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[期刊] 水产学报
[作者]
魏静 于林田 周林燕 张小萍 王德寿
为探讨低等脊椎动物Ｆｏｘｐ１与免疫细胞活化及机体雌激素水平的相关性，本研究首次分离克隆了尼罗罗非鱼Ｆｏｘｐ１的开放阅读框序列，并通过Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｐＣＲ对其ｍＲＮａ表达水平进行检测。结果显示，尼罗罗非鱼具有２种不同基因编码的Ｆｏｘｐ１分子，分别命名为ｏＮＦｏｘｐ１ａ与ｏＮＦｏｘｐ１ｂ；ｏＮＦｏｘｐ１ａ为１７１０ ｂｐ，由１５个外显子编码５６９个氨基酸，ｏＮＦｏｘｐ１ｂ为２０４０ ｂｐ，由１６个外显子编码６７９个氨基酸；ｏＮＦｏｘｐ１ａ／ｂ均含有Ｆｏｘｐ亚家族的特征性结构，即锌指结构、亮氨酸拉链样结构和叉状螺旋结构；与ｏＮＦｏｘｐ１ａ相比，ｏＮＦｏｘｐ１ｂ与高等脊椎动物Ｆｏｘｐ１具有更近的．．．
关键词：
尼罗罗非鱼 Foxp1 雌激素 淋巴细胞
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王玉红 尹晓雪 丁明媚 付胜利 陈萌 郭政 叶剑敏
为了了解尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)细胞转录因子Xbp1-S(On Xbp1-S)的基因序列特征及其在无乳链球菌(Streptococcus alactolyticus)应激和在B细胞分化中的作用,应用RACE克隆技术获得的On Xbp1-S基因全长1380 bp,包括开放阅读框ORF为1155 bp,5?端非编码区(5?UTR)长127 bp,3?端非编码区(3'UTR)长98 bp。On Xbp1-S序列分析推测该基因编码384个氨基酸,分子量为41.32 k Da,理论等
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黎建平 高风英 卢迈新 曹建萌 朱华平 可小丽 刘志刚
通过同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,获得尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的MHC Ⅰα全长c DNA,分析其多态性和组织表达特征。获得的尼罗罗非鱼MHC Ⅰαc DNA全长为1 533 bp,其ORF为1 053 bp。编码的蛋白质分子包含信号肽、MHC结构域、IGc1结构域和跨膜区,并存在丰富的磷酸化位点。与其他硬骨鱼类和哺乳类的相似性在26.86%~74.0%。从6尾鱼中共分离得到6条不同的MHC Ⅰαc DNA序列,其序列中存在多个单核苷酸多态性位点,说明MHC Ⅰαc DNA存在丰富的多态性。q PCR检测表明,MHC Ⅰα基因在脾和心中表达量较高,中等...
[期刊] 水产学报
[作者]
周芬娜 董忠典 李同明 傅咏 王慧
为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列分析发现,尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因含4个外显子和3个内含子,开放阅读框长720 bp,编码239个氨基酸。从4尾尼罗罗非鱼中共得到8条不同的cDNA序列,分别编码不同的氨基酸序列。氨基酸序列比对后发现,序列间存在丰富的多态性,且主要集中在α-1区,多态性位点数远远高于半滑舌鳎MHC ⅡA基因。生物信息学分...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
胡欣欣 曹建萌 卢迈新 陈琼 陈昆平
为了探究补体C9在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫中发挥的作用,本研究克隆并分析了尼罗罗非鱼补体C9基因(OnC9)。结果显示:OnC9的cDNA序列全长2 502 bp,包含1 761 bp的开放阅读框(ORF),编码586个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,OnC9与牙鲆(Paralichthys olivaceus)补体C9氨基酸相似性最高,达73.0%,与其他鱼类补体C9的相似性介于49.3%71.4%之间。实时荧光定量PCR检测结果表明,OnC9基因在所检测的各个组织
[期刊] 水产学报
[作者]
黄琴 张泽明 白孝明 赵长乐 代向燕 陶文静 周林燕 王德寿 魏静
为探究Smoothened（Smo）信号在精巢不同细胞增殖与存活中的作用，分离鉴定了尼罗罗非鱼smo（命名为Onsmo），检测了其在不同组织中的表达分布及在精巢中的细胞表达模式，在尼罗罗非鱼精巢组织的体外培养体系中，用Smo特异性激动剂SAG或抑制剂环巴胺分别进行处理，EdU掺入法及TUNEL法检测了处理后生殖细胞（Vasa~(+)）、Sertoli细胞（Amh~(+)）与Leydig细胞（Cyp17a1~(+)）增殖或凋亡情况。结果显示，Onsmo开放阅读框全长2 478 bp，编码825个氨基酸，含有7次跨膜结构域，与人SMO氨基酸一致性达77%；Onsmo表达于包括精巢在内的多个组织；在精巢中，Onsmo表达于多种不同类型细胞，包括精原细胞、精母细胞、Sertoli细胞以及Leydig细胞；在精巢组织的体外培养体系中，SAG处理对精原细胞增殖具有显著促进作用，而环巴胺处理对Sertoli细胞、Leydig细胞凋亡具有显著促进作用。从而表明，OnSmo信号在尼罗罗非鱼精巢精原细胞增殖与体细胞存活中具有重要作用。该研究首次证实了Smo信号在鱼类精巢不同细胞增殖与存活中的作用，为进一步研究其作用机制奠定了重要基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘林清 李凤娥 熊远著 邓昌彦
【目的】克隆猪核受体4A1 (Nuclear receptor subfamily 4,group A,member 1,NR4A1) DNA序列全长，并对CDS序列及其表达模式进行分析。【方法】以未成年长大母猪的卵巢为材料，采用电子克隆技术，对猪NR4A1 DNA序列进行分离和测序，并对猪NR4A1基因序列进行生物信息学分析；利用性腺激素（人绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）和孕马血清促性腺激素（Pregnant mare serum gonadotropin，PMSG））处理卵巢颗粒细胞,采用RTPCR方法分析猪NR4A1基因的表达模式。【...
