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[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
李元春 沈林 曾燕如
以山核桃Carya cathayensis基因组DNA为模板,对聚合酶链式反应(PCR)体系各组分进行了梯度实验,优化出条带清晰、重复性好的相关序列扩增多态性聚合酶链式反应(SRAP-PCR)扩增体系,并筛选了引物。该体系(25.00μL)为:1×缓冲液0.20 mmol.L-1,脱氧核糖核苷酸(dNTPs),0.20μmol.L-1引物,2.00 mmol.L-1镁离子(Mg2+),33.34 nkat Taq DNA聚合酶,0.80 mg.L-1基因组DNA(以上均为终浓度)。反应条件为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸2 min,5个循环;94℃变...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
王正加 黄坚钦 郭传友 杨萍 王华芳
建立山核桃RAPD反应优化体系是进行山核桃遗传多样性分析的前提。通过对影响PCR扩增结果的主要因子的组合研究,确定了山核桃Caryacathayensis的最适反应体系和扩增程序,即在20μL反应体系中,含2 5mg·L-1(50ng)模板,2 0μL10×Buffer,16 67pmol·s-1TaqDNA聚合酶;各0 2mmol·L-1dNTPs,3 0mmol·L-1MgCl2,0 3μmol·L-1引物。扩增程序为:94℃预变性300s,94℃变性30s,38℃退火30s,72℃链延伸90s,38次循环,72℃后延伸420s。图5表2参6
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
郭金剑 池伟 赵鑫珠 王丽 曾燕如 张秋月
以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料,利用改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法与CTAB裂解-硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP(扩增片段长度多态性)分析体系进行了摸索。结果表明:"!改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;#"采用EcoR I/MseⅠ酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;&%适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT+M-CAT,E-ACT+M-CTG,E-ACG+M-CAT,E-ACG+M-CTG。扩增产物经60 g.L-1变性聚丙...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
赵鹏 Keith E.Woeste 张存旭 程飞 张硕新 蔡靖
核桃属种质资源丰富,其中多数物种木材材质优良,果实可食,营养丰富,为重要的经济树种。以美国白核桃Juglans cinerea、日本核桃Juglans ailantifolia等为材料,通过改良CTAB方法,从嫩芽、新鲜叶片和干叶片中分别提取核桃基因组DNA,并以此DNA为模板对RAPD-PCR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果表明,改良的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染,大大提高DNA的数量和质量。优化适合于美国核桃、日本核桃和杂合核桃的RAPD-PCR反应体系为:在20μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg/mL牛血清蛋白(B...
关键词：
美国白核桃 日本核桃 RAPD 优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
史红丽 韩明玉 赵彩平
建立适宜桃基因组DNA的SRAP-PCR扩增体系,为桃基因图谱的构建和分子标记打下基础。以桃基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从dNTPs、Mg2+、Taq酶、引物、模板5种因素4个水平对桃SRAP-PCR反应体系进行优化,所建立的体系为25μL:dNTPs为0.12 mmol/L,Mg2+为4 mmol/L,Taq酶2 U,引物为0.3 mmol/L,模板DNA50ng。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性l min,35℃复性l min,72℃延伸l min,5个循环;94℃变性l min,50℃复性l min,72℃延伸l min,35个循环,72℃延伸10 min。
关键词：
桃 SRAP 优化 正交试验
[期刊] 林业科学研究
[作者]
陈芬 姚小华 高焕章 常君 王开良 刘曲
对薄壳山核桃32个无性系的雌、雄花开花物候期和花量进行了观测和比较。结果表明:2011——2014年薄壳山核桃无性系开花物候期有所差异,但开花物候类型一致。2013年,供试的32个薄壳山核桃无性系整个花期持续时间为4月24日——5月21日。雄花花期持续时间为11 18 d,雌花花期持续时间为9 17 d;雌花最佳授粉期与雄花散粉盛期持续天数均为3 8 d。依据雌花与雄花开放的先后次序可以确定其中的16个无性系为雌先型,10个无性系为雄先型,6个无性系为同时型;并根据观测结果确定了其中86个可行的授粉组合。最佳的授粉配置方案为:将1号、5号、27号、29号、35号无性系作为马汉、28号、65号无...
关键词：
薄壳山核桃 开花物候 授粉组合 花量比较
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈文充 贾宁 董昂 闫道良 曾燕如
山核桃Carya cathayensis为浙江省重要的经济树种。近年来细胞生物学及分子标记的研究发现,山核桃中存在无融合生殖,天然群体的多态性不佳,存在印迹数量性状位点(iQTLs)。iQTLs与DNA甲基化有关,而DNA甲基化对生物表观遗传调控起着重要的作用,是可遗传的生物现象。甲基化敏感扩增多态(MSAP)是基于PCR扩增多态性的DNA甲基化检测方法。在建立山核桃MSAP标记体系的基础上对来自3个天然居群的山核桃单株样品进行了分析。结果表明:山核桃存在甲基化,非甲基化相对水平大于总甲基化相对水平,且两者间差异极显著(Wilcoxon Rank Sum检验P
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
李顺福 胡恒康 张秋露 徐艳玲 张启香
用简单序列重复区间扩增(inter-simple sequence repeat,ISSR)DNA分子标记技术对山核桃Carya cathayensis不同发育阶段幼胚(第9周至13周)的DNA进行甲基化状态检测。结果表明:17个引物在各个发育时期山核桃幼胚样品中共扩增检测到的128个甲基化位点。甲基化比例随着幼胚的发育逐渐升高,5个时期幼胚甲基化比例依次为23.44%,25.78%,28.90%,40.62%和42.19%。进一步研究表明:5个时期均存在全甲基化位点和半甲基化位点,其中,全甲基化位点所占比例分别为7.81%,8.59%,16.40%,24.22%和25.00%;半甲基化位点所...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭传友 黄坚钦 王正加 方炎明
利用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术,分析了山核桃5个天然居群150个个体的遗传多样性和遗传结构,20条10 bp的随机引物共扩增出252个位点,其中,多态性位点168个,多态位点百分率(PPB)为66.7%。居群水平Shannon′s多态性信息指数(I)在0.199 2~0.280 0间变化,物种水平I为0.410 2;居群水平Ne′is基因多样性指数(H)介于0.129 7~0.205 1之间,物种水平H为0.267 1。遗传变异计算显示,山核桃居群间基因分化系数(Gst)为0.384 5。分子方差分析(AMOVA)表明,居群间基因分化系数为0.341 3,大部分变异存在于居群...
