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[期刊] 林业科学研究
[作者]
侯伟 彭桂香 许志钧 陈仕贤 谭志远
从广东箣竹中分离、筛选得到5株固氮酶活性高且稳定、生长势强的内生固氮菌株,对其生理特性、环境适应性及其对植物的促生效果进行了系统研究。结果表明:在无氮培养、温度18~40℃时,菌株均能生长且有固氮酶活性,其最适生长及固氮的温度为26~37℃;在偏酸(pH值5.0)和偏碱(pH值8.0)的条件下,菌株均能保持较强的生长势和较高的固氮酶活性,并能通过调节自身代谢适应环境的酸、碱变化,使培养液趋近中性;培养液中NaCl浓度在0.5~2.5 g.L-1、(NH4)2SO4浓度在0.05~0.50 g.L-1时,菌株均能保持旺盛生长且有较高的固氮酶活性。接种水稻试验表明:菌株对植物的生长有一定的促进作用...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李曼 李巧琪 廖真 林标声 鲁国东 林占熺
【目的】检测5种芦竹属菌草绿洲成熟期根样本内生固氮菌的丰度及nifH基因的表达,为nifH基因的快速定量检测及实时监测提供技术手段。【方法】采用实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR)分析根样本内生固氮菌nifH基因的拷贝数及相对表达量。【结果】5种芦竹属菌草成熟期根样本内生固氮菌nifH基因表达量及拷贝数均有较大的差异。其中,绿洲2号nifH基因相对表达量最高,呈过表达水平,且绿洲2号样本差异达显著水平(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
董萌 施龙清 解振兴 连玲 吴春珠 张居念 张数标 姜照伟
[目的]研究不同生育期水稻根系内生固氮菌的多样性,分离鉴定内生固氮菌并筛选具有促生作用的菌株,为水稻生产中固氮菌的应用提供理论依据。[方法]采用无氮培养基培养方法,从拔节期和抽穗期佳辐占根系中分离内生固氮菌,通过扩增16S rRNA方法进行分子鉴定和系统进化分析;采用透明圈法进行溶磷解钾能力验证;采用乙炔还原法测定固氮酶活性。将分离的内生固氮菌株单独接种盆栽水稻幼苗,测定其对株高、根长、鲜质量的影响;将内生固氮菌混合菌液接种水稻品种佳辐占和台粳8号,于齐穗期测定倒1、倒2和倒3叶片的叶绿素含量(SPAD值)。[结果]从拔节期和抽穗期水稻根系中分别分离出10和20株内生固氮菌,且两个时期水稻根系内生固氮菌群多样性存在差异,拔节期以克雷伯氏菌属为主,而抽穗期以假单胞菌属为主。筛选出7株具有溶解无机磷能力的菌株,分别是J3 J10、J23、H27、H30、H33和H37。乙炔还原法测定结果表明,分离的内生固氮菌均具有弱固氮活性,其中H33和H40-2菌株固氮能力相对较强。将固氮菌回接水稻幼苗,H40-2和J3菌株对水稻株高、地上鲜质量、根长均有显著影响,可促进水稻生长。将固氮菌混合回接水稻根系,发现佳辐占叶片叶绿素含量与对照差异不显著,而台粳8号显著提高。[结论]分离的内生固氮菌株H40-2和J3在水稻苗期具有明显促生作用,可作为功能性内生固氮菌开发利用。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
韩梅 罗培宇 肖亦农 钮旭光 韩晓日
从玉米东单90和郑单958健康鲜植株中分离纯化内生细菌,利用乙炔还原法测定分离物的固氮酶活性,得到2株固氮酶活性较高的菌株SD1A和SD2A,分别为3284.3C2H4.h-1·mL-1和3206.8nmolC2H4·h-1·mL-1;将SD1A和SD2A的纯培养物对植物分别进行土培和水培回接试验,结果均能从植物体内重新分离到出发菌株,表明SD1A和SD2A为内生固氮菌;通过对菌株理化特性试验,结果证明二者均为克雷伯氏菌属(Klebsiella trevisan)。用SD1A和SD2A处理的植株在水培试验中,株高分别为35.95cm和35.32cm,地上部干重分别为0.106g和0.101g,...
