【目的】洋桔梗耳突曲叶病毒（lisianthus enation leaf curl virus,LELCV）是2015年发现的菜豆金色黄花叶病毒属（Begomovirus）病毒新种。论文旨在探究入侵中国大陆的首个LELCV分离物Tomato-2022的分子特征、亲缘关系、致病性及有效传播介体，为防控该病毒病提供理论依据。【方法】2022年，在广东省广州市增城区发生一种番茄新病害，病株表现叶小、卷曲、叶尖白化症状，采集两份病样提取总DNA，利用Begomovirus通用引物AV494/CoPR进行PCR检测。选取PCR检测为阳性的样品进行RCA扩增、酶切、克隆及测序，获得分离物Tomato-2022的基因组全长序列。采用BLASTn程序对病毒序列进行相似性检索并下载相似性较高的代表分离物序列，进一步用SDTv1.2的MUSCLE alignment方法进行序列相似性比对；利用软件MEGA7.0对获得的Tomato-2022基因组序列及已报道的相似性较高的代表分离物进行系统发育分析。应用酶切连接法构建Tomato-2022的侵染性克隆pGreenII0229-1.6A，通过农杆菌介导注射接种本氏烟叶片和番茄茎秆，测定其致病性。采取室内人工传毒方法，测定烟粉虱MEAM1隐种对分离物Tomato-2022的传播效率。利用LELCV的PCR特异引物对2021—2023年采集于广东省番茄主产区的135份番茄病样进行检测，明确该病毒在广东省的分布。【结果】PCR检测结果表明，两份表现叶小、卷曲、叶尖白化症状的番茄病样感染了菜豆金色黄花叶病毒属病毒。基因克隆与序列分析显示，该病毒分离物Tomato-2022基因组仅含DNA-A，大小为2 757 nt，含有6个ORF。序列相似性比较表明，分离物Tomato-2022基因组序列与已登录GenBank的LELCV各分离物相似性较高，其中与LELCV中国台湾洋桔梗分离物（LC091539、LC091538）相似性最高，为98.33%。系统发育分析显示，Tomato-2022与LELCV的19个分离物聚在一个独立的分支，亲缘关系较近。利用构建的Tomato-2022侵染性克隆pGreenII0229-1.6A，农杆菌介导注射接种本氏烟和番茄，10 dpi，本氏烟上部叶叶缘轻微上卷，1株番茄的新叶轻微卷曲；18 dpi，本氏烟和番茄植株均表现较为明显的卷曲症状；随着接种时间的延长，接种植株的症状越来越明显，30 dpi，本氏烟表现叶脉肿大、叶片严重卷曲，番茄植株的叶片表现卷曲、叶尖白化；PCR检测表明，在接种发病本氏烟和番茄植株中均能检测到LELCV。室内传毒试验证明，烟粉虱MEAM1隐种能高效传播Tomato-2022，当每株番茄接1、5、10头饲毒48 h的烟粉虱时，MEAM1的平均传毒效率分别为26.67%、93.33%、96.67%。PCR检测结果表明，采集的135份番茄病样中，8份样品检测到LELCV，说明LELCV已在广东省定殖。【结论】Tomato-2022是洋桔梗耳突曲叶病毒的一个新分离物，也是在中国大陆发现的第一个分离物，其基因组为单链环状DNA，全长为2 757 nt，编码6个ORF；该病毒分离物是引起广东省番茄曲叶、叶尖白化病的病原，可被烟粉虱MEAM1隐种高效传播。

【目的】明确引起四川番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl disease,TYLCD)的病原。【方法】对采自四川攀枝花市田间表现矮化、黄化和曲叶症状的番茄植株SC64-67,通过PCR、克隆及测序等技术获得病毒及卫星DNA的全基因组序列,并对序列进行变异分析。【结果】利用双生病毒简并引物PA/PB从4个样品中均扩增得到约500 bp的片段,随机选择SC65进行DNA-A全基因组扩增和序列测定,该DNA分子全长为2 732 nts,系统进化分析表明,其与已报道的中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)...

