[目的]昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)的嗅觉趋化性及适应性是影响其在实际应用中的重要因素。本文目的在于鉴定崇明拟异小杆线虫Heterorhabditidoides chongmingensis DZ0503CMFT(DZ)品系中gsa-1基因的生物学功能,探讨该基因对DZ线虫的嗅觉趋化性及适应性的影响。[方法]根据前期构建的DZ线虫与其自身共生菌菌株Serratia nematodephila DZ0503SBS1~T(S1)及其非自身共生菌S.nematodiphila DR186(186)的数字基因表达谱(digital gene expression profile,DGE)文库中的差异基因,选取化感神经元中广泛表达的G蛋白Gα亚基的基因gsa-1作为研究对象。利用饲喂法将gsa-1的dsRNA导入线虫体内进行RNAi,从而降低线虫体内gsa-1基因的表达量。利用荧光定量PCR检测RNA干扰效果,并统计线虫的趋化性、嗅觉适应性、体长、寿命、发育历期及雌虫比例等变化。[结果]DZ/S1单菌侵染期线虫与DZ/186相比其趋化性及适应性均有显著差异。DZ/S1组的线虫对苯甲醛及活体大蜡螟幼虫的趋化性指数分别是DZ/186组的2.99倍和8.62倍。DZ/S1组的线虫对苯甲醛的嗅觉适应性较DZ/186组更强。gsa-1基因在DZ/S1单菌侵染期线虫中的表达量显著下调,相比DZ/186组下降了34.30%。gsa-1 RNAi后,其表达量相比对照组被抑制了54.19%。gsa-1 RNAi组线虫对苯甲醛的趋化性及对活体大蜡螟幼虫的趋化性明显升高,其趋化性指数分别是对照组的4.22倍和2.14倍。gsa-1 RNAi组与对照组之间嗅觉适应性、体长、寿命、发育历期及雌虫比例没有显著差异。[结论]通过RNAi方法初步验证了DZ线虫gsa-1基因的生物学功能,该基因负调控崇明拟异小杆线虫的嗅觉趋化性。

结合形态与分子生物学特征对从河北省分离的40个异小杆类昆虫病原线虫种群进行鉴定,其主要形态特征(4个典型种群平均值):侵染性幼虫体长=550(520~610)μm,体宽=22.2(20~24)μm,尾长=85.7(80~88)μm,E%=112.5%(105%~119%);雄虫交合刺长度=36.8(33.75~39.0)μm,引带长度=17.9(16.3~20.0)μm,GS%=0.49(0.41~0.59),SW=1.25(1.15~1.43),与嗜菌异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora形态特征相近。经对其中二个典型种群的ITS-rDNA测序,其ITS1-rD...

试图通过对小尺度上不同植被之间的环境因子进行辨析,找出崇明东滩湿地小尺度上植被分异的关键控制因子。通过2008年5月至10月对崇明东滩进行野外实地调查,获得小尺度下(0.05)。在对这5个环境因子主成分分析后发现:最后提取出来的第一主成分的特征值为2.650,可以解释总方差的53%,同时,盐分和水分因子在第一主成分中的载荷达到最大,...