关键词：
玉米 内生固氮菌 固氮酶活性 促生长作用
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
冯歌林 高竞 严淑娴 王晶 梁辰飞 秦华 陈俊辉 徐秋芳
【目的】了解不同竹子内生固氮菌及其定殖土壤根区固氮菌的特征和生物多样性。【方法】以毛竹Phylloslachys edulis、狭叶青苦竹Pleioblastus chino、孝顺竹Bambusa multiplex叶部、根部及定植土壤为对象,设计nifH固氮基因引物,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)和随机克隆技术,通过聚类分析、Shannon多样性指数分析构建系统发育树。【结果】不同竹子根区土壤之间、同一竹种根部与叶部之间、不同竹种同一器官之间、根区土壤与植物之间的固氮菌群落结构差异明显,同一竹种叶部或根部的重复样品相似度均不高;根部内生固氮菌种类总体多于叶部,土壤固氮菌与根部内生固氮菌相似度高于叶部。不同竹种不同器官间固氮菌Shannon多样性指数差异显著,孝顺竹叶部(2.73)与土壤(2.70)大于根部(2.53)(P<0.05),狭叶青苦竹根部和毛竹根部大于叶部和土壤(P<0.05)。植物样品随机克隆测序对比得到83株固氮菌,仅12株为可培养固氮菌株,分别属于慢生根瘤菌属Bradyrhizobium、Dechlorosoma、固氮螺菌属Azospirillum、肠杆菌属Enterobacter、Kosakonia、变形杆菌属Gammaproteobacteria、红长菌属Rubrivivax和Azohydromonas。系统发育树结果表明:3种竹子内生固氮菌明显不同于其他植物。【结论】土壤环境、竹子种类及组织器官均能影响竹子内生固氮菌的结构特征和多样性,定殖于根部的内生固氮菌多样性显著高于叶部。3种竹子内生固氮菌种类与已报道的禾本科Gramineae植物差异显著。图4表4参30
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高玲玲 陈小龙 蒋涛 姜伟娜 黄琼
从采自云南禄丰县水稻品种楚粳27的根、茎、叶中分离内生固氮菌,并测定其抑菌作用。用YMA无氮培养基分离获得125株具有潜在固氮作用的内生细菌,对125株内生细菌进行固氮酶基因nifH PCR检测,共有15株内生细菌扩增出固氮酶基因nifH片段,确定其为内生固氮菌。水稻各部位的内生细菌菌群密度不同,依次为:根>叶>茎。通过对水稻白叶枯病、条斑病、稻瘟病、纹枯病和恶苗病等5种主要病害的抑菌试验,筛选出对5种病原菌都有抑制作用的内生细菌11株;其中同时具有固氮和抑菌作用的有3个菌株,分别为NR-18、NR-64和NR-79。经16SrDNA序列测定表明,NR-18和NR-79为多粘类芽孢杆菌(Pae...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡应平 林冬梅 胡弘正 吴颖 林佳丽 林占熺 刘斌
【目的】旱稻是一种重要的种质资源，对成熟期旱稻根系内生固氮菌进行筛选与鉴定，以获得对旱稻有较好促生作用的菌株。【方法】采用联合固氮固体培养基培养方法。从成熟期旱稻根系中分离出内生固氮菌，通过扩增固氮酶nifH基因和16S rRNA基因方法进行分子鉴定和系统进化分析；通过生化指标的测定和形态学的鉴定；采用透明圈法进行溶磷、产铁载体能力验证；以褐球固氮菌为阳性对照，利用ELISA测定试剂盒测定菌株分泌固氮酶活性、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶，采用Salkowski比色法测定生长素（IAA）含量，并研究其生长特征。将分离的固氮菌株以1%浓度（约8×10~(7)CFU/mL）浸泡旱稻谷种进行催芽，研究其促生效果。【结果】分离的菌株URR45为固氮菌，属于嗜温型微生物，最适生长温度为32～50 ℃，最适pH为6.0～6.5，不耐盐。其分泌的固氮酶含量为220.15 U/L，ACC含量为898.69 ng/mL，生长素含量为14.91 mg/L，固氮酶含量和ACC含量显著高于对照组褐球固氮菌。该菌株能够利用葡萄糖、麦芽糖等碳源，属于发酵型细菌，具有水解明胶、溶磷和产铁载体特性。该菌株经16S rRNA基因测序后通过NCBI BLAST比对，鉴定为Herbaspirillum＿seropedicae，隶属于Pseudomonadota门、Betaproteobacteria纲、Burkholderiale目、Oxalobacteraceae科、 Herbaspirillum属，革兰氏染色呈紫色。促生试验结果表明，在主根长度、侧根长度以及测根数方面均显著高于对照组。【结论】该菌株对旱稻幼苗具有一定的促生作用，在农业上产上可作为功能性内生固氮菌开发利用。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张军 彭轶楠 郭琪 王沛雅 李鑫 杨晖
