先以变态反应检疫牛群,再结合PCR检测进行综合诊断,更有利于奶水牛结核病的检测与净化。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
唐国盘 黄安群 孙志鹏 匡友谊 王胜杰 王大伟
比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Danio rerio)突变纯合个体和突变杂合个体进行检测,用野生型个体作对照;同时用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突变杂合个体进行了检测。结果表明:三种方法均能够区分突变杂合个体,其中T7核酸内切酶I检测法耗时最短,但该方法不能用于鉴定突变纯合个体;限制性内切酶检测法能够用于鉴定纯合个体,但需要有特异性的识别位点;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法能够区分纯合和杂合个体,对序列无依赖性,能够检测出序列中存在的所有变异。成本上,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法最经济;限制性内切酶的价格存在较大的差异,因此检测成本依赖于酶的价格。三种检测方法各有优缺点,在应用实践中可根据试验需要选择合适的方法。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾伟伟 王英英 尹纪元 汤亚方 李莹莹 王庆 高彩霞 任燕 刘春 石存斌
为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)和间接免疫荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)三种方法来对GCRV-Ⅱ进行检测和含量测定,从特异性、敏感性、可靠性和检测结果的相关性来比较这三种方法对于GCRV-Ⅱ定量检测的差异。结果显示:qPCR、IPMA和IFA三种方法检测GCRV-Ⅱ的最低限分别为8.6、86和86拷贝/μL,qPCR的检测灵敏度比IPMA和IFA高一个数量级;特异性分析表明,qPCR、IPMA和IFA三种方法均只能检测出GCRV-Ⅱ型分离株,而其它病毒和未感染病毒的阴性对照细胞均为检测阴性,表明这三种方法均具有较高的特异性;3种方法分别检测60份已知临床样品,qPCR、IPMA和IFA的诊断敏感性和特异性分别为96.7%(29/30)和100%(30/30)、100%(30/30)和93.3%(28/30)及100%(30/30)和100%(30/30);三种方法对于GCRV-Ⅱ的定量检测结果中病毒拷贝数和病毒滴度之间具有较好的相关性,其拟合曲线分别为:Y(IPMA,TCID_(50)/mL)=23.629X-536 174(qPCR,拷贝/mL)(R~2=0.996)、Y(IFA,TCID_(50)/mL)=20.318X-575 062(qPCR,拷贝/mL)(R~2=0.995)和Y(IPMA,TCID_(50)/mL)=1.161X-1 176(IFA,TCID_(50)/mL)(R~2=0.999)。结果表明,GCRV-Ⅱ病毒滴度的测定,除了用IPMA和IFA外,也可以采用qPCR方法通过测定病毒的核酸拷贝数来测算其病毒滴度。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨国宇 陈伟华 陈杰 韩正康
采用高压液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定了雄性水牛瘤胃液中的睾酮。结果表明，瘤胃上清液及瘤胃细菌菌体中均有睾酮存在。放射免疫分析表明，瘤胃上清液睾酮样免疫活性物质的平均浓度为６３．９±２６．５ｆｍｏｌ／ｍＬ，且春季含量高于夏季（６６．１±３１．０ｖｓ２３．２±１６．５ｆｍｏｌ／ｍＬ，Ｐ＜０．０５）；瘤胃细菌菌体内睾酮样免疫活性物质为２６３．５±１２９．０ｆｍｏｌ／ｍｇ，春夏两季之间无明显的季节性变化（２９８．２±１５８．７ｖｓ３３９．５±２１３．０ｆｍｏｌ／ｍｇ，Ｐ＞０．０５）。３头雄性水牛去势后，瘤胃液中睾酮样免疫活物质含量降低（９．０４±１．５８ｖｓ７．５５±１．２４ｐｍｏｌ／ｍＬ，Ｐ＜０．０５...
