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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
查红波 蒋金书
通过石蜡切片、H.E.染色等研究了巨型艾美耳球虫 Eimeria maxima 在免疫鸡体内的发育及鸡体相应肠道的组织学变化.E.maxima 在非免疫鸡体内有3代裂殖生殖。在其第1,2代裂殖生殖阶段,所见虫体寄生的空肠组织发生粘液变性.在裂殖生殖后期和配子生殖阶段,非免疫攻毒鸡空肠绒毛组织病理学变化明显,包括粘膜上皮大量脱落,固有层淋巴细胞浸润等,有时可见大量上皮间淋巴细胞(IEL)出现,在免疫攻毒鸡,E.maxima 从子孢子的侵入、移行阶段在免疫鸡体内就受到抑制.随着时间推移,第1,23代裂殖生殖受到日益加重的抑制,最终使虫体没有进入有性生殖阶段。给免疫鸡攻毒后24h 即可见空肠...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈刚 蒋金书
利用肠粘膜压片镜检的方法,对 E.brunetti,E.maxima 和 E.acervulina 在鸡体内的发育部位和各期虫体的形态学特性进行了研究,经三次重复试验检查结果表明,E.brunetti 第一代、第二代裂殖生殖主要在空肠和回肠进行;第三代裂殖生殖,配子生殖和卵囊形成主要在空肠、回肠、直肠和盲肠近端进行;第三代裂殖生殖,配子生殖和卵囊形成主要在空肠、回肠、直肠和盲肠近端进行.朋代裂殖体出现时间分别为接种后24～48h;56～80h 和88～96h;小配子体与大配子体均于104～112h 出现,未完全成熟的卵囊和极少数成熟卵囊见于112～120h。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈刚 蒋金书
采用体外脱囊的方法,将布氏艾美耳球虫(Eimeria brunetti)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)的子孢子分别接种于鸡肾原代细胞和9日龄鸡的尿囊腔中,置40～41℃恒温箱内培养,结果如下:①E.brunetti 子孢子接种鸡肾原代细胞后,50h 发现第一代未成熟裂殖体;76h 发现第二代成熟裂殖体;128h 发现配子体,继续培养再无进一步发育。子孢子接种鸡胚尿囊腔后,16～48h 发现第一代裂殖体;60～72h 发现第二代裂殖体;未见到第三代裂殖体;144h 发现小配子体、大配子体和未成熟卵囊,168h 发
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
查红波 蒋金书
通过用地塞米松处理鸡和用特异性抗原作刺激因子的微量全血淋巴细胞转化试验(LPA),研究了雏鸡抗 Eimeria maxima 再感染中细胞免疫现象。结果表明,地塞米松处理可损伤鸡抗 E.maxima 再感染的免疫力.这提示了 CD8+T 细胞、γIFN 及 IL-2等在抗 E.maxima 卵囊抗原刺激因子的微量全血 LPA结果表明,其刺激指数值与鸡抗 E.maxima 再感染抵抗力有关。此反应可用于体外监测鸡体抗 E.maxima再感染的抵抗力。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
格日勒图 徐立新 严若峰 李祥瑞
利用DNA重组技术,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenalla)第2代裂殖子抗原基因MZ5-7的完整 阅读框(ORF,945 bp)克隆到真核表达质粒pcDNA4．0中,构建了DNA疫苗pcDNA4．0-MZ。用同样方法,将鸡成 熟白细胞介素-17(IL-17)基因的完整阅读框(507 bp)与MZ5-7基因串连,使MZ5-7基因位于IL-17基因的上游, 将串连基因克隆到pcDNA4．0中,构建成免疫调节型DNA疫苗pcDNA4．0-MZ-IL-17。2种DNA疫苗纯化后,胸 部肌肉注射免疫1周龄雏鸡(50 μg／鸡),在免疫后3．5,7,15和20 d取注射和非注射部位肌肉组织,分别...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陶建平 沈永林 李文超 辛玲 戴亚斌
用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析。结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异。各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%~82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%~95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%~96.67%,其中南通...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
