- 年份
- 2024(2324)
- 2023(3589)
- 2022(3123)
- 2021(2853)
- 2020(2518)
- 2019(5566)
- 2018(5670)
- 2017(9856)
- 2016(6011)
- 2015(6794)
- 2014(6615)
- 2013(6468)
- 2012(6230)
- 2011(5693)
- 2010(5782)
- 2009(5197)
- 2008(5326)
- 2007(4915)
- 2006(4345)
- 2005(3778)
- 学科
- 济(20701)
- 经济(20677)
- 管理(14818)
- 业(13033)
- 企(10702)
- 企业(10702)
- 方法(10610)
- 数学(9197)
- 学(9188)
- 数学方法(9045)
- 财(5598)
- 农(5455)
- 中国(5092)
- 业经(4251)
- 理论(4053)
- 环境(3996)
- 制(3687)
- 务(3591)
- 农业(3585)
- 财务(3584)
- 财务管理(3573)
- 地方(3491)
- 水产(3489)
- 银(3422)
- 和(3393)
- 企业财务(3387)
- 银行(3384)
- 融(3375)
- 金融(3373)
- 技术(3252)
- 机构
- 大学(89285)
- 学院(88031)
- 研究(35195)
- 济(29429)
- 经济(28789)
- 管理(28207)
- 科学(26956)
- 理学(24573)
- 农(24227)
- 理学院(24172)
- 中国(23972)
- 管理学(23375)
- 管理学院(23245)
- 所(20352)
- 农业(19887)
- 研究所(19270)
- 京(18846)
- 业大(18113)
- 中心(15125)
- 江(14283)
- 财(14026)
- 室(13512)
- 院(12868)
- 农业大学(12681)
- 实验(12587)
- 范(12426)
- 技术(12274)
- 实验室(12207)
- 师范(12117)
- 省(11836)
- 基金
- 项目(64527)
- 科学(49676)
- 基金(46427)
- 家(43579)
- 国家(43287)
- 研究(41369)
- 科学基金(35049)
- 省(26786)
- 自然(25201)
- 自然科(24608)
- 自然科学(24595)
- 基金项目(24296)
- 自然科学基金(24143)
- 社会(24137)
- 划(23595)
- 社会科(22833)
- 社会科学(22822)
- 教育(19441)
- 资助(19244)
- 重点(15918)
- 计划(15468)
- 编号(15294)
- 科技(13850)
- 发(13839)
- 部(13651)
- 创(13492)
- 科研(13463)
- 成果(13149)
- 创新(12784)
- 课题(11955)
共检索到124938条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孙成飞 董浚键 田园园 余嘉欣 叶星
巨核酸酶I-SceI是由酿酒酵母线粒体中核糖体大亚基上的Ⅰ型内含子编码的一种核酸内切酶,近年已被应用于转基因研究中。I-SceI介导的转基因大多是将I-SceI蛋白和带有其识别位点的质粒共注射于动物的受精卵,但注射酶蛋白前期处理耗时长且工作量大,直接用I-SceI的mR NA代替蛋白进行注射更为简捷。本研究应用I-SceI mR NA介导荧光蛋白基因在斑马鱼中的转植,进一步了解其转基因效率。首先设计合成带有巨核酸酶I-SceI编码序列的辅助质粒(pC S2-I-SceI),并分别构建了带有巨核酸酶I-SceI识别位点、EF1α启动子和荧光蛋白基因(eG FP/RFP)编码序列的供体质粒pI-S...
关键词：
巨核酸酶 I-SceI 斑马鱼 转基因
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邵贝丽 严继舟
利用转基因斑马鱼(Danio rerio)189b动态观察侧线系统形成及其对新霉素处理的敏感性。试验结果显示,转基因斑马鱼荧光细胞出现、迁移和定居与侧线神经丘的形成走向和发育时间基本吻合。随着发育时间的推移,荧光点的形态也发生了较大变化,由最初的比较模糊的聚集在一起的荧光团,逐渐变成颗颗分明的荧光点,大小也由大变小。将受精后24 h和6 d带有荧光的细胞暴露于150μmol/L的氨基糖甙类抗生素(新霉素)中,并不影响荧光细胞的数量和分布。结果说明荧光标记细胞对新霉素处理不敏感,不是毛细胞,可能是神经丘形成的先祖细胞。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王瑶 蒋霞云 邹曙明
鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明P...