对天津地区新发病害番茄红粉病的致病病原进行鉴定,并研究了不同培养基、温度和酸碱性对该菌生长速率和产孢量的影响,结果表明,造成天津地区番茄红粉病的致病病原为粉红单端孢(Trichothecium roseum (Bull.) Link);番茄红粉病菌菌丝伸长速度以在玉米粉琼脂培养基、V8蔬菜汁培养基、燕麦片培养基、马铃薯蔗糖培养基和黑麦培养基上最快;产孢量以玉米粉琼脂培养基和孟加拉红培养基最多;15~25℃为菌丝生长最适温度,产孢最适温度为20~30℃;粉红单端孢喜好中等偏酸性条件,但有较强耐受碱性环境能力,菌丝伸长和孢子着生以pH 5~9较为适宜。

通过对北京地区番茄叶霉病菌生理小种分化的连续监测,发现了可侵染目前生产上主栽抗叶霉病品种的新小种。采用国际上通用的一套叶霉病生理小种鉴别寄主品种,利用苗期接种鉴定的方法,对新小种进行了多次小种归属鉴定,该小种属于1.2.3.4.9。与目前生产上的优势小种1.2.3和1.2.3.4相比,新小种的分化层次高,致病性更强,虽然现在还不是优势小种,但必须引起高度重视。

本研究对来自10个国家,国内27家单位抗黄化曲叶病毒病的239个番茄品种进行抗病基因的分子鉴定并分析,结果表明:Ty-1和Ty-3a是当前番茄抗黄化曲叶病毒病育种中利用的主要基因,携带复合基因的杂种也主要是这两对基因的利用。

【目的】番茄黄化曲叶病毒病（ＴｏｍａＴｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ，Ｔｙｌｃｖ）是一种影响全世界番茄生产的病害，培育抗病品种是最有效、经济和持久的防控手段。目前生产上应用的抗病品种繁多，但存在对Ｔｙｌｖｃ不同抗性基因的抗性水平研究甚少、了解不够全面的问题。为了解带有不同抗性基因的番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病的抗性，对北京市农林科学院蔬菜中心培育的番茄品种抗病性进行检测，并利用半定量ｒＴ－Ｐｃｒ方法分析抗病基因和抗病蛋白的表达水平。【方法】选取携带有Ｔｙ３ａ／Ｔｙ３ａ的番茄材料秋光２８５（Ｔｙ３ａ纯合）、棚１３７×２４６（Ｔｙ３ａ杂合），携带Ｔｙ１＋Ｔｙ３ａ纯合的秋光１２０、．．．

本研究从患急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中分离到一株优势菌,编号为20160303005-1,通过16S rRNA和分子伴侣蛋白groEL基因序列分析,并结合生理生化特征,将该细菌鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),其血清型为O1:KUT(K untypeable)。基因分析结果显示,该菌株携带可引起对虾AHPND的相关毒力蛋白基因pirA~(VP)和pirB~(VP),但不携带副溶血弧菌临床菌株毒力基因:耐热直接溶血毒素(Thenmostable direct hemolysin,tdh)和相对耐热直接溶血毒素(TDH-related hemolysin,trh)基因。菌株对凡纳滨对虾具有较强的致病性,浸泡感染的半数致死剂量(LD_(50))为7.96×10~3 CFU/ml。对虾急性感染后,6 h肝胰腺颜色变浅,肠胃变空;9 h肝胰腺呈浅白色,萎缩变小。9 h死亡数过半,24 h全部死亡。组织病理学分析显示,感染后对虾肝胰腺小管崩塌,上皮细胞严重脱落,呈现出典型的AHPND病理症状。药敏实验结果显示,该菌对庆大霉素、环丙沙星和头孢他啶等16种药物敏感,对阿莫西林、替卡西林和头孢噻吩等5种药物表现为耐药。上述研究可为该病原的流行病学及药物防控研究提供基本数据。