【目的】大豆孢囊线虫(Heterodera glycines)是大豆上最重要的土传病原物之一,由孢囊线虫口针分泌的扩展蛋白(expansin)在线虫侵染过程中发挥了重要作用。本研究旨在鉴定大豆孢囊线虫扩展蛋白基因,并对其结构、组织定位和发育表达特性进行研究,为进一步明确大豆孢囊线虫的寄生、致病机制打下基础。【方法】利用同源基因克隆技术,根据已报道的线虫expansin基因的保守序列设计上下游简并引物,从大豆孢囊线虫2龄幼虫cNDA中克隆expansin基因的EST片段,根据EST片段序列设计RACE特异性引物,通过RACE技术扩增测序后采用DNAstar 7.1和DNAman软件对序列进行比对和拼接,得到大豆孢囊线虫expansin基因c DNA全长;采用CLC sequence viewer 6进行开放阅读框查找、蛋白质翻译和序列比对;使用EBI在线软件Signal P 3.0 Server和TMHMM软件进行预测蛋白质前体信号肽和跨膜结构域预测,GSDS在线软件进行基因组结构分析;使用PHYML软件和MEGA5.0软件最大似然法对获得的基因与其他线虫expansin基因进行比对与系统进化树构建;采用Southern杂交技术分析Hg-exp-1在大豆孢囊线虫基因组中的拷贝数;通过原位杂交技术确定2个expansin基因的表达部位;提取卵、侵染前2龄幼虫、侵染后2龄幼虫、3龄幼虫、4龄幼虫与白雌虫的c DNA作为模板,通过半定量PCR技术分析expansin基因在线虫不同龄期的发育表达特性;根据Hg-exp-1基因序列设计引物扩增并合成dsRNA,对大豆孢囊线虫2龄幼虫浸泡处理24 h后接种大豆植株,分析Hg-exp-1 RNA干扰后对线虫侵染的影响。【结果】从大豆孢囊线虫2龄幼虫中成功克隆出2个扩展蛋白基因全序列,命名为Hg-exp-1和Hg-exp-2,长度分别为1 047和1 037 bp,分别编码长度为288和295个氨基酸的多肽,2个预测蛋白N端均含有信号肽,无跨膜结构域,表明其为分泌型蛋白。序列比对发现大豆孢囊线虫HG-EXP-1序列与马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)GR-EXPB1(CAC83611)和GR-EXPB2(CAC84564)以及非洲茎线虫(Ditylenchus africanus)DA-EXPB1(ADJ57307)等具有高度一致性。Southern杂交分析表明,expansin基因在大豆孢囊线虫中可能以多拷贝方式或多基因家族存在。原位杂交显示它们特异地在大豆孢囊线虫亚腹食道腺表达。Hg-exp-1体外RNA干扰后,2龄幼虫浸泡在dsRNA 24 h,靶基因的转录水平下调,接种后大豆根内线虫2龄幼虫数和雌虫数分别下降了38.3%和43.4%。【结论】从大豆孢囊线虫中成功分离鉴定出2个expansin基因,同时明确了其在大豆孢囊线虫寄生早期过程中起重要作用。

本研究旨在建立一种利用昆虫病原线虫共生细菌培养单菌线虫的方法，可为检测线虫致病力和收集侵染期幼虫提供基础。首先分别分离了甘肃省抗低湿胁迫能力较强的卡森斯氏线虫(Steinernema kraussei) 0657L和非耐旱性短尾异小杆线虫(Heterorhabditis brevicaudis) 0641TY两个品系线虫的共生菌，然后在NBTB培养基上对分离到的共生细菌进行纯化和培养，随后将单菌落转移到LB培养基上。最后，从被侵染的大蜡螟(Galleria mellonella)体内收集种子怀卵成虫至培养有共生菌的LB上孵育，培养以收集侵染期线虫。研究结果表明，本研究所述方法简便快速地分离出了两个品系昆虫病原线虫的共生菌，并可通过培养共生菌收集侵染期线虫，筛选到一种直接从大蜡螟体内分离怀卵成虫至纯化的共生菌上孵育线虫，以快速准确获得整齐龄期的单菌线虫的简便方法。

【目的】研究松材线虫Bxy-cul-1基因的表达特性和生物学功能，明确该基因在松材线虫生长发育中的作用，为从生长发育角度探索特异性的线虫种群增长控制措施提供理论基础。【方法】根据松材线虫基因组数据设计引物、克隆Bxy-cul-1基因，对Bxy-cul-1进行序列、系统发育和蛋白结构预测等生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术和原位杂交技术探究Bxy-cul-1基因在松材线虫各龄期的表达水平和表达部位，明确其时空动态表达特性，采用RNA干扰技术探究该基因在松材线虫生长发育中的作用。【结果】生物信息学分析结果显示，Bxy-cul-1基因CDS全长2 292 bp，编码763个氨基酸，属于Cullin蛋白家族。原位杂交结果表明，Bxy-cul-1基因在松材线虫各发育阶段均有表达，胚胎期全胚胎表达，2龄期广泛表达，3龄期和4龄期主要在肠道、体壁肌肉和尾部表达；成虫期，Bxy-cul-1基因在雌虫的卵母细胞和阴户、雄虫的腹部、交合刺和尾部表达。实时荧光定量PCR结果显示，Bxy-cul-1基因在松材线虫2龄期表达量最高，胚胎期次之，3龄期、4龄期、成虫期表达量依次递减。对松材线虫胚胎干扰后发现，松材线虫胚胎孵化率下降10.44%，未孵化出的胚胎大多停留在1龄末期，虫体腹部形成畸形肿大，不能突破卵壳；孵化出的部分2龄期幼虫也出现畸形性状，畸形虫无法正常伸展，中部食道腺异常膨大，尾部蜷缩。干扰2龄期幼虫，虫体活力下降明显，每30 s头摆频率约下降5次，部分2龄期幼虫也出现畸形性状，畸形虫体形短小，头部、食道腺异常膨大，尾部和腹部扭转在一起，虫体无法正常运动。发育进度试验结果表明，沉默Bxy-cul-1基因后，松材线虫发育进度减慢，干扰组2龄虫发育至成虫比对照组晚4天。【结论】松材线虫Bxy-cul-1基因是Cullin蛋白家族中的一员，基因表达水平及表达部位在不同发育阶段具有特异性。沉默该基因可使松材线虫胚胎的孵化率下降，且出现畸形性状，还会使松材线虫活力下降及发育进度减缓，表明Bxy-cul-1基因对松材线虫生长发育有着重要作用。