关键词：
猪 NR4A1 序列分析 表达模式
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王兵 范武江 李思发
应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),以"吉丽"罗非鱼[尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,♀)×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron,♂)]为材料,研究NKCC1a基因表达的盐度组织特异性。研究结果表明:(1)NKCC1a基因mRNA表达量存在显著的组织特异性,在低于25盐度环境中,NKCC1a mRNA在鳃、肝、肾及肠中均有表达;当盐度从0提高到48时,表达量在鳃中与盐度变化呈高度正相关(R>0.9,P<0.01),在肠和肾中与盐度变化呈负相关(R≈0.7,P<0.05),但在肝中则不受盐度变化的影响。(2)当盐度提高到64,NKCC1...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高风英 王欢 卢迈新 叶星 黄樟翰 朱华平 杨丽萍
以荷那龙罗非鱼胃组织中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出荷那龙罗非鱼ghrelin前体基因的cDNA全序列。所获得的ghrelin cDNA总长为833 bp,包括97 bp的5′非编码区,412 bp的3′非编码区和324 bp的开放阅读框,编码107个氨基酸残基。核苷酸序列同源性分析显示,荷那龙罗非鱼ghrelin与莫桑比克罗非鱼和尼罗罗非鱼ghrelin序列的相似性达99.0%以上。采用半定量RT-PCR方法检测雌、雄荷那龙罗非鱼胃、肌肉和垂体等多个组织中ghrelin基因的表达,结果显示,荷那龙罗非鱼ghrelin基因有广泛的组织分布,ghrelin基因在雌、雄鱼胃中的表...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
丁广义 郑楚文 张书环 杜浩 许巧情 危起伟
从中华鲟（Acipenser sinensis）转录组数据库中筛选和验证干扰素c（Interferon c，IFNc）基因，对中华鲟IFNc基因序列进行生物信息学分析，利用qPCR研究中华鲟IFNc基因在组织中和免疫刺激条件下的表达模式。结果表明，中华鲟IFNc基因ORF序列长549 bp，编码183个氨基酸，与斑点雀鳝（Lepisosteus oculatus）IFNc1一致性为32.13%；qPCR结果显示，中华鲟IFNc基因在各组织中呈低水平表达，在肌肉、血液、皮肤和体肾中表达量最高；中华鲟IFN-γ重组蛋白和Poly I:C诱导中华鲟肾细胞后，IFNc基因、抗粘液病毒基因（myxovirus resistance，Mx）和Viperin基因在24 h内呈显著上调。克隆鉴定了中华鲟IFNc，探究了其在免疫刺激条件下的表达规律，为中华鲟干扰素功能研究和抗病毒药物开发提供理论基础。
关键词：
中华鲟 IFNc 抗病毒 免疫调控
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾荣荣 路莎莎 江媛 刘增平 俞嘉宁
【目的】克隆棉花蔗糖磷酸合成酶基因(sucrose-phosphate synthase,SPS),并分析该基因在组织和纤维发育不同阶段及不同非生物胁迫下的表达模式。【方法】采用genome-walking及over-lap PCR方法,获得了棉花中一个蔗糖磷酸合成酶基因——GhSPS1,通过半定量PCR法检测GhSPS1在不同非生物胁迫条件下的表达模式,采用实时荧光定量PCR法对GhSPS1及GhSUS3、GhINV、GhCESA4进行组织和纤维发育特异性表达分析。【结果】克隆得到的GhSPS1全长4 545 bp,包含10个内含子、11个外显子,其开放读码框为3 108 bp,编码1 03...