[目的]获得杂交构树根际固氮菌菌株并明确其功能特性。[方法]以Ashby培养基为选择分离条件,从甘肃天水、兰州、张掖种植试验区的杂交构树根系及根际土壤中分离固氮菌,对固氮菌进行鉴定及系统发育分析,同时测定固氮酶活性、溶磷、分泌吲哚乙酸和抑制植物病原菌的能力,并采用熵权法对菌株特性进行综合评价。[结果]从远根土和根表土中共分离出10株固氮菌,分属8个属,以假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas sp.)居多。各菌株均具有固氮酶活性,TS4和HP10的固氮酶活性均大于180 IU·L~(-1);仅TS4和HTZ2具有溶磷能力;有8株菌能够分泌吲哚乙酸,HTZ4的分泌能力最强,分泌量为44.62μg·mL~(-1)。所有菌株对灰霉菌(Botrytis cinerea Persoon)无拮抗作用;有7株菌分别对至少2种以上植物病原菌有抑制作用。HTZ4、HTZ3、HP5分别对茄链格孢(Alternaria solani(Ellis et G. Martin) Sorauer)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani (Martius) Sacco)有最强抑制,抑制率分别为50.00%、48.78%、47.37%。综合性能较强的菌株为TS4、HP5、ZY9、HTZ4和HTZ5。[结论]研究结果可为进一步开发综合性能优良的固氮菌株,研制杂交构树多功能固氮菌肥,提高西北半干旱地区杂交构树产量提供依据和指导。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁梅 谭适娟 孙建光
【目的】分离鉴定湖南水稻内生固氮菌，研究水稻内生固氮菌的系统发育，分析测定分离菌株的生物学特性，探讨接种水稻内生固氮菌对稻苗镉（Ｃｄ）吸收的影响。【方法】表面灭菌水稻植株样品后采用低氮培养法分离水稻内生细菌，采用ＰＣＲ扩增、测序检测菌株ｎｉｆ Ｈ基因确认分离物是固氮菌，通过１６Ｓ Ｒ ＲｎＡ基因序列测定、比对初步鉴定菌株，分析菌株系统发育，通过温室盆栽试验探讨接种水稻内生固氮菌对稻苗Ｃｄ吸收的影响。【结果】从８个湖南水稻植株样品中分离到１９株内生固氮菌，这些菌株在系统发育地位上属于ＢＡＣｉｌｌｕＳ ＡＲｙＡＢＨＡｔｔＡｉ、Ｂ．ＣｅＲｅｕＳ、Ｂ．ｉｄＲｉｅｎＳｉＳ、Ｂ．ｉｎｄｉＣｕＳ、Ｂ．ｌｉＣ．．．
关键词：
水稻 内生固氮菌 生物特性 Cd
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李剑峰 杨鑫 张淑卿 杜建雄 刘健
为探明不同来源内生固氮菌对燕麦植株的促生能力，为植物内生固氮菌的应用开发提供参考，以陇燕３号接种沙蓬内生固氮菌产酸克雷伯氏菌（Ｋｌｅｐｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ Ｍｓｐ２ｃ）和苜蓿内生固氮菌荧光假单胞杆菌（ｐｓｅｕｄｏＭｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｌＭ５３１）菌液，研究２种植物内生固氮菌对燕麦种子萌发及幼苗生长的效果。结果表明：接种产酸克雷伯氏菌菌液的燕麦出苗率、发芽率、株高、根长、根体积、叶面积、地上部鲜重、地下部鲜重均最高，分别达９３．６７％、８９．００％、２８４．３ ＭＭ、２４２．３ ＭＭ、０．５ ｃＭ３、６６３．８ ＭＭ２、０．３９９８ ｇ和０．３０５８ ｇ，均显著高于无菌水．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
秦宝军 罗琼 高淼 胡海燕 徐晶 周义清 孙建光