关键词：
山核桃 居群 遗传结构 RAPD
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭瑞 李晓燕 王力荣 王国山
为确立的桃10μL SRAP反应体系,以桃部分品种为试材,采用均匀设计,对SRAP-PCR反应体系中TaqDNA聚合酶、模板DNA、dNTPs、Mg2+、引物5个组分的浓度进行优化。结果表明,桃10μL的SRAP反应体系的最佳组分包括2 UTaqDNA聚合酶5、0 ng模板DNA、0.6 mmol/L dNTPs0、.25μmol/L引物、2.0μL 10×PCR Buffer+Mg2+。利用所确立的体系对其他部分桃种质进行扩增的结果清晰可靠,多态性好。并且利用随机挑选的SRAP引物和SSR引物分别区分鉴定8种桃种质,发现SRAP用5对可以将桃种质区分开,而SSR用13对才区分开,说明在桃品种...
[期刊] 林业经济问题
[作者]
姜春前 沈月琴 黄坚钦 邵金
山核桃产业是浙江省名特优经济林果业中较为引人注目的一大产业。然而,目前的山核桃生产、加工和销售中还存在盲目性及无序的竞争,难以满足山核桃产业可持续发展的要求。本文以山核桃主产区临安市为研究对象,以该产业发展的组织保障体系为研究重点,在对山核桃产业发展的组织需求进行分析的基础上,构建一套适合山核桃产业发展的组织体系,以促进该产业的可持续发展。
关键词：
可持续发展 组织保障体系 山核桃 临安
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
尹跃 曹有龙 陈晓静 何军 张波
以宁杞1号为试验材料,探讨Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、模板DNA用量对枸杞SRAP-PCR反应的影响.建立20μL反应体系,模版DNA 50 ng,Buffer 1×,Mg2+1.5 mmol.L-1,dNTPs 0.3 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,Taq DNA聚合酶用量为1 U,并利用该反应体系,两对不同引物组合Me1/Em1和Me3/Em5对12份枸杞样品DNA进行SRAP-PCR扩增,1.8%琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,不同品种(系)间DNA谱带多态性丰富,说明该体系稳定可靠.
关键词：
枸杞 SRAP-PCR 单因素分析
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
宋双 黄银芝 董雷鸣 黄有军 曾燕如 吴智敏
基于山核桃Carya cathayensis脂肪代谢相关cDNA文库的部分测序结果,发现43条cDNA序列具有简单重复序列(SSR)碱基重复特点,用Primer Premier 5设计了34对表达序列标签-简单重复序列(EST-SSR)引物;建立了适用于山核桃的SSR分析体系,并用设计的SSR引物对对天然群体山核桃40个样品进行了初步的应用性试验。结果表明:34对引物中有4对无扩增产物,3对引物的扩增产物超过了设计范围,27对引物在供试的40个山核桃材料中有较清晰且稳定的目标扩增产物,其中有18对引物的扩增产生了22个多态性位点,占总扩增位点数的47.8%。将SSR标记分析结果与山核桃已有的显...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
陈芬 姚小华 王开良 任华东 常君
对３３个薄壳山核桃无性系果实、核果以及产量之间的差异进行了多重比较，分析了各无性系果实、核果性状以及产量等１２个指标之间的相关性，用１２个指标在３３个无性系之间进行系统聚类分析，结果表明：薄壳山核桃果实性状、核果性状以及产量等１２个指标在３３个无性系之间均达到了极显著差异；３３个无性系果实性状以及产量之间的变异系数最大的是单株鲜果产量（变异系数为８５．７８％），其次是果质量（１２．０５％）、果皮厚（１１．２９％）、果高（６．３４％）、果型指数（５．７４％）、果径（５．３１％），这与３３个无性系核果性状变异系数的大小顺序（单株核果产量、核质量、出核率、核高、核型指数、核径）保持一致；不同无性系果．．．
关键词：
薄壳山核桃 果实性状 核果性状 产量比较
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李蕊倩 何瑞 张跃兵 徐玉梅 王建明
【目的】建立镰刀菌ISSR反应体系和进行镰刀菌的ISSR遗传多样性分析。【方法】利用ISSR-PCR技术,对影响PCR扩增效果的一些因素和ISSR引物进行筛选和优化,通过聚类分析图对镰刀菌遗传多态性进行研究。【结果】镰刀菌ISSR-PCR分析最适宜的反应条件是以UBC885为引物,在20μl反应体系中,2.0mmol·L-1Mg2+,0.5UTaqDNA聚合酶,0.2mmol·L-1dNTPs,0.4μmol·L-1引物,30ng的DNA模板,退火温度为52℃。通过对27株镰刀菌进行了ISSR的遗传多样性分析,选用的11个引物共扩增出79个DNA片段,其中多态性位点为65个,占总扩增片段的82...
关键词：
镰刀菌 ISSR-PCR 遗传多样性
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