采用2216E和TCBS培养基分别从患溃疡病半滑舌鳎的肠道和体表病灶分离获得菌株40株,经血平板检验分离菌株的溶血活性,体外筛选并鉴定出3株潜在致病性菌株,即哈维氏弧菌、溶藻弧菌以及副溶血性弧菌。通过将3株潜在致病菌与健康半滑舌鳎的肠道上皮细胞共培养,检测病原菌刺激后半滑舌鳎肠道上皮细胞相关免疫基因的相对表达量及共培养后肠道上皮细胞的凋亡率,对病原菌的致病性进行细胞水平的筛选。结果显示,经哈维氏弧菌刺激后肠道上皮细胞白介素10基因(IL-10)表达量极显著上调,说明哈维氏弧菌引起的共培养上皮细胞免疫反应最为剧烈,且哈维氏弧菌与肠道上皮细胞共培养后导致细胞的凋亡率高达48.3%,其次为溶藻弧菌(36%)和副溶血性弧菌(34.5%),推测哈维氏弧菌为半滑舌鳎溃疡病高致病性弧菌。通过对半滑舌鳎进行浸浴回感实验,结果发现,哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血性弧菌人工回感后第6天半滑舌鳎的累计死亡率分别为100%、95%和75%,与细胞水平检测结果相吻合。实验表明,所筛选到的3株弧菌均具有较强的毒性和致病性,尤其以哈维氏弧菌致病性最强,并由此推测半滑舌鳎溃疡病可能由多种致病菌共同感染所致。

对番茄褐斑病菌侵染条件及致病性的研究表明,温度与保湿时间对番茄褐斑病菌(Helminthosporiumcarposaprum)的侵染有很大的影响。当温度为10℃时,病原菌潜育期达74h;当温度为25~30℃时,潜育期仅为6.0~8.0h。叶面保湿时间愈长,愈利于病原菌的侵染,叶面最少保湿时间为6h。病原菌侵染的最佳温度和保湿时间组合为:温度25~30℃,保湿时间24~48h。不同番茄品种对病菌的敏感性差异较显著,世纪、夏丰为高度感病品种,百果强丰和博爱15号为中抗品种,霸王、皖粉3号和皖粉4号为抗病品种。不同菌龄的H.carposaprum对番茄的致病性也有差异,菌株培养10d时的致病力较强...

为探究连续变温对番茄灰霉病致病性影响,以中抗性品种Money Maker为供试植株,在离体叶片上接种,在RH55%,RH75%,RH85%和RH95%条件下分别设置12个变温处理,研究接种叶片在5d内病斑生长状况。接种后24h开始观察,每隔12h观测1次,以病斑面积和平均生长速度作为衡量依据。结果表明:培养5d后RH55%、RH75%和RH85%条件下10h和12h处理病斑面积明显大于同湿度其他处理;1,2,4,18,20和22h处理生长量出现不同程度的抑制,最大抑制作用可达到70%以上。在RH95%条件下1,2,4h处理生长情况明显低于同湿度其他变温处理,但18,20,22h没有抑制作用。这...

2006年在福建省闽清县种植的反季节番茄上发现一种细菌病害,从病叶和茎杆上共分离到15个细菌菌株,经柯赫氏法则证明均能在番茄上引起相同症状病害,而且从接种病株上又重新分离到了相同细菌.这15个菌株致病力均无明显差异.经革兰氏染色、培养性状、生理生化特性、16S rRNA基因序列等鉴定,确认为丁香假单胞杆菌番茄致病变种.寄主范围测定的结果表明,该病菌除侵染番茄外,人工接种尚能侵染茄子.

