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[期刊] 西南农业学报
[作者]
王继莲 李明源 任羽
【目的】从新疆东帕米尔高原布伦口湖群湿地分离产蛋白酶耐低温细菌,对其进行初步分类鉴定,为后续低温酶制剂的研究应用奠定理论基础。【方法】利用脱脂乳选择培养基筛选产低温蛋白酶菌株,并对其表型特征、生长特性及产酶性状等进行研究,结合16S rRNA基因序列确定布伦口湖群湿地产低温蛋白酶功能菌株的遗传多样性及分类地位。【结果】共筛选出6株产蛋白酶菌株,其在15℃条件下均能生长繁殖,属耐冷菌,但耐盐性一般,能在低温条件下发酵产酶,生长稳定期达到产酶高峰。16S rRNA基因序列初步确定4株为假单胞菌(Pseudom
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王继莲 李明源 任羽 陈芸
从慕士塔格峰江布拉克冰川融水中筛选获得一株耐低温蛋白酶细菌菌株Ｐ３－１，１６Ｓ ｒ ＤＮＡ序列分析鉴定为假单胞菌，其分泌的蛋白酶最适催化温度为２５℃，符合低温酶特性．通过单因子筛选及正交试验优化Ｐ３－１发酵条件，确定其最佳产酶培养基配比为：３．０％葡萄糖、１．５％蛋白胨、０．３％Ｍｇ ＳＯ４，最适宜培养条件为：接种量３％，Ｐ Ｈ ７．０，发酵时间４２ Ｈ．在此条件下菌株发酵产酶活力可达８２．１ Ｕ·Ｍ Ｌ～（－１），是最初（３７．３ Ｕ·Ｍ Ｌ～（－１））的２．２倍．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王全富 缪锦来 李光友 侯艳华 王国栋
从南极获得的260株低温细菌中筛选到107株具有蛋白酶活性菌株,其中5株菌所产蛋白酶的活性高于45U/mL。对其进行16SrRNA基因序列的同源性和系统发育分析,结果表明,菌株NJ276、NJ59、NJ1670、NJ345属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas),NJ341属于科尔韦尔氏属(Colwellia)。对其中NJ276、NJ341、NJ1670、NJ345这4株产蛋白酶南极嗜冷菌的生长及分泌蛋白酶的部分酶活特性进行研究,结果表明:(1)4株菌最适生长、产酶温度均为10℃左右;培养2～5d,嗜冷菌生长、产酶量一直处于较高的状态。(2)4株南极嗜冷菌分泌的蛋白酶的酶活反应...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李卓伟 袁洪水 李佳 许净净 朱宝成
通过初筛从健康青年鸡肠道内容物中分离到67株产蛋白酶菌株,采用酪蛋白平板法进行复筛,并对P-98菌株进行形态特征观察、生理生化试验和16S rDNA基因的序列分析。将该菌株的形态特征和生理生化特性鉴定结果与相应种、属模式菌的性状比对,菌株P-98与芽孢杆菌的相应性状相近。根据16S rDNA基因序列相似性分析,此菌株与Bacillus methylotrophicus标准菌株FZ42相似度达99.78%,因此鉴定该菌株P-98为Bacillus methylotrophicus。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑津辉
为获得性状稳定、高产的碱性蛋白酶菌株,采用平板诱变法对产碱性蛋白酶菌株进行诱变处理。结果表明,采用牛奶平板法及Folin测酶活法从鸡粪土样获得产碱性蛋白酶出发菌株。该菌株经亚硝基胍(NTG)诱变并利用利福平抗性株筛选获得蛋白酶活力为出发菌株34,65倍的2个变异株。因此,利用亚硝基胍作为诱变剂可产生高产酶菌株。
关键词：
碱性蛋白酶 筛选 诱变育种
[期刊] 淡水渔业
[作者]
鲜莹 谢从新 何绪刚 杨慧君 胡雄 陈柏湘
采集渔-稻复合系统中的水稻根际淤泥,筛选出有较强产胞外蛋白酶能力的菌株并研究环境因素对其产酶活性的影响。结果显示,通过初筛、蛋白酶复筛等筛选得到一株菌株(编号PRO9);此菌株所产产胞外蛋白酶能够促进水体中有机物质发生氨化反应,减少有机氮含量。此菌还具有产胞外碱性磷酸酶的能力。菌株鉴定结果显示此菌为芽孢杆菌。PRO9菌株所产的胞外蛋白酶在67℃下酶活性最为活跃,最适pH为7,属于中性蛋白酶。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李玉祥 赵明文 季哲