相权珈 蒲响林 陆明敏 严若峰 徐立新 李祥瑞 宋小凯
[目的]本研究旨在评估巨型艾美耳球虫DNA疫苗候选抗原抵抗巨型艾美耳球虫感染的免疫保护效果。[方法]在之前的研究中，我们从巨型艾美耳球虫（E. maxima）cDNA表达文库中筛选到3个候选抗原EmLPL、EmTregIM-1和EmTregIM-2。本研究中，我们构建真核表达质粒pVAX1-EmLPL、pVAX1-EmTregIM-1和pVAX1-EmTregIM-2，用PLGA纳米颗粒包被所构建的质粒来制备纳米DNA疫苗PLGA-pVAX1-EmLPL、PLGA-pVAX1-EmTregIM-1和PLGA-pVAX1-EmTregIM-2，通过动物免疫攻虫试验观察疫苗的免疫保护效果。[结果]与对照组相比，疫苗免疫均能显著减少球虫感染引起的体重损失和卵囊产量(P < 0.05)。除了pVAX1-EmLPL免疫组外，其它5个免疫组的抗球虫指数（ACI）均在120～160，表明能对巨型艾美耳球虫感染提供部分免疫保护力。其中DNA纳米疫苗组的ACI值均在120以上，高于其对应的裸质粒免疫组。[结论]本研究所构建的3个巨型艾美耳球虫纳米DNA疫苗免疫均能为抵抗巨型艾美耳球虫感染提供免疫保护力。本研究为鸡球虫新型疫苗研发提供候选抗原，为鸡球虫病的免疫防控提供参考。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
索勋 赵忠芳 李安兴 蒋建林 吕艳丽 王振华 吴文学 曲鸿飞
在实验条件下,研究了强效艾美耳牌鸡球虫苗对平养鸡群的免疫效果.实验Ⅰ比较了免疫鸡群和对照鸡群在接种后1,2,3,4,5,6周的肠道病变分。结果表明免疫鸡群较自然感染建立免疫的对照鸡群的免疫整齐度高,判断依据是免疫后2周盲肠细小、内容物亦少的眼观指标。实验Ⅱ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群在攻虫后的三处肠道病变.结果表明免疫鸡群对大剂量卵囊攻击有很强的抵抗力,不免疫不用药组对相同剂量的卵囊攻击抵抗力表现不整齐,不免疫用药鸡群对攻虫没有抵抗力.实验Ⅲ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群的生长情况,结果表明免疫鸡群生长均匀(标准差小),但在接种后第7～14d 有个生长抑制...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蒋金书 胡景辉
采用体外脱囊的方法,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和堆型艾美耳球虫(E.aceroulina)的子孢子分别接种于9日龄 SPF 鸡胚的尿囊腔和鸡肾原代细胞中,置40～41℃恒温箱中培养.E.tenella 子孢子接种 SPF 鸡胚尿囊腔后,24h 后发现早期的第一代裂殖体;34h 后可观察到成熟的第一代裂殖体和裂殖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林青 张志敏 于三科 翟军军 段旭基
用杨凌地区鸡柔嫩艾美耳球虫早熟株和母株分别免疫鸡,对免疫前后鸡体的平均增重、饲料转化率、盲肠病变记分和卵囊抑制率等指标进行了分析。结果发现,早熟株免疫组对球虫再攻击时的卵囊减少率分别为77.3%和67.6%,高于母株免疫组的41.7%和57.1%,且对同种同株球虫攻虫时的保护力优于同种不同株球虫。经2次免疫后,早熟株免疫组的鸡平均增重、饲料转化率均高于母株免疫组和对照组,而盲肠病变记分小于后者;早熟株免疫组经球虫攻击后卵囊的繁殖量明显减少,且卵囊抑制率均在91%以上。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
蒲响林 潘仰栋 相权珈 孙晓婷 陆明敏 严若峰 徐立新 李祥瑞 宋小凯
[目的]为探讨巨型艾美耳球虫Th1类细胞因子刺激性分子Armadillo/β-catenin样重复序列（EmARM-β）蛋白对鸡免疫细胞功能的影响。[方法]利用密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分别分离出鸡外周血单个核细胞（PBMC）、CD8~(+) T细胞和CD4~(+) CD25~(- )T细胞，之后将EmARM-β重组蛋白（rEmARM-β）分别与上述细胞进行体外共孵育6 h，利用CCK-8试剂和qPCR法分别观察其对上述细胞增殖能力及相关细胞因子分泌水平的影响。[结果]经免疫磁珠分选后，流式细胞术检测鸡CD8~(+) T细胞和CD4~(+) CD25~(-) T细胞的纯度分别为93.01%和88.88%。