为探讨黑龙江流域怀头鲇体表溃烂症的病因及防控措施,本研究采用常规方法从患病鱼的肝脏、脾脏和肾脏等部位分离病原菌,通过人工感染试验确定分离菌株的致病性,并对菌株的基本形态、理化特性、分子特征、毒力基因携带情况及耐药性等进行了系统研究。结果显示,从患病鱼体内分离得到3株病原菌,分别命名为NY-8、NY-9和NY-12;人工感染试验发现,NY-8和NY-9株对试验鱼有较强的致病力,NY-12株毒力较弱;3株细菌混合感染后,鱼体发病症状与临床自然发病症状一致,试验鱼死亡率高达到100%。综合理化特征和16S r RNA基因序列分析结果,确定NY-8、NY-9和NY-12株分别为气单胞菌属的维氏气单胞菌、杀鲑气单胞菌和嗜水气单胞菌。5种毒力基因在3株气单胞菌中的分布表现为两种基因型,h l y+/a e r+/a c t+/a l t+/G C A T+和h l y+/a e r-/act+/alt+/GCAT+,同时携带5种毒力基因的NY-8和NY-9分离株致病性显著高于NY-12株。3株细菌在耐药谱上有一定差异性,NY-8和NY-9株均对4种氟喹诺酮类药物敏感,对氨基糖苷类、呋喃类等药物耐药;NY-12株仅对左氧氟沙星和氟苯尼考等2种药物敏感。

对抗病基因进行抗性评价是番茄抗病育种的重要环节。选用６种抗病番茄材料和２种感病番茄材料，利用携带番茄黄化曲叶病毒（ＴｏｍａＴｏ ｙｅｌｌｏｗ ｌｅａｆ ｃｕｒｌ ｖｉｒｕｓ，Ｔｙｌｃｖ）的烟粉虱对所选番茄材料幼苗接种病毒，统计分析各材料的病情指数、病株率和带毒率，鉴定不同基因型番茄材料的抗性水平。结果表明，所有接种材料中均可以检测到携带Ｔｙｌｃｖ，其中含有Ｔｙ－２和Ｔｙ－５基因的番茄材料对江苏地区Ｔｙｌｃｖ病毒种类抗性较好，Ｔｙ－３次之，Ｔｙ－１抗性相对较弱，Ｔｙ－３ａ在樱桃番茄中抗性强于大果型番茄。本试验为抗病育种过程中对抗病基因的选择提供了一定的参考依据。

为明确江苏苏州某养殖场中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)死亡病因,本研究从病蟹肝胰腺组织中分离到优势生长菌,对分离菌进行致病性、形态与生理生化特征及gyrB基因同源性与系统发育分析。结果显示:分离菌为豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae),分离菌SHZ1对中华绒螯蟹半数致死量(LD_(50))为1.6×10~6 CFU/mL,表明分离株可以引起中华绒螯蟹死亡,确定豚鼠气单胞菌是此次造成中华绒螯蟹出现大规模死亡的病原。为进一步明确分离菌SHZ1毒力携带基因情况,对分离菌进行热敏蛋白酶(eprCAI)、溶血素(hly)、弹性蛋白酶(ahpB)、外膜蛋白(ompA)、胆固醇酰基转移酶(gcaT)和鞭毛蛋白(flgN、flgM、flgA、flaH)共9种毒力基因进行检测,结果表明分离菌携带以上9种毒力基因。耐药性检测结果表明,分离菌对头孢唑啉、万古霉素、苯唑西林、青霉素G、哌啦西啉、氨苄西林等9种药物耐药。

[目的]明确引起山东省济南市侧柏枝枯病的病原菌种类，为该病的防控提供依据。[方法]采用组织分离法和单孢分离法进行病原分离纯化，通过形态学和多基因系统发育分析(ITS、TEF-1α、TUB2)相结合的方法对分离菌株进行鉴定，通过人工接种测定其致病性。[结果]菌落初期白色，菌落中间簇状，后期菌落深灰绿色，背面黑褐色。分生孢子单孢透明，梭形、椭圆形、卵球形。根据形态特征和多基因系统发育分析将分离菌株鉴定为Neofusicoccum occulatum Sakalidis, M. L., Burgess, T. I.。人工接种分离菌株，均可以引起侧柏枝条、鳞叶发病，症状与田间一致。从发病部位同样可以分离获得接种菌株。[结论]明确了N. occulatum是引起山东省济南市林场侧柏枝枯病的致病菌。