【目的】研究MbNramp1基因的功能。【方法】通过异源互补试验鉴定该基因转运铁的功能,并对MbNRAMP1蛋白进行亚细胞定位研究。【结果】MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4在缺铁的培养基上恢复生长。在供试BPDS浓度的培养基上,MbNramp1基因转化酵母突变株DDY4生长状况均明显好于空载体转化后的突变株。培养基中BPDS增加到15μmol·L-1时,转化了MbNramp1的酵母细胞生长状况与野生型相差无几。在30μmol·L-1BPDS时,MbNramp1转化的细胞与低浓度BPDS相比生长延缓,但是明显优于空载体转化的DDY4突变株。与较低浓度BPDS相比,野生型酵母(DY145...

一、祟明鳗苗生产概况上海市崇明县是东南沿海鳗苗重点产区之一,产苗岸滩线约300多公里,是上海市主要鳗苗生产县。崇明鳗苗生产好坏,对整个上海鳗苗出口创汇有着举足轻重的地位。现将1974年以来崇明县鳗苗生产情况简述如下:

由于、1991、1992年崇明蟹苗歉收,引起河蟹价格暴涨,1993年2～3月,崇明市场每500克幼蟹(40～60只),价格高达150～250元,一只仅10克的幼蟹在市场上可以换到5元钱,昂贵的价格刺激了广大群众捕捞河蟹的积极性,致使崇明河道里大小河蟹日益稀少,而对每年蟹苗汛的蟹苗旺发情况又极难预测,尽管如此,1993年蟹苗捕捞还是引起了生产管理部门、科研部门及流通领域高度重视和密切关注。 据不完全统计,1993年崇明蟹苗总产量约2000千克,虽然捕捞量约为1990年的60％,但蟹苗资源量只及1990年的30％。

崇明县堡镇小学创始于19D7年,拥有24个教学班、100多名教职员工、1114名学生。学校设施齐全, 师资雄厚,办学效益卓著,深受社会好评。学校崇尚“以人为本”的教育理念、追求“活、实、新、趣、谐”的办学精神,使家校形成合力,基础特长同发展,德智体美相渗透,垫体质量日益提高。学校开设的双语教学、少儿民乐、教学奥赛等特色项目,效果显著。作为国家极青少年体育俱乐部、市乒乓传统校,校

【目的】禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)是一种严重危害麦类作物的重要植物病原线虫,对农业生产造成巨大的经济损失,然而其致病机制和有效防控方法还有待进一步研究。通过克隆禾谷孢囊线虫的果胶酸裂解酶新基因Ha-pel-1,并对其表达特性进行分析,为后续探究Ha-pel-1的基因功能及其与寄主的互作提供理论依据,并为探讨禾谷孢囊线虫防控途径提供新思路。【方法】采用同源克隆结合RACE技术从禾谷孢囊线虫中克隆出一个新的果胶酸裂解酶基因;采用DNAMAN、Clustal、Signal P 4.0 S

采用盆栽接种2龄幼虫法,对6份番茄Solanum lycopersicum种质材料进行了对南方根结线虫Meloidogyne incognita的抗性鉴定。结果表明:供试的番茄材料对南方根结线虫的抗性存在差异,其中,高抗材料4份,抗病材料1份,感病材料1份;采用酶切扩增多态性序列(Cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS)方法对番茄抗性材料进行Mi-1基因检测,发现TY52、T27和Bss368 3份材料不含Mi-1基因,无限生长(红色)和T24含有Mi-1基因。