采用分割切块法测定了 3个草菇菌株 (V0 1、V0 2和V0 3)在低温下的致死时间。结果表明 :V0 1、V0 2和V0 3菌株在 0、 2和 4℃下的致死时间分别为 2 4、 4 8和 32h ,4 8、 88和 6 4h ,96、 192和 14 4h。用 0 0 1%吖啶橙诱变草菇菌株V0 1担孢子 30min ,致死率达 70 4 % ;对诱变处理的担孢子萌发形成的菌体进行低温临界致死处理 ,杀死低温敏感菌株 ,采用覆层平板法筛选出 4株耐低温的草菇菌株
关键词：
草菇 临界冷致死时间 覆层平板法
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
尚晓瑛 程旭艳 霍培书 李季
为增加用于堆肥的耐低温纤维素分解菌的资源,通过微生物筛选实验及纤维素酶活力测定实验,从黑龙江双峰林场采集的腐殖土样中筛选得到8株耐低温纤维素降解菌,其中菌株B6-15的纤维素酶活性最高,为24.94U/mL,且该菌在初始pH 7.0,NaCl质量分数0.25%,20℃环境中培养时生长量最大。采用形态学、生理生化特征及16SrDNA核酸序列分析鉴定的方法,初步确定该菌属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。对菌株B6-15所产纤维素酶的热稳定性进行研究,结果显示在10℃存放后仍能保持54.43%的酶活性,表明该耐低温菌所产的纤维素酶为低温酶。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
柯野 杨家臣 屈奇奇 袁小枚 黄镜如
【目的】解析Streptomyces sp. DJ菌株编码的3种角蛋白酶的氨基酸序列、二级结构、三级结构及其功能的关系。【方法】基于DJ菌株全基因组测序结果,利用Bio-edit、DNAMAN、Discovery Studio2.5等软件、https://swissmodel.expasy.org/等网站对其3种角蛋白酶的序列和结构进行了分析和预测。【结果】DJ菌株胞外分泌3种角蛋白酶(K1、K2和K3)均属于S8家族的丝氨酸蛋白酶,信号肽、前导肽和成熟肽在氨基酸残基的组成、极性和长度等方面较一致。3种酶均能以5WSL.1.A为模板进行同源建模,每种酶的3-D结构中均含有6个α螺旋、2个3_(10 )α螺旋和15个β折叠的二级结构;其中K1酶含有2个二硫键,1Ca和2Ca位点,K2和K3各有1个二硫键,1Ca位点;3种酶的Pro270残基位于loop环,而仅有K2的Pro242残基位于loop环中。3种酶底物结合区域主要由疏水性残基构成,偏向于疏水性强的底物。3种酶的底物结合区域比较而言,S1和S2对底物特异性起关键作用;由于3种酶的S1和S2中重要位点残基的不保守性,使其底物特异性具有差异。【结论】DJ菌株中3种角蛋白酶在氨基酸、二硫键、脯氨酸和钙结合等的不同致使酶稳定性的不同;并且由于其表面电荷分布、底物结合区域的差异构成对羽毛水解位点的互补性,这可能是DJ菌株高效降解羽毛的重要原因。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孙妍 王加启 奚晓琦 卜登攀 魏宏阳 周凌云
以北京、大连和日本3个产地的纳豆产品为试验材料,从中筛选可用于畜禽生产的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)蛋白酶高产菌株。先通过酪蛋白平板初筛得到9株芽孢杆菌,再以N1型纳豆芽孢杆菌为模式菌株,对初筛得到的菌株进行菌落和菌体形态观察、生理生化鉴定,确定有5个菌株为纳豆芽孢杆菌。测定5个菌株48 h发酵液中蛋白酶活性,结果表明:菌株NB1为蛋白酶高产菌株,发酵液中蛋白酶活性为19.41 U.mL-1,产蛋白酶特性在6代内可保持稳定。
关键词：
纳豆 纳豆芽孢杆菌 蛋白酶 筛选 鉴定
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
覃映雪 苏永全 陈雅芳 王军
采用复性电泳技术,研究环境pH、温度及培养时间对哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的影响。结果表明,胞外产物蛋白酶最适反应pH在8.5左右,酸对ECP蛋白酶活性的抑制明显强于碱对它的抑制作用;最适反应温度在20～50℃之间,20℃以下或50℃以上蛋白酶活性则受到明显抑制,表明蛋白酶不仅对高温敏感,对低温也很敏感;培养12h的胞外产物蛋白酶活性最强。最适温度和pH条件下,主要出现3种蛋白酶,其中分子量为94kDa和26kDa的两种蛋白显示了很强的蛋白酶活性,而且能在比较极端的温度和pH值条件下保持活性,而分子量为35kDa蛋白酶只在最适反应条件下出现,并且该蛋白酶的最适反应条...