关键词：
雄性水牛 瘤胃液 睾酮
[期刊] 华北农学报
[作者]
冉策 陈柳 陆家兰 刘正坪 魏艳敏 赵晓燕 尚巧霞
草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的D...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王慧 朱瑞良 谭燕玲 魏凯 王新建 孙振红 盛鹏程
【目的】建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性致病菌的多重PCR方法。【方法】根据奇异变形杆菌尿素酶合成的正向调节因子R基因(ureR)、沙门氏菌侵袭性抗原保守基因(invA)和单核细胞增生李斯特氏杆菌编码溶血素O(LLO)的hlyA基因,分别设计3对特异性引物,对单基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件,如引物浓度、Tm值、模板量等的优化,建立快速检测奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌的稳定的单管多重PCR方法。【结果】针对奇异变形杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏杆菌3种食源性...
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
李林贵 韩春艳 刘鸿宇 郎颖 孟庆跃
文章以宁夏某县级医院为样本,选取15种代表性疾病,采取了以项目平均成本、临床路径和床日成本与费用3种方法进行成本测算。方法一,发现15个主要病种平均病种费用为4 129.65元,平均成本为4 597.74元,平均例均费用低于成本405.09元;方法二,研究表明15个主要病种平均成本为3 456.17元,平均例均费用高于成本为673.48元;方法三,病种费用普遍低于成本,但费用与成本相差不大,费用低于成本平均为553.23元。建议,在完善信息系统的基础上,实施以临床路径和成本测算为基础的单病种支付方式,以提高医院管理水平。
关键词：
医院病种 成本测算 医疗服务
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
霍宁宁 朱伟英 高洋 杨雯昱 岳进华 赵燕清 陈德坤
【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ＥＬＩＳＡ检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板，用脱脂奶粉封闭酶标板，设置封闭时间分别为１．０，１．５和２ｈ，再用不同稀释度的血清（１∶１００，１∶２００，１∶４００和１∶８００）与之反应，以此优化间接ＥＬＩＳＡ反应条件，确定阳性结果判定的临界值。对间接ＥＬＩＳＡ方法的特异性和重复性进行考察，并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原，最佳包被抗原菌体密度为ＯＤ６００＝０．０８，血清的最佳稀释度为１∶４００，封闭时间为２ｈ，阳性血清的临界值为０．３２９。该抗体检测方法可特．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
魏刚 邓文红 蒋湘宁
本项研究采用目前国际上普遍公认的研究生物固氮活性的方法（乙炔还原－气相色谱法）对３种微生物固氮菌肥的固氮活性进行检测，并尽可能地排除检测过程中可能导致乙炔还原生成的乙烯和多种导致乙烯产生的非固氮菌因素，从而保证分析数据的真实性．在系统设计方案的基础上，对不同产地的３种固氮菌肥进行了认真的检测．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈迪 杨银元 李凌飞
为建立对3种食源性致病菌—大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和单增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)的快速、敏感、特异的多重PCR诊断检验方法,本研究设计了上述3种菌的特异性PCR引物,通过单一、双重及三重PCR反应检测,并对人工感染的饮料和面包2种食品进行验证。结果表明,3种食源性致病菌的单一、双重和三重PCR均成功扩增出目的片断,没有非特异性扩增。人工感染食品的PCR检测也获得了目的菌的特异性片段,并且结果稳定。本研究所建立的多重PCR反应系统具有较好的特异性和灵敏性,为食品中常见致病菌的检测提供了一种...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