关键词：
蔗糖磷酸合成酶 棉花 逆境胁迫 纤维发育
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李菲 户倩 翟怡雯 陈发棣 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆‘神马’菊花（Chrysanthemum morifolium ‘Jinba’）CmERA1基因，并初步分析其表达模式，为探究其在调控菊花开花中的作用奠定基础。[方法]从夏菊品种‘优香’的转录组数据库中筛选得到菊花中编码法尼基转移酶β亚基基因，并命名为CmERA1。提取野生型‘神马’菊花叶片总RNA，以反转录后的cDNA为模板对该基因cDNA全长进行克隆。运用生物信息学方法对其亲缘关系及其编码蛋白的特性进行分析预测；利用实时荧光定量PCR对其在不同组织及不同光周期下的表达水平进行分析；利用酵母单杂交系统对其转录激活活性进行分析；以绿色荧光蛋白GFP作为标签确定其亚细胞定位情况。[结果] CmERA1基因open reading frame（ORF）全长1356 bp，编码451个氨基酸，分子质量为50.0kD，理论pI为5.12；系统进化分析显示其与青蒿中ERA1亲缘关系最近；蛋白质二级结构分析表明，CmERA1蛋白中α-螺旋和β转角含量较高；启动子元件分析表明，CmERA1基因启动子含有分生组织特征元件、光响应元件、ABA和SA响应元件；荧光定量PCR结果表明，CmERA1在营养生长时期的叶片中表达最高，根中表达最低；在生殖生长时期的根中表达最高，舌状花中表达最低；不同光周期的处理显示，CmERA1的表达能够响应光周期而呈节律性的变化；转录激活活性分析表明，CmERA1蛋白没有转录激活活性；亚细胞定位表明，CmERA1定位于细胞核中。[结论]本文克隆得到菊花CmERA1基因，表达模式分析表明其响应光周期变化。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李菲 户倩 翟怡雯 陈发棣 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆菊花ERA1(ENHANCED RESPONSE TO ABA)基因，并分析其表达模式，为探究其在调控菊花开花中的作用奠定基础。[方法]从夏菊品种‘优香’的转录组数据库中筛选得到菊花中编码法尼基转移酶β亚基基因，并命名为CmERA1。提取野生型菊花‘神马’叶片总RNA,以反转录后的cDNA为模板，对该基因cDNA全长进行克隆。运用生物信息学方法对其亲缘关系及其编码蛋白的特性进行分析预测；利用酵母单杂交系统对其转录激活活性进行分析；以绿色荧光蛋白GFP作为标签确定其亚细胞定位情况；利用实时荧光定量PCR对其在不同组织及不同光周期下的表达水平进行分析。[结果]CmERA1基因开放阅读框(ORF)全长1 356 bp,编码451个氨基酸，相对分子质量为50.0×10~3,理论pI为5.12。系统进化分析显示其与青蒿中ERA1亲缘关系最近。蛋白质二级结构分析表明，CmERA1蛋白中α-螺旋含量最高。转录激活活性分析表明，CmERA1蛋白没有转录激活活性；亚细胞定位表明，CmERA1定位于细胞核中。CmERA1基因启动子分析表明，其含有分生组织表达元件、光响应元件、ABA和SA响应元件。荧光定量PCR结果表明，CmERA1在营养生长时期的叶片中表达最高，根中表达最低；在生殖生长时期的根中表达最高，舌状花中表达最低。CmERA1的表达能够响应光周期而呈节律性的变化。[结论]CmERA1基因的表达模式分析表明其响应光周期变化。
关键词：
菊花 基因克隆 CmERA1 表达模式
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐凤华 宋琪 邢晋祎 孙炜涵
【目的】克隆肉鸡MSMO1(Methylsterol monooxygenase 1)基因序列,并分析其表达模式,为研究MSMO1基因的功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆肉鸡MSMO1基因,采用生物信息学方法分析其蛋白质结构,并用定量PCR技术检测MSMO1基因在组织间的表达差异。【结果】肉鸡MSMO1基因的c DNA序列长度为1404 bp,编码296个氨基酸;MSMO1蛋白145274位氨基酸序列残基存在FA-hydroxylase结构域,为亲水蛋白。进化树分析表明,肉鸡MSMO1氨基酸序
关键词：
肉鸡 MSMO1基因 克隆 表达模式
[期刊] 水产学报
[作者]
范武江 李思发 王兵 孟庆辉
为探讨尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其杂交子代(Oreochromis niloticus ♀× Sarotherodon melanotheron ♂)IGF-Ⅰ基因结构差异,研究IGF-Ⅰ基因与此3种基因型罗非鱼耐盐性能差异之间的关系,通过3′-RACE的方法,从鳃的总RNA分别获得其IGF-Ⅰb基因的部分cDNA序列,长度分别为1076bp、1075bp和1079bp,包含完整的开放阅读框(ORF)546bp、一个终止密码及含polyA信号的3′UTR;ORF编码182个氨基酸,包括信号肽(44aa),成熟肽B区(29aa)、C区(10aa)、A区(21aa)、D区(8aa)及编码70aa的E...
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