关键词：
哈维氏弧菌 胞外产物 蛋白酶
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
马子宾 郑鸿飞 刘均忠 郝建华 孙谧
通过生理生化、分子生物学、单因子优化等方法研究了来自南海海域一株产中性蛋白酶菌株S-3685,并对其在250 ml摇瓶中的培养条件进行了优化。结果显示,该菌株初步确定为芽孢杆菌属(Bacillus),发酵培养的最佳碳、氮源分别为葡萄糖10 g/L和豆面10 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母膏5 g/L。无机盐Mg SO4·7H2O、Na2CO3、KH2PO4最佳浓度分别为0.2 g/L、2.0 g/L、1.0 g/L;菌株在培养基起始p H=7.0、4%接种量、15 ml/250 ml(v/v)装液量和30℃的条件下,发酵72 h获得较高的酶产量。在最佳培养条件下产酶量为4250 U/ml,是优...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
舒伟学 马怡茗 李晓霞 张晋龙 柯欣 颜霞 颜华 贾良辉
【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物，为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法，以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选，筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析，对菌株进行分类鉴定，并探讨其最适发酵条件。利用硫酸二乙酯（DES）和亚硝基胍（NTG）对目的菌株进行诱变，确定最适诱变条件，并进行原生质体融合，通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株。【结果】分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株，该菌落圆形凸出，革兰氏染色呈阳性
关键词：
角蛋白酶 节杆菌属 诱变 基因组改组
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈营 王福强 李绪全
采用Folin -酚试剂法测定在不同pH值时三株芽孢杆菌Y2 - 2、F14、Y1- 13的酶活力 ,研究细菌生长与蛋白酶活力的关系。结果表明 ,在细菌生长初期 ,蛋白酶活力较小 ,随着细菌生长进入稳定期 ,蛋白酶活力逐渐增大。在同一生长阶段 ,芽孢杆菌发酵液的蛋白酶活力随pH值的增加而增大 ,在pH值为 9时达到最大值。证明该三株菌所产蛋白酶均为碱性蛋白酶 ,其中以Y2 - 2、F14的酶活力基本相当 ,且在整个实验中测得的酶活力均比Y1- 13的酶活力大。
关键词：
芽孢杆菌 蛋白酶 酶活性
[期刊] 草业科学
[作者]
刘红玉 曾泰儒 张云飞 文兴金 刘海平 张磊 肖启银 李小梅 闫艳红
本研究旨在挖掘出低温条件下生长速率和产酸速率俱佳的乳酸菌，并将其回接至若尔盖县白河牧场的青贮燕麦（Avena sativa），研究耐低温乳酸菌对燕麦青贮饲料发酵品质的影响。通过限制性培养方法筛选耐低温菌株，并结合16S rRNA序列分析技术进行鉴定。结果表明，1)乳酸菌菌株YZ3在4 ℃低温条件下产酸性能最佳（pH可达到5.38），且能耐低pH（4.0）和高盐浓度（6.5% NaCl）环境；2)通过生理生化试验、菌落形态、革兰氏染色以及16S rRNA序列分析表明，乳酸菌YZ3为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）；3)低温环境下YZ3处理的燕麦青贮乳酸含量升至63.7 mg·g-1，显著高于对照（P ＜ 0.05），青贮料pH降低至4.1，显著低于对照组（P ＜ 0.01）。综上所述，添加乳酸菌YZ3能够改善燕麦的青贮发酵品质，YZ3可作为川西北高寒地区的低温青贮菌株。
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