与对照组相比，rEmARM-β能显著促进鸡PBMC的增殖能力，显著上调Th1类细胞因子（IFN-γ和IL-2）和促炎性细胞因子（IL-1β、IL-6和IL-17A）mRNA水平；能显著促进CD8~(+) T细胞的增殖能力，显著上调其IFN-γ、IL-2和TNF-α mRNA水平，能显著上调穿孔素、FasL（Fas配体）和Fas mRNA水平；能显著促进CD4~(+) CD25~(-) T细胞的增殖能力，显著上调其IFN-γ和IL-2 mRNA水平，下调IL-4和IL-10 mRNA水平。[结论]EmARM-β可以有效促进鸡PBMC和T细胞亚群（CD8~(+) T细胞和CD4~(+) CD25~(- )T细胞）的增殖能力，提升其Th1类细胞因子和促炎性细胞因子的分泌水平，提示EmARM-β具有研发鸡球虫病新型疫苗候选抗原的潜力。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈刚 蒋金书
以15日龄公雏作为试验对象,利用 TECHNIOON RA-1000SYSTEM 血液生化分析仪,研究了鸡在人工感染 E.brunetti(41 500个卵囊/只)、E.maxima(42000个卵囊/只)和 E.acervulina(42500个卵囊/只)后3,5,7,9和11d 时其血清中葡萄糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶、尿酸、总蛋白、白蛋白、钙和镁的变化.结果表明:E.brunetti,E.maxima 和 E.acervulina 感染鸡后均可使其血清谷丙转氨酶活性升高,(E.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李博 刘群 蒋金书
AA肉鸡雏鸡分别经口免疫柔嫩艾美耳球虫毒株早熟株 ,用免疫组化ABC法染色检测小肠、盲肠扁桃体、脾脏中CD4 +、CD8+T淋巴细胞动态变化 ;用淋巴细胞转化实验MTT法检测T淋巴细胞活性。结果表明 :球虫免疫鸡后 ,CD4 +T淋巴细胞在一次免疫后迅速增殖 ,第 6天达到第一峰 ,免疫柔嫩艾美耳球虫毒株的鸡盲肠与脾脏中CD4 +T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到 38%和 4 4 % ,免疫早熟株的鸡盲肠与脾脏中CD4 +T淋巴细胞占所有淋巴细胞百分率分别达到 36 %和 4 3% ,而二次免疫后和对照相比很少有显著差异。CD8+T淋巴细胞在一次免疫后比CD4 +增殖速度慢 ,第 9天达...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王景松 郭亚男 王健霖 王建东 张正刚 刘红燕 李继东
【目的】对宁夏某规模化绵羊场大肠杆菌和艾美耳球虫混合感染进行分离鉴定并对靶器官的组织病理学变化进行分析。【方法】采用固体培养基进行细菌病原分离，饱和盐水漂浮法进行寄生虫检测；采用大肠杆菌16S rRNA引物进行基因序列扩增和测序，使用DNA Star软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比较；采用MEGA 7.0软件中的邻接法，依据16S rRNA序列构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析；对靶器官组织进行病理组织学观察。【结果】在伊红美蓝培养基中观察到金属光泽的黑色单一菌落，在血平板中有溶血环的灰色圆形单一菌落，染色为革兰氏阴性杆菌，共分离得到3株菌株；麦克马斯特法检测显示，粪便中有卵圆形，表面光滑的孢子化艾美尔球虫卵囊，其平均OPG为2200，属于轻度感染；对3株菌株16S rRNA扩增片段与阳性对照一致，16S rRNA基因序列构建的系统发育树与大肠杆菌在同一分支；病理组织学观察显示，肠系膜淋巴结淋巴细胞数量减少，有中性粒细胞浸润；肠组织黏膜层绒毛溶解坏死、黏膜上皮结构丢失；回肠固有层内有球虫虫体，呈嗜酸性圆形；空肠间质有中性粒细胞浸润，腺腔有镰刀状球虫裂殖体；结肠局部黏膜有溃疡灶，并有大量弱嗜碱性短杆状物质沉积。【结论】结合病原形态学和分子生物学结果分析表明，该例绵羊群腹泻是由大肠杆菌和艾美尔球虫共同感染所致。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
查红波 蒋金书
借助于改良甲苯胺蓝染色法和荧光测定法,分别检测了巨型艾美耳球虫感染鸡空肠粘膜肥大细胞(MMC)数量和组织胺(HA)含量的变化。结果表明,初次感染巨型艾美耳球虫之后,空肠 MMC 呈减少趋势,至感染后第14天回复至不感染对照组水平.而初次感染组相应空肠 HA 水平呈现出不显著波动后,在感染后第4天达最大值。在再次攻毒试验中,免疫攻毒组 MMC 开始显著增多,尔后呈下降趋势;免疫攻毒
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