关键词：
PiggyBac转座子 团头鲂 转基因
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
朱哲 胡沛男 李伟明 祖尧
转录因子TBX20在脊椎动物心脏的腔室发育和维护中起至关重要的作用。利用CRISPR/Cas9系统成功制备了斑马鱼tbx20突变鱼系,T7E1检测结果显示F_0敲除效率平均为42. 1%,测序分析F_1中突变种质遗传效率为36. 7%。F_2突变体中观察到心脏突变表型:48 hpf,心包腔肿大,静脉窦瘀血,环化异常,心脏结构变形; 3 dpf,心脏畸形拉伸成线状结构。原位杂交和qRT-PCR结果显示,突变体中vmhc表达上调,amhc和myl7表达下调。成功制备了斑马鱼tbx20突变体,结果表明tbx20纯合突变体心脏畸形,环化受到影响,为深入探究tbx20在早期心脏腔室分化过程中的作用奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈改拓 周志杰 周泽斌 包林珠 邱军强 李伟明 张庆华
为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响，根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列（coding sequence,CDS），利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达，并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示，ddx27 CDS区及阳性克隆的电泳片段大小以及测序比对均与预期结果一致。蛋白质免疫印迹显示Ddx27重组质粒可正常表达，且蛋白大小与预测结果一致。亚细胞定位显示Ddx27蛋白表达于HEK293T细胞的细胞核中。而且，过表达pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体能够显著增强tp53启动子报告基因载体pGL3-tp53-Luc的活性，为对照组的1.8倍（P<0.05）。以上结果表明，斑马鱼pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体构建成功，能够在哺乳动物的细胞核中表达，且ddx27基因可以促进tp53基因的表达。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈紫涵 周静 王德成 晏博
为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能。本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征，并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3dpf (days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量；qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示：chac1是母源基因，在受精后0-3 hpf (hours post fertilization)时其表达量较高，之后随着母本基因的影响逐渐变小，chac1的mRNA表达量下降；在斑马鱼成鱼中，其在肌肉、卵巢、脑中高表达；此外，突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比，其苏丹黑染色阳性信号更多；chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上，chac1为母源基因，其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。本研究结果为进一步研究chac1在造血及免疫相关疾病中的功能奠定了基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯田田 陶易凡 马昕羽 路思琪 张幸 刘文婷 潘奕凡 强俊
硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desaturates, SCD)是单不饱和脂肪酸合成的关键限速酶,它在调节肝脏脂肪生成、脂肪酸代谢和脂质氧化方面发挥着重要作用。在本研究中,利用RACE技术克隆了吉富罗非鱼(Oreochromisniloticus)的完整scdcDNA序列,qRT-PCR分析了组织表达特点。为了验证scd基因的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建scd基因敲除斑马鱼模型,研究了F3突变体的表型和基因表达变化,并结合高脂饲料实验验证了scd基因缺失后斑马鱼脂代谢的调控机制。结果显示,吉富罗非鱼scdcDNA序列全长1333bp,其中包括173 bp、1008 bp、152 bp的5'非编码区、开放阅读框和3′非编码区,编码335个氨基酸。scd基因在雄性和雌性罗非鱼的各组织中都有表达,在肝脏内表达量最高,脾脏内表达量最低。利用CRISPR/Cas9构建了scd基因敲除的斑马鱼(Daniorerio)模型进行功能验证,与野生型[SCD(+/+)]斑马鱼相比,纯合型[SCD~((–/–))]斑马鱼腹部明显膨大。Western blot和qRT-PCR结果显示,与SCD(+/+)组斑马鱼相比, scd基因在SCD~((–/–))组斑马鱼中表达显著降低(P
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
闫学春 钟莎莎 徐鹏 邹曙明 孙效文
卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PC...
关键词：
Tgf2转座子 Fst1 鲤 转基因效率
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴芳1 2 叶星1 2 邹曙明2 张莉莉1 孙成飞1 田园园1 白俊杰1 2
提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制，探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过 PCR 方法，改造 Tgf2转座子供体质粒 pTgf2-EF1α-eGFP，将肌球蛋白轻链 2 启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中，构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的 Tgf2 转座子供体质粒 pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射，将 Tgf2 转座子供体质粒与 Tgf2 转座酶 mRNA 共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中，共注射受精卵 972 粒，出膜后存活的仔鱼 803 尾，其中...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴芳 叶星 邹曙明 张莉莉 孙成飞 田园园 白俊杰
提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过PCR方法,改造Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
简清 白俊杰 叶星 夏仕玲 梁旭方 罗建仁
为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启动子插入绿色荧光蛋白基因载体,构建成肌肉特异性表达载体。通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转绿色荧光蛋白基因的斑马鱼。绿色荧光蛋白在胚胎期开始表达,随着鱼体的生长表达量有增加的趋势,成鱼在紫外灯下用肉眼即可观察到绿色荧光。转基因鱼绿色荧光蛋白的表达具有明显的肌肉特异性。本研究为下一步特定基因的表达研究和获得有特色的转基因观赏...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨晓光 刘海军
食品安全总是相对的,属于风险事件,但是人们倾向于认为传统食物是安全的,而转基因食品的安全性难于评估。转基因食品的安全性质疑主要包括:营养成分和抗营养因子、转基因作物蛋白质的毒性及致敏性、标记基因的安全性(如耐抗生素)以及非预期效应(长期效应)。对转基因食品的安全评估坚持的原则包括风险分析原则、实质等同原则、个案分析原则和逐步推进原则等。根据国际食品法典委员会对安全评估的指导方针,我国颁布了针对重组DNA植物的安全评
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王瑞 王令 林娟 张存芳 张智英
【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选,首先以已知三锌指蛋白为框架,随机突变单个锌指关键位点氨基酸编码序列,建立人工三锌指蛋白随机库;然后应用细菌双杂交技术,从库中筛选出能够结合CFTR基因靶位点的三锌指蛋白;最后将获得的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ组...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘飞 王凡 郑雅婷 李萌萌 冉娜娜 高晓杨 石亚男 朱娜娜 程惠敏 杨瑞
为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对斑马鱼早期生命阶段下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关功能基因表达的影响，将斑马鱼的受精卵暴露于10、30和300μg/L DEHP溶液中，同时设置空白对照，96 h后，利用实时荧光定量PCR技术，测定斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴上12个功能基因的表达。结果显示，与对照组相比，30μg/L DEHP处理组的Cyp19b、GnRH3、Era和ERβ基因表达量显著升高，GnRH2、Pomc、Mr、Mc2r、Crh、Gr和Crhbp基因在各DEHP处理组表达量显著降低，FSH-β和Crhbp基因表达量无显著变化。以上研究结果表明：DEHP对斑马鱼胚胎/仔鱼阶段的2个主要内分泌分子通路产生了显著影响，将会导致内分泌功能的改变，从而可能影响斑马鱼的后期生长发育。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
昌永华 汤伏生
本文综述生长激素基因、抗冻蛋白基因和珠蛋白基因转移研究进展，并对外源基因的整合、表达和遗传以及基因转移方法、应用前景等进行了讨论
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
