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[期刊] 中国农业科学
[作者]
代龙军 项秋兰 黎瑜 聂智毅 康桂娟 段翠芳 曾日中
【目的】分析巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Müll.Arg.)橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;...
[期刊] 林业科学
[作者]
史敏晶 吴继林 郝秉中 谭海燕 田维敏
【目的】橡胶树乳管细胞所富含的一种特征性细胞器是橡胶粒子，其主要功能是合成和贮存天然橡胶，但该细胞器的起源仍无定论。通过观察不同发育阶段乳管细胞的超微结构，比较分析橡胶粒子的发育与其他细胞器之间的关系，探明橡胶粒子的起源，为进一步认识橡胶粒子的功能奠定基础。【方法】利用透射电子显微镜技术，观察橡胶树萌条幼茎和成龄树树干的树皮中不同发育阶段的乳管细胞超微结构，分析最初的橡胶粒子与其他细胞器之间的关系。【结果】幼嫩萌条的初生乳管细胞的细胞质浓厚，可辨认的最初的橡胶粒子呈电子致密小球，主要分布在富含内质网和核糖体的区域。成龄树树干树皮形成层附近的幼嫩次生乳管细胞中，分布有大量的内质网和比较稀疏的橡胶．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
聂智毅 黎瑜 康桂娟 蔡海滨 曾日中
依据橡胶树胶乳转录组数据,利用RT–PCR技术鉴定了一个快速碱化因子(rapid alkalinization factor,RALF)家族基因cDNA序列。该cDNA长度为767 bp,开放阅读框长度为411 bp,编码136个氨基酸。序列比对显示该RALF基因与AtRALF34有较高相似性,因而命名为HbRALF34。以热研7–33–97无性系橡胶树为材料,采用实时荧光定量PCR对不同组织及乙烯、茉莉酸、伤害、过氧化氢、高盐、低温、干旱等处理下HbRALF34的表达模式进行分析。结果表明:HbRALF
[期刊] 林业科学
[作者]
罗明武 邓柳红
从产胶形态结构及生理学研究、分子生物学研究、排胶机制研究、割胶及乙烯刺激对产胶排胶的影响等方面对巴西橡胶树的产胶与排胶机制进行综述。
关键词：
巴西橡胶树 产胶 排胶 乙烯 割胶
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘辉 韦永选 邓治 代龙军 杨洪 李德军
为阐明巴西橡胶树WRKY转录因子基因Hb WRKY41的分子特征及表达特性,利用RT-PCR方法从巴西橡胶树中克隆了该基因。Hb WRKY41开放阅读框1 020 bp,编码339个氨基酸,预测蛋白分子量为38.48 k Da,理论等电点为5.52。Hb WRKY41含有1个WRKY保守结构域和1个C_2HC型锌指结构,与蓖麻、棉花、大豆及拟南芥WRKY41蛋白聚为一类,属于Ⅲ类WRKY转录因子家族成员。实时荧光定量PCR检测结果表明,Hb WRKY41在巴西橡胶树根、树皮、胶乳、叶和花等组织中均有表达,
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
康桂娟 黎瑜 曾日中
利用RT–PCR和实时荧光定量PCR技术,对巴西橡胶树膜结合转录因子Hb NTL2进行克隆和表达,并通过酵母试验进行转录激活功能分析。结果表明,Hb NTL2基因的开放阅读框为1 380 bp,编码一个由459个氨基酸组成的蛋白,该蛋白属于NAC转录因子家族中的ANAC001亚族;在第6~172位氨基酸之间含有典型的NAC结构域,第433~453位氨基酸具有跨膜结构域,是膜结合NAC转录因子;Hb NTL2具有转录激活功能,转录激活区在C–末端;Hb NTL2在叶片的表达高于在橡胶树的其他部位,受割胶、茉莉酸(JA)和乙烯(ET)处理以及低温胁迫诱导。综合分析结果表明,Hb NTL2可能参与调...