【目的】了解小麦内生固氮菌数量,筛选具有ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylate,1-氨基环丙烷-1-羧酸)脱氨酶活性的小麦内生固氮菌,确定筛选菌株的系统发育地位与分类地位,为微生物肥料生产收集菌种资源。【方法】样品表面灭菌后采用无氮培养法筛选内生固氮菌,乙炔还原法测定菌株固氮酶活性;采用ACC唯一氮源法筛选ACC脱氨酶阳性菌,比色法定量测定ACC脱氨酶活性;PCR扩增得到菌株16S rDNA,通过序列测定和相似性分析研究菌株的系统发育;通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列比对鉴定菌种。【结果】小麦体内固氮菌数量为(0.2—17.8)×105cfu.g...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
顾小平 吴晓丽
将从毛竹根际分离的２＃菌株（多粘芽孢杆菌），１２＃、１４＃菌株（地衣芽孢杆菌）和从浙江淡竹根际分离的７＃菌株（未最后确定种名），分别培养制成菌悬液，回接毛竹实生苗，进行人工控制条件下的无菌盆栽（沙培）试验。结果显示接菌能不同程度地提高毛竹幼苗成活率并促进其生长，尤其是对根鲜质量增加明显，增幅为４４．１％～７６．９％，分别达到显著（１４＃菌）和极显著（２＃、１２＃、７＃菌）水平。同时，接种联合固氮菌明显提高苗木体内的氮素含量，植株含氮量增幅达２２％～３８．１％。另外，统计分析表明：在无土著菌生长和竞争的条件下，幼苗期接菌处理比种子发芽期接菌处理具更显著的促进植株生长和提高植株含氮量的效果。
关键词：
毛竹 联合固氮 固氮菌 接种 实生苗生长
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙建光 胡海燕 刘君 陈倩 高淼 徐晶 周义清
【目的】了解小麦、水稻、玉米、蔬菜等作物根际固氮菌的优势种群、固氮菌菌株的固氮、抗病、促生潜能以及菌株在系统发育地位和来源作物种类上的分布特点。【方法】采用无氮培养基培养固氮菌,乙炔还原法测定菌株固氮酶活性,平板对峙法测定菌株拮抗病原真菌性能,ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)唯一氮源法定性测定菌株产ACC脱氨酶特性,比色法定量测定ACC脱氨酶活性,通过16S rDNA序列测定和相似性分析研究菌株的分类地位。【结果】94株供试菌株的固氮酶活性在0.99—180.59 nmol C2H4/h.mg蛋白,其中大于10 nmol C2H4/h.mg蛋白的菌株有42株,占全部供试菌株的44.7%;类芽...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
高佩 马亚琼 何永超 王彬贤 马玉花
【目的】对青海野生中国沙棘根际固氮菌进行分离、鉴定及促生能力比较，为挖掘具有潜在应用价值的根际促生菌提供依据。【方法】利用纯化培养方法从中国沙棘根际土中分离固氮菌；通过形态观察、生理生化检测和16S rDNA序列比对鉴定菌株；对固氮菌的解有机磷、解无机磷、解钾、固氮、种子萌发的能力进行测定；将固氮菌接种空心菜幼苗以验证其促生效果。【结果】鉴定出1株哈夫尼菌(N5)、1株不动杆菌(N6)、4株沙雷氏菌(N1、N2、N3、N4)。培养7 d后，6株固氮菌固氮透明圈直径与菌落直径的比值(D/d)为1.23～1.83,N3的D/d最大，较N5提高48.8%;培养3 d后，6株固氮菌溶解有机磷圈直径为6.43～9.65 mm,溶解无机磷圈直径为3.13～5.50 mm,解钾圈直径为8.18～22.17 mm。平板促生试验结果表明，固氮菌可提高空心菜种子萌芽率，并且可显著促进空心菜生长发育。其中，菌株N3和N6促生效果显著，其鲜质量分别为0.24 g和0.26 g,较对照组(CK)增加了33.3%和44.4%。【结论】固氮菌N3和N6分别为沙雷氏菌和不动杆菌，具有较强的解磷、解钾、固氮能力，且均能提高空心菜种子发芽率，促进空心菜幼苗生长发育。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林标声 吕正阳 罗茂春 何玉琴 林占熺
采用DNA电泳、qRT-PCR及Western blot技术分析了在无氮和含氮培养条件下,巨菌草内生固氮菌Klebsiella variicola GN02菌株nifH基因序列长度、基因与蛋白表达量的差异.结果表明,GN02菌株在无氮及含氮条件下均有nifH基因表达,其克隆得到的nifH基因与同属禾本科的甘蔗的nifH基因亲缘关系较近;无氮培养条件下nifH基因和蛋白表达量明显高于含氮条件下的表达量.表明无氮条件能诱导GN02菌株nifH基因表达量的增加,而氮源抑制nifH基因的表达.
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