段安琴 庞春英 朱鹏 邓廷贤 陆杏蓉 陈明棠 杨炳壮 梁贤威
【目的】克隆沼泽型水牛ＶＡＳＡ基因５′侧翼序列，对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测，为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据ＧｅｎＢＡｎｋ已公布的河流型水牛（ＢｕＢＡｌｕＳ ＢｕＢＡｌｉＳ）的ＶＡＳＡ５′侧翼序列，经过同源比对，设计ＰＣＲ引物。以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增ＶＡＳＡ基因５′侧翼序列并进行测序和生物信息学分析。将扩增的ＶＡＳＡ基因５′侧翼片段插入ＰｅＧＦＰ－１多克隆位点处，构建ＰＶＡＳＡ－ｅＧＦＰ－１载体。载体经脂质体转染Ｈｅｋ－２９３Ｔ和ＣＨＯ细胞系，分析其转录活性。【结果】成功克隆沼泽型水牛ＶＡＳＡ ５′侧翼序列及部分ＣＤＳ区序列，共３ ０８１ＢＰ，同源．．．
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
崔哲哲 刘飞鹰 陈发钦 林玫 黄曙海
目的:通过分析广西结核病诊疗费用在城镇居民医保、城镇职工医保中的报销情况和医疗救助政策,为进一步推动和完善广西结核病诊疗全面纳入城镇医疗补偿体系提供依据。方法:对广西各县(区)的结核病诊疗费用在城镇居民医保、城镇职工医保中的报销情况和医疗救助政策进行调查分析。结果:96.88%县(区)的城镇居民医保和98.96%县(区)的城镇职工医保采取在封顶额度内按比例报销住院结核病诊疗费用的模式。不同县(区)的城镇居民医保和城镇职工医保住院报销比例的差距较大,分别为40%～90%,50%～95%。城镇居民医保和城镇职工医保的平均住院报销起付额度随着医院级别的增高,分别为278～493元,247～310元。城镇职工医保住院报销封顶额度是城镇居民医保的1.80倍。城镇职工医保的门诊结核病诊疗起付额度、报销比例和封顶额度(395元,77.23%,97 250元)均高于城镇居民医保(253元,62.00%,37 244元)。医疗救助覆盖率仅为38.40%。结论:应该通过降低或取消起付额度,升高报销比例和封顶额度来推动广西的结核病诊疗费用全面纳入城镇医疗保险及医疗救助,解决结核病患者的经济负担。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周阳 祝长青 郭桂萍 徐幸莲 徐宝才 薛建丽 蒋原 杨军 郭云昌 刘秀梅 付瑞燕
【目的】确定适用于不同条件下快速检测单增李斯特氏菌的方法。【方法】以单增李斯特氏菌标准菌株CMCC54004和市售盐水鸭、凉拌菜为研究对象,按照国家食品安全标准(GB 4789.30-2010)对检测样品进行选择性增菌培养,选择阴性样品进行人工布菌,比较单增李斯特氏菌蛋白条检测法、CPA恒温扩增法以及实时荧光PCR方法的检测效果,并以传统平板分离法进行验证。【结果】蛋白条检测法操作简单但灵敏度低,最低检测限为106cfu/mL;实时荧光PCR方法灵敏度高,最低检测限为101 cfu/mL,但操作繁琐,对操作技术及实验室条件要求较高;CPA恒温扩增方法灵敏度相对较高,最低检测限为105 cfu/...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张朝红 张彦明 张永国 郭抗抗 魏中锋 孙裴
应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步骤繁琐,所需时间长的缺点;荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果,特异性比较差;RT-PCR检测法具有快速、敏感等优点,特别是样品保存不理想时更有价值,利用套式PCR(nested-PCR)可以提高检测的特异性;夹心ELISA检测法具有快速、敏感等优点,但在样品保存不理想时会出现假阴性结果。
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
胡政
本世纪30年代开始采用的X线胸透在团体人群中主动发现结核病人(简称团检),对降低结核病疫情起过重要作用;但随着我国结核病流行状况不断好转,是否仍要继续大规模进行X线团检尚有不同看法;一种认为团检投入大量的经费和人力,而查出病人不多,从经济效益上得不偿失,故主张用别的方式来早期发现病人;另一种认为团检发现的病人比平时门诊多,故不应摒弃通过团检发现病人的手段。本文根据1985年22个团体X线检查资料,对X线团检的工作效率及其经济效益作一分析,以便为今后提高发现病人工作
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