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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李硕 郝斐 吴海青 毕兆伟 张志鹏 刘东军 仓明
【目的】肌细胞生成素(myogenin,MyoG)是生肌调节因子(MRFs)基因家族中唯一能在骨骼肌细胞发育与生长过程中均可表达的调控因子,在肌肉细胞分化过程中起着中心调控的作用,它正调控着骨骼肌卫星细胞向成熟肌细胞分化的过程,是唯一不可代替的生肌调节因子。MyoG基因在复制、扩增、基因激活、转录、翻译等多级水平上对肌肉发育进行调控。基因转录的起始阶段是机体生长发育因子进行调控的开端,而此阶段调控的实质是通过启动子和上游调控序列的相互作用,调控目的基因的表达。因此克隆MyoG基因的启动子,探讨启动子区域的启动活性,有助于从理论上揭示MyoG基因表达的关键调控位点,同时也有利于揭示肌肉发育调控的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郑艳玲 唐爽 张涌
为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点HindⅢ融合成一个长为6.7 kb的片段,用其替代表达载体pEGFP-C1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达。结果表明,克隆的GC 3.3、GC 4.3、GC 6.6 3个片段与GenBank中登录的山羊CSN2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了TATA box、GC...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
段安琴 庞春英 朱鹏 邓廷贤 陆杏蓉 陈明棠 杨炳壮 梁贤威
【目的】克隆沼泽型水牛ＶＡＳＡ基因５′侧翼序列，对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测，为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据ＧｅｎＢＡｎｋ已公布的河流型水牛（ＢｕＢＡｌｕＳ ＢｕＢＡｌｉＳ）的ＶＡＳＡ５′侧翼序列，经过同源比对，设计ＰＣＲ引物。以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增ＶＡＳＡ基因５′侧翼序列并进行测序和生物信息学分析。将扩增的ＶＡＳＡ基因５′侧翼片段插入ＰｅＧＦＰ－１多克隆位点处，构建ＰＶＡＳＡ－ｅＧＦＰ－１载体。载体经脂质体转染Ｈｅｋ－２９３Ｔ和ＣＨＯ细胞系，分析其转录活性。【结果】成功克隆沼泽型水牛ＶＡＳＡ ５′侧翼序列及部分ＣＤＳ区序列，共３ ０８１ＢＰ，同源．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
叶斐菲 刘红 蔡生力 王豪杰 李媛媛
稀有鮈鲫是一种新型的模式实验鱼,具有利用转基因技术培育开发成为观赏性鱼类的潜在可能。本实验采用PCR方法,从稀有鮈鲫基因组DNA中分离得到大小为1584bp的β肌动蛋白(β-actin)基因片段。序列分析表明,该片段包括长为1507bp的启动调控区和77bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为109bpβ-actin基因上游调控序列,不翻译的外显子1和内含子1。上游调控序列中含有TATAbox,CAATbox和CArGbox等与转录活性密切相关的作用元件,并且在稀有鮈鲫β-actin基因第一个内含子中也含有1个CArG调控元件。将该启动子片段克隆到绿色荧光表达载体(pAcGFP1-1)上,...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王云鹏 韦正乙 邢少辰 林春晶 王丕武
【目的】从烟草中克隆得到病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,并对其进行活性检测。【方法】通过PCR方法,从烟草基因组中克隆病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,构建该启动子驱动的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p3300-PR1aP-GFP,并用农杆菌介导法将其导入烟草,检测转基因烟草植株经水杨酸(SA)诱导前后GFP的表达水平,通过SDS-PAGE和ELISA对其在不同诱导条件下GFP的表达情况进行分析。【结果】序列分析表明,PR1aP的长度为1 320 bp,含已报道序列的全部顺式作用元件,如水杨酸相关的W-box、ACGT序列等,也有增强子as-a-like元件及...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王珊 陈宏 蔡欣