[期刊] 林业科学
[作者]
史敏晶 吴继林 郝秉中 谭海燕 田维敏
利用光学和电子显微镜技术,对巴西橡胶树树皮中单宁细胞的形态结构和发育过程进行研究。结果表明:除伴胞外,次生韧皮部中几乎所有的薄壁细胞都含有单宁类物质,乳管周围的薄壁细胞中尤其易积累单宁,石细胞和周皮中的木栓层以及栓内层细胞中也有大量单宁积累。电镜下,单宁细胞中央大液泡中积累的单宁可分为絮状、不规则状、颗粒状和板块状4种类型。在单宁细胞发育过程中,单宁首先在细胞质中产生,中央大液泡形成后则成为积累单宁的主要场所并最终被单宁类物质充满。机械伤害、强割、外施乙烯利以及茉莉酸(JA)都能大幅提升单宁类物质的积累,可见橡胶树对这些因子都能做出防御性应答。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
翟旭光 潘志芬 商闯 邓光兵 余懋群
为了研究燕麦麦谷蛋白亚基组成及遗传多样性,本研究采用SDS-PAGE电泳方法对71份不同染色体组型的燕麦材料的麦谷蛋白,进行了电泳分析,并以中国春为参照,按条带迁移距离大小命名,分析条带多态性并以燕麦麦谷蛋白点泳图谱为依据对供试材料进行聚类分析。电泳结果显示燕麦麦谷蛋白主要集中在分子量较低的C区,高分子量麦谷蛋白没有检测到条带。71份燕麦材料共产生20种不同条带,条带g和条带i比较保守,出现的频率分别为64.8%和85.9%。各种条带组合形成62种不同的组合带型,多态性为87.3%。聚类结果显示燕麦麦谷蛋白的电泳谱型与材料的染色体组有很大关系,具有相同染色体组型的同种属的燕麦材料一般先聚为一类...
关键词：
燕麦 麦谷蛋白 SDS-PAGE 聚类
[期刊] 水产学报
[作者]
胡秀彩 沈晓静 吕爱军 孙敬锋 YEONG Yiksung 宋亚娇 李莉 孔祥会
为了建立鱼类皮肤蛋白质组双向电泳图谱及质谱鉴定，以鲫为实验动物，采用蛋白双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术，进行鲫皮肤的蛋白质组学研究。结果表明，当上样量为８００μｇ，采用１８ ｃＭ、ｐ Ｈ３～１０ Ｉｐｇ胶条，等电聚焦８０ ０００ ＶＨ，２－ＤＥ图谱检测为２１４个皮肤蛋白点，匹配率达８８％；对其中３１个蛋白点进行ＭＳ／ＭＳ鉴定为２２种蛋白，包括肌球蛋白、肌动蛋白、角蛋白、锌指蛋白５８５Ｂ、效应蛋白ＲＡＢ１５、卷曲螺旋结构域蛋白１６８、ＮｃＫ１相关蛋白，肌酸激酶、烯醇化酶、丙酮酸脱氢酶、腺苷酸激酶同工酶等；进行蛋白功能聚类（ｇＯ）分．．．
关键词：
鲫 皮肤 蛋白质组 双向电泳 质谱
[期刊] 林业科学
[作者]
邓柳红 罗明武 曾会才 杨卫帆 张春发
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
索慧英 郑密 卢晗 曲冠证 李莹
[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4～7内,选用24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。
关键词：
小黑杨 蛋白质 双向电泳 优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
曾广娟 李春敏 张新忠 陈东玫 赵永波 董文轩
为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白...
关键词：
苹果 SDS-PAGE 蛋白质提取
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王纪坤 王立丰
本文以中国热带农业科学院橡胶研究所的袋装实生苗(GT1)为材料,研究2种物候期叶片对干旱胁迫的生理响应规律。结果表明,随着干旱强度的增加,橡胶树淡绿期和绿熟期叶片相对含水量均呈下降趋势。干旱处理1 d橡胶树叶片色素含量上升,随着干旱程度的加强,叶片中色素含量降低。丙二醛和脯氨酸含量随着处理时间的延长升高,SOD酶活性表现出先增后降的趋势,POD酶活性表现下降的趋势,可溶性糖含量相对稳定。橡胶苗在抗旱初期的1~3 d自身表现出较强的抗旱调节能力,干旱后3~5 d是补水关键期。
关键词：
巴西橡胶树 干旱 生理活性 GT1
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周权男 谢黎黎 黄天带 华玉伟 戴雪梅 黄华孙
为了评估不同浓度抗生素对胚性悬浮细胞生长的影响,将橡胶树胚性悬浮细胞接种到不同浓度的替卡西林和卡那霉素的培养基上,结果表明,添加0~500 mg/L的替卡西林对胚性悬浮细胞生长影响较小;添加50 mg/L的卡那霉素能抑制胚性悬浮细胞生长,添加100 mg/L的卡那霉素导致部分胚性悬浮细胞死亡。将经共培养的胚性悬浮细胞接种到添加不同浓度替卡西林的培养基上,结果发现,300 mg/L的替卡西林能较好的抑制农杆菌的增殖。替卡西林和卡那霉素可分别作为农杆菌介导的转化橡胶树胚性悬浮细胞的抑菌和筛选抗生素,替卡西林浓度以300 mg/L较好;卡那霉素50~100 mg/L较好。
关键词：
巴西橡胶树 抗生素 胚性悬浮细胞
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
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