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[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ融合蛋白，开展相关ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ蛋白的功能研究，深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的３个含ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ ＯＲＦ的克隆质粒，ＰｃＲ扩增获得Ｓｉｇｌｅｃ－１、Ｓｉｇｌｅｃ－４ｂ和Ｓｉｇｌｅｃ－１４ ｌｉｋｅ的膜外段序列，插入真核表达载体Ｐｃ ＤＮＡ３．１（＋）ｈ ｉｇ ｇ１ Ｆｃ中，双酶切、测序鉴定后转染ｃＯＳ－７细胞。ｑ ＰｃＲ、ＷｅＳｔｅＲＮ－ｂｌＯｔ对目的蛋白的表达进行检测；亲和层析法纯化融合蛋白，ＳＤＳ－ＰＡｇｅ电泳检测纯化效率。ｅｌｉＳＡ检测融合蛋白与ｇｂＳ的结合活性。测序结果显示，成功构建３个融合蛋白．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白...
[期刊] 华北农学报
[作者]
毕研丽 沈小燕 丛国正 刘湘涛 常惠芸 才学鹏
为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经BamHⅠ/HindⅢ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定,阳性质粒进行测序。利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞,免疫组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达。...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨永铨 张海明 陈远生 陈国华
采用多年定向选育的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌鱼做母本,采用由性别二系配套技术繁殖的尼罗罗非鱼超雄鱼做父本,构成XX♀/YY♂尼罗罗非鱼新品种繁育体系,可规模化繁育全雄性尼罗罗非鱼新品种"鹭雄1号"。"鹭雄1号"的突出特点是遗传雄性率高,达到99.00%以上,较其它所有尼罗罗非鱼品系的雄性率高出1倍左右,同时具有生长迅速和出肉率高的优良性状。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王丹 解文杰 朱叶飞 赵金良 陈晓武
为了分析尼罗罗非鱼干扰素调节因子１（ＩＲＦ１）的表达规律及其功能，克隆了尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因ｃ ＤＮＡ全长，与其他脊椎动物ＩＲＦ１基因进行比对，构建ＩＲＦ家族系统进化树。然后使用Ｐｏｌｙ Ｉ∶ｃ对尼罗罗非鱼进行体内注射诱导抗病毒免疫反应，利用荧光定量ＰｃＲ技术检测处理组和对照组中尼罗罗非鱼各组织ＩＲＦ１基因的表达差异。最后构建尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因真核表达载体，对其进行细胞定位。结果表明，尼罗罗非鱼ＩＲＦ１有８８８ ｂＰ的开放读码框，编码２９５个氨基酸的蛋白序列。该蛋白Ｎ端高度保守，并含有６个保守的色氨酸，具有ＤＮＡ结合结构域。对蛋白相似率的计算发现尼罗罗非鱼与斑马鱼ＩＲＦ１相似度为５２．１．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
朱华平 刘玉姣 刘志刚 卢迈新 高风英 可小丽 黄樟翰
以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)耐寒品系为实验材料,克隆了尼罗罗非鱼水通道蛋白基因(AQP1)的c DNA序列,并采用实时荧光定量PCR分析方法探讨了低温胁迫对罗非鱼AQP1基因表达水平的影响。序列分析结果显示,尼罗罗非鱼AQP1 c DNA长度为1 098 bp,包含36 bp的5′端非翻译区序列、783 bp开放阅读框(ORF)和279 bp的3′非翻译区序列,编码261个氨基酸。氨基酸序列比对表明,各物种间AQP1序列的同源性较高(96%~59%)。聚类分析表明,尼罗罗非鱼首先与同属鲈形目丽鱼科的斑马拟丽鱼(Maylandia zebr...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴建开 雍文岳 游文章 文华 廖朝兴
以Cr2 O3为指示物 ,以 70 %基础饲料和 30 %的待测饲料原料组成试验饲料 ,测定尼罗罗非鱼对 13种饲料原料的蛋白质和必需氨基酸的表观消化率。以有效必需氨基酸含量计算了饲料原料中蛋白质的必需氨基酸指数 ,并和鱼体必需氨基酸含量进行比较 ,评价了饲料原料蛋白质对尼罗罗非鱼的营养价值。结果表明 ,氨基酸总量消化率和蛋白质消化率接近 ;秘鲁鱼粉、大豆粕和玉米蛋白质的有效必需氨基酸指数均在70 %以上 ,其营养价值分别是动物蛋白、植物蛋白和能量饲料原料中最高的 ;酵母饲料的营养价值在所有饲料原料中最低 ;血粉和羽毛粉的营养价值较低 (只高于酵母饲料 ) ;其余饲料原料蛋白质营养价值都较高
