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[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐进 范玉顶 周勇 曾令兵
对传统对虾白斑综合征病毒(WSSV)的PCR检测方法中的病毒模板DNA的提取方法加以改进,建立了一种快速检测克氏原螯虾(Procambarus clarkii)WSSV的PCR方法。本方法将克氏原螯虾肝胰腺组织匀浆液冻融3次进行差速离心后,在病毒沉淀中加入50μL蛋白酶K溶液,室温消化5 min,沸水中煮10 min后,10000 r/min高速离心5 min即可取上清液用于PCR扩增,结果显示:与传统的病毒模板DNA提取方法相比,本方法的PCR结果特异性强,扩增效率高,准确率高,可应用于快速大规模检测克氏原鳌虾中的WSSV。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱斐 吕梦园 许梓荣
采用投喂感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)对虾肌肉的方式,对养殖克氏原螯虾(Procambarus clarkii)进行人工感染,以确定WSSV对养殖克氏原螯虾的易感性。结果发现,投喂病虾感染组螯虾的死亡率达到90%,而对照组未出现死亡。采用PCR对试验组螯虾的肌肉进行WSSV检测,发现投喂感染组的阳性检出率为100%,对照组的阳性检出率均为0。PCR检测结果发现,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心脏六种组织的PCR结果均为WSSV阳性,而对照组的各组织检测结果均为阴性。组织切片的光镜观察也证实,濒死螯虾的肝胰腺、中肠、肌肉、鳃、性腺、心...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
裘杰珂 赖勇勇 许英蕾 朱斐
【目的】研究经双乙烯亚胺(BEI)灭活的白斑综合征病毒(WSSV)灭活制剂保护克氏原螯虾Procambarus clarkii抗WSSV感染的效果，以期为白斑综合征的防治提供有效的免疫方法。【方法】应用BEI对WSSV和WSSV超声破碎液进行灭活，通过口服和注射分别对克氏原螯虾进行免疫，再对其进行抗WSSV感染的效果研究。【结果】WSSV在BEI处理24 h可以被完全灭活，通过口服途径用灭活制剂免疫克氏原螯虾7 d后攻毒，克氏原螯虾死亡率显著下降，且口服免疫的效果要好于注射免疫。【结论】经BEI灭活24 h的WSSV灭活制剂对克氏原螯虾是安全的，口服免疫后可以显著降低克氏原螯虾感染白斑综合征病毒的死亡率。图2表3参19
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
洪徐鹏 陆宏达 张庆华 夏思瑶 唐嘉荩 丁正峰 薛晖 唐建清
研究了基础饲料中添加不同浓度的黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)抗白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)的效果。用添加0%、0.2%、0.4%、0.8%黄芪多糖的基础饲料作为药饵,投喂20 d后,对各组经PCR检测WSSV呈阴性的健康克氏原螯虾进行WSSV病毒悬液腹节背部注射攻毒试验,当添加0%黄芪多糖的阳性对照组中死亡率达到100%时,添加0.2%、0.4%、0.8%黄芪多糖实验组的死亡率分别为(86.67±13.33)%、(91.11±7.70)%、(73.3...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
肖广侠 李战军 孟宪红 张庆文 罗坤 孔杰
为了探讨不同PCR检测方法的灵敏度,分别利用TaqMan实时定量PCR、世界动物卫生组织(OIE)公布的巢式PCR引物(简称OIE)、黄海水产研究所种质资源与工程育种研究室(GB)设计的引物(简称GB)及2种巢式PCR对应的一步法PCR,对具有不同白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)含量的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)样品进行检测。结果显示,当使用已知病毒含量的标准品进行检测时,TaqMan实时定量PCR方法可以检测到10个WSSV拷贝;OIE巢式PCR与GB巢式PCR方法分别可检测到104和103个WSSV拷贝;单独使...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于洪涛 张秀丽 黄倢 张士璀
依据白斑综合征病毒的序列设计了7对PCR引物,扩增长度从600bp到1800bp。结果显示,使用dUTP代替dTTP,用普通Taq酶所能扩增的最大长度约为1400bp。Mg2+梯度研究发现,扩增片段长度越长,最适Mg2+浓度越低。使用具有3’-5’外切酶活性的Taq酶无法扩增出任何长度的片段。
关键词：
dUTP WSSV PCR 极限长度
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
洪徐鹏1 2 陆宏达1 3 张庆华1 2 夏思瑶1 唐嘉草4 丁正峰5 薛晖5 唐建清5
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张正阳 张春莉 施定基 贾晓会 贾睿 何培民
VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到p ET-28a(+)表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒双酶切、测序鉴定后成功地构建了VP28基因原核表达载体p ET-28a-VP28。转化菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示含有与预期大小一致的约30 ku蛋白带,主要以包涵体形式表达。采用Ni-IDA-Sepharose C