根据G enB ank中已公布的人、猪和小鼠的MyoG基因的5′侧翼和部分第一外显子序列设计PCR引物,用touch-dow n PCR技术扩增了牛MyoG基因的启动子序列,构建了重组克隆载体pGEM-T-MyoG,并通过PCR扩增、限制性酶切对阳性克隆进行了鉴定、测序及生物信息学分析。结果表明,牛MyoG基因的启动子序列(G en-bank中注册号为AY 882581)长度为672 bp,其与猪、人和小鼠相应序列的同源性分别为94%,91%和88%,且其在不同物种之间具有一定的保守性。牛MyoG基因启动子的克隆与序列分析为进一步研究牛MyoG基因的表达调控奠定了基础。
关键词：
MyoG基因 启动子序列 序列分析 牛
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张晓 罗军 李建华 赵旺生 王伟
【目的】克隆测定西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,FAS)启动子的全长序列,进行活性区域分析,为奶山羊FAS基因功能和表达调控机理研究提供依据。【方法】根据牛和人脂肪酸合酶基因启动子的同源序列以及西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因5′UTR区域,分别设计上、下游引物,以西农萨能奶山羊全血DNA为模板克隆启动子序列。依据生物信息学分析结果重设引物,将FAS启动子基因分段克隆并连接到荧光素酶表达载体PGL-3,与Psv-β-半乳糖苷酶对照载体共转染293、MCF-7细胞,进行荧光素酶活性检测和β-半乳糖苷酶的活性检测。【结果】FAS基因启动子序列全长2640bp,与牛...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
贺郭 王敏杰 陈洪亮 赵树堂 卢孟柱
启动子在基因表达调控中起关键性作用,它在很大程度上决定所控基因表达的时间、空间和强度。依据拟南芥ATH1芯片分析杨树维管形成时期特异表达基因的结果,选取了差异表达基因NST3,通过BLAST比对在杨树EST数据库(PopulusDB)中找到同源性较高的基因NAC068。以毛白杨为材料,在其基因组中克隆得到该基因5'侧翼区901 bp长的片段,命名为pProNAC068,将该片段置换pBI121载体中的CaMV35S启动子,并在84K杨中检测报告基因GUS的表达情况。经过GUS活性检测分析发现:该启动子可以控制外源基因在次生维管组织中特异表达,从而为基因工程中有目的的控制外源基因在维管组织中的表...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
柏亚男 吴茂森 何晨阳
【目的】分子克隆水稻基因OsBTF3启动子片段,明确其对靶基因表达的启动作用,为抗病转基因水稻研究提供理论依据和启动子元件材料。【方法】对OsBTF3编码区上游1387bp的启动子(OsBTF3p)序列进行了克隆和序列分析,构建了OsBTF3p∷GUS融合基因植物表达载体pCAM-OsBTF3p,利用农杆菌介导的水稻遗传转化,获得了39株OsBTF3p∷GUS转基因植株,对OsBTF3p进行了启动活性、组织特异性及病原菌诱导性分析。【结果】分子克隆了OsBTF3p片段,其序列与GenBank中的已知序列一致。在转基因水稻愈伤组织中能够检测到GUS活性,表明该启动子具有启动活性。在转基因水稻叶片...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李君 闫志浩 贾万里 许蒙蒙 张景锋 徐秋良 韩浩园 权凯
脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪水解过程中的主要限速酶，是调控细胞中甘油三酯和脂肪酸之间平衡的关键因子。为了分析奶山羊ATGL基因启动子的结构及转录调控机制，以奶山羊全血DNA为模板，通过PCR技术扩增出ATGL基因5′侧翼序列并进行生物信息学分析；构建了5个不同长度的启动子缺失片段报告基因载体，通过转染奶山羊乳腺上皮细胞并检测其活性，确定其核心区域；分别用PPARG激动剂罗格列酮和SREBP1激动剂T0901317处理细胞，检测其对ATGL启动子活性的影响。结果表明，克隆得到奶山羊ATGL基因5′侧翼序列2 721 bp,包含转录起始位点上游2 024 bp。经在线软件分析发现，ATGL启动子含有真核生物启动子元件TATA-box和CpG岛；对转录因子结合位点预测发现，其上含有FOXO、SREBF1、PPARG、C/EBPα和E2F1等结合位点。启动子活性分析结果表明，ATGL启动子核心区域位于转录起始位点上游-256—+1位，且在-527—-256位存在负调控元件。用罗格列酮和T0901317处理细胞后发现，二者均能显著上调ATGL启动子活性，且罗格列酮作用的区域为-527—-256位，T0901317在-882—-527位发挥作用，表明PPARG和SREBP1调控ATGL启动子活性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周荣艳 魏彦辉 锡建中 李兰会 陈辉 高立杰 张振红
【目的】分析山羊ＰＲＮＰ基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊ＰＲＮＰ基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路；【方法】以山羊ＰＲＮＰ基因序列（ＧｅＮ ＢａＮｋ登录号：ｅＵ８７０８９０）为模板，设计特异性引物，扩增山羊ＰＲＮＰ基因５′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段１１个，并克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体后，鉴定为阳性的质粒和ＰＧＬ３－ＢａＳｉｃ载体分别用限制性内切酶ＭＬ．．．
关键词：
山羊 PRNP基因 启动子 转录活性
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李昊 郭虎 王春生 宋红卫 朴善花 安铁洙
为探明绵羊Ｏｃｔ４基因启动子的结构特点，用ＰｃＲ方法克隆获得了绵羊Ｏｃｔ４基因启动子，并对绵羊、牛和猪Ｏｃｔ４基因的上游调控序列进行对比分析。结果显示，成功扩增获得长度为２ ９５１ ｂＰ的绵羊Ｏｃｔ４基因启动子；绵羊、牛和猪Ｏｃｔ４基因的上游调控序列均含有４个保守区域（ｃＲ１–ｃＲ４），且４个保守区域在３个物种间具有高度同源性；ｃＲ１区域富含Ｇｃ碱基对，且序列上的ＳＰ１／ＳＰ３位点与激素反应元件ＨＲＥ在３个物种中具有１００％的同源性；绵羊和牛、猪的上游调控序列富含Ｇｃ，并存在大量的ｃｃｃ（Ａ／ｔ）ｃｃｃ位点。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王洪梅 张利博 侯明海 王长法 王玲玲 孙涛 何洪彬 仲跻峰
【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5′侧翼区长片段及固定3′端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定。【结果】牛Nramp1基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58—-89区域具有基本的启动子功能,+58—-...
[期刊] 华北农学报
[作者]
翟莹 张军 任巍巍 张闯 赵艳 张梅娟
为获得低温诱导基因GmERF9启动子,并分析该启动子的功能,利用PCR技术从大豆叶片基因组DNA中克隆1885bp的GmERF9启动子序列GmERF9P。序列分析表明,GmERF9P序列中含有多种与逆境相关的顺式作用元件。将GmERF9P构建到植物表达载体pCAMBIA1301上并转化烟草。通过PCR检测共获得6株T_1阳性转基因烟草株系。对野生型烟草和转基因烟草进行低温处理2h,通过GUS组织化学染色和实时荧光定量PCR检测GUS基因的表达量。结果显示GmERF9P在低温处理下能够提高GUS基因的表达量
[期刊] 华北农学报
[作者]
晁毛妮 张志勇 张金宝 温青玉 郭书磊 马亮 王清连
为了克隆棉花Rubisco活化酶基因(RCA)启动子,研究其表达调控的分子机制,以百棉1号为材料,对GhRCAα启动子区2 000 bp的片段进行克隆、顺式作用元件分析以及活性分析,结果表明,许多重要的顺式作用元件包括响应于光、生物钟、逆境胁迫、植物激素以及其他的基本顺式作用元件特异地存在于GhRCAα启动子区;进一步对GhRCAα进行表达特性分析发现,该基因在光合作用进行的主要位置叶片中表达量最高,在其他组织表达量很低,其表达具有组织特异性,这与该启动子区存在许多光响应及组织特异性表达相关元件的结果相一
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