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈一铭 顾泽茂 李莉娟 陈天圣 袁军法
为揭示白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)感染克氏原螯虾(Procambarus clarkii)后对其肠道菌群的影响,运用16SrDNA基因的高通量测序技术分析健康与人工感染WSSV的克氏原螯虾的肠道菌群的组成及多样性。结果显示,感染组与对照组在肠道丰度及多样性无显著差异,但其优势菌群组成发生变化。对照组优势菌门为变形菌门(Proteobacteria)和软壁菌门(Tenericute),分别占75.42%和19.17%;感染组肠道优势菌门为变形菌门和拟杆菌门(Bacteroidetes),分别占78.14%和17.38%。利用LEfSe分析差异菌属发现,感染组与对照组相比,Candidatus bacilloplasma丰度显著减少(P<0.05),拟杆菌科(Bacteroidaceae)和黄杆菌科(Flavobacteria)的丰度显著上升(P<0.05)。此外,部分潜在病原菌如黄杆菌属(Flavobacterium)、气单胞菌属(Aeromonas)的丰度在感染后显著升高(P<0.05)。以上结果说明WSSV感染导致克氏原螯虾肠道菌群发生变化,提示WSSV或可通过干扰肠道稳态致病。
[期刊] 水产学报
[作者]
兰江风 代云佳 林蠡
近年来克氏原螯虾的养殖受到ＷＳＳＶ的威胁，病毒在宿主组织中的绝对定量对于了解病毒的致病性具有重要意义，但克氏原螯虾组织中ＷＳＳＶ的绝对定量分布还有待研究。实验调查了湖北省５个主养区克氏原螯虾ＷＳＳＶ的感染率，结果表明８０％以上克氏原螯虾都携带有ＷＳＳＶ。采用ＷＳＳＶ－ＶＰ２８蛋白特异性抗体对克氏原螯虾提取蛋白进行ＷｅＳｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测，在ＷＳＳＶ－ＰＣｒ阳性样品中可检测到ＶＰ２８特异性条带，在ＷＳＳＶ－ＰＣｒ阴性样品中没有检测到相应条带。采用实验室建立的ＷＳＳＶ绝对定量ＰＣｒ方法，对携带病毒的克氏原螯虾６个组织（鳃、胃、肠、血淋巴细胞、肝胰腺和心脏）进行检测。结果表明，在鳃、胃和肠可检测．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李贺水 曾勇 栾青
将白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)、大肠杆菌(Escherichia coli)(DH5α)用注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii),在072 h之间定时检测克氏原螯虾血细胞和肝胰脏中酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)活力变化。结果显示:(1)0.1 mg/m L和1 mg/m L胰蛋白酶处理样品后,样品间差异不显著。(2)加胰蛋白酶处理与未加胰蛋白酶相比,供试克
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
丁正峰 薛晖 夏爱军 唐建清 刘丽平 刘伟杰
2007年,在从南京采集的患病养殖克氏原螯虾样品超薄切片中发现大量类似对虾白斑综合征病毒(WSSV)颗粒,结合初步的流行病学调查、人工回感实验及PCR检测结果确定导致此次养殖克氏原螯虾大规模死亡的病原为WSSV。利用建立的特异性引物PCR方法,在江苏省内扬州邵伯湖、淮安白马湖、盱眙、南京禄口等多处养殖克氏原螯虾体内均检测到该病毒,且在鳃、心肌、神经、肝脏、肠道、肌肉等多处组织中被检出;未检测到另外两种常见对虾病毒:桃拉病毒(TSV)和传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
黎小正 韦信贤 吴祥庆 黄国秋 黄玉柳
Taura综合征病毒(TSV)是世界动物卫生组织(OIE)目录规定的水生动物二类疫病病原体。本研究在RT-PCR方法检测TSV行业标准的基础上,优化建立了能更准确检测TSV的套式RT-PCR。敏感性试验结果表明,所建立的套式RT-PCR的灵敏度大约为常规RT-PCR的103倍,最低可检测到10fg的TSVRNA。分别应用两种RT-PCR方法对180份来自广西沿海不同对虾养殖场的对虾临床样品进行检测,其中套式RT-PCR共有52份检出TSV,而常规RT-PCR仅有23份检出TSV。表明所建立的套式RT-PCR提高了TSV的阳性检出率,较常规RT-PCR有更大的应用价值和意义。
[期刊] 水产学报
[作者]
沈锦玉 袁军法 潘晓艺 曹铮 顾志敏 尹文林 石正丽
The cultivation of redclaw crayfish(Cherax quadricarinatus) is developing in recent years.The disease of Cherax quadricarinatus was one of the major factors in its culture and even caused redclaw crayfish to die.The viral disease was found in polyculture of redclaw crayfish with Penaeus vannamei.Hae...
关键词：
红螯螯虾 杆状病毒 病毒检测
[期刊] 水产学报
[作者]
何琦瑶 汪开毓 刘韬 刘绍春 贺扬 叶彩燕 何晟毓 秦振阳 谢恒
近年来在湖北省范围内人工养殖的克氏原螯虾暴发了严重的疾病,其中白斑综合征病毒(WSSV)已成为危害克氏原螯虾健康养殖的重要病原。2016年5月湖北省潜江市养殖区暴发了一种传染性疾病,为探究此次疾病病因和流行规律,将染病虾进行临床症状观察、对病料进行PCR检测、系统发育树分析、人工感染和组织病理学观察。结果显示,发病克氏原螯虾临床症状主要表现为摄食减少,活力下降,反应迟钝;组织病理学观察结果显示,克氏原螯虾的肝胰腺、肠、肌肉、鳃组织均出现不同程度变性和坏死以及炎性细胞浸润等典型病理学变化,与WSSV感染克氏
关键词：
克氏原螯虾 白斑综合征 组织病理学
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