[期刊] 淡水渔业
[作者]
谢进金 蒋娜红 洪绿萍 蔡炳炎
研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏淀粉酶的基本性质及金属离子对该鱼淀粉酶活性的影响。结果表明:罗非鱼淀粉酶活力的最适pH是6.5,最适底物浓度是2%。研究金属离子对该鱼淀粉酶活力影响,一价金属离子K+、Li+、Na+对酶活力影响较小;二价金属离子Cu2+对酶活力具有抑制作用,Zn2+对酶活力无明显影响;三价金属离子Al3+对酶活力具有抑制作用,但效果不是很强烈,Fe3+对酶活力具有明显的激活作用;碱土金属Mg2+、Ca2+对淀粉酶活性有激活作用,而Ba2+对酶具有抑制作用;重金属离子Cd2+、Pb2+有明显的抑制作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁从飞 赵金良 甘远迪 王飞 Thammaratsuntorn Jeerawat 伍勇 李传阳 罗明坤
为了探讨盐碱胁迫条件下鱼类渗透生理调节机制，以尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）为实验材料，Ｐｃｒ扩增得到了ｎａ～（＋）／３ｈｃＯ～（－）共转运子（ｎＢｃｅ１）基因ｃ Ｄｎａ部分序列，比较了单盐（盐度１０、盐度１５）、单碱（１．５ ｇ／ｌ、３ ｇ／ｌ ｎａ ｈｃＯ３）、盐碱混合（盐度１０，碱度１．５ ｇ／ｌ；盐度１５，碱度３ ｇ／ｌ）胁迫后不同时间（０ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、７２ ｈ、９６ ｈ）血清渗透压、离子浓度（ｎａ～（＋）、Ｋ～（＋）、ｃｌ–、ｃａ２～（＋））以及鳃碳酸酐酶（ｃａ）活性、ｃａ与ｎＢｃｅ１基因ｍ ｒｎａ表达变化。结果显示，不同胁迫条．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
范武江 李思发 王兵 孟庆辉
为探讨尼罗罗非鱼、萨罗罗非鱼及其杂交子代(Oreochromis niloticus ♀× Sarotherodon melanotheron ♂)IGF-Ⅰ基因结构差异,研究IGF-Ⅰ基因与此3种基因型罗非鱼耐盐性能差异之间的关系,通过3′-RACE的方法,从鳃的总RNA分别获得其IGF-Ⅰb基因的部分cDNA序列,长度分别为1076bp、1075bp和1079bp,包含完整的开放阅读框(ORF)546bp、一个终止密码及含polyA信号的3′UTR;ORF编码182个氨基酸,包括信号肽(44aa),成熟肽B区(29aa)、C区(10aa)、A区(21aa)、D区(8aa)及编码70aa的E...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗永巨 曹谨玲 陈剑杰 龚竹林 甘西
采用闭锁群体继代选育的方法(Closed population continuing selection and breeding method)对美国品系尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)进行提纯选育,并利用选育获得的尼罗罗非鱼亲本作为母本,奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)作为父本进行杂交生产子一代(简称"美奥"罗非鱼),再对子一代开展网箱养殖对比实验,以养殖实验的结果来评价选育尼罗罗非鱼的效果。结果表明:(1)实验组美国品系尼罗罗非鱼雌性后备亲本留种率P2世代分别比第P0、P1世代提高了103.16%和35.92%,P1世代比P0世代提高了49.47...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨永铨 张海明 陈远生
采用雌性激素处理刚孵化出膜的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)YY基因型鱼苗,可使性别未分化的合子全部转化为生理雌鱼。该YY型生理雌鱼的卵巢发育正常,具有繁殖机能,可为采用二系配套(YY△♀×YY♂)技术大量生产尼罗超雄鱼提供种源保证。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨永铨 张海明 梁宏伟 邹桂伟
综合系列观察研究,简要描述了尼罗罗非鱼(Orechromis niloticus)超雄鱼的形态构造、生长发育和繁殖功能、染色体组型以及DNA检测等方面的基本特征,说明尼罗超雄鱼的生物学特征与原系尼罗罗非鱼基本相同,一样具有较强的适应环境的能力。
[期刊] 水产学报
[作者]
谢曦 翟笑倩 黎烽 邓建朝 杨贤庆 梁少文 寇红岩 黄垚 刘华清 李文卫 李清清 林蠡
脆肉罗非鱼是近年快速发展起来的特色淡水养殖产品，具有肉质爽脆、富有弹性、久煮不烂等优点，受到消费者的广泛欢迎。本研究主要是通过对脆肉尼罗罗非鱼与普通尼罗罗非鱼肌肉在质构特性、感官评价、基本化学成分、脂肪酸分布和游离氨基酸组成等进行比较研究，从而揭示脆肉尼罗罗非鱼与普通尼罗罗非鱼的肌肉理化与营养特性的差异。结果显示：脆肉尼罗罗非鱼肉的硬度、弹性和咀嚼性与普通尼罗罗非鱼差异显著（p<0.05）；脆肉尼罗罗非鱼肌肉中的粗蛋白和灰分与普通尼罗罗非鱼无明显差异，但水分含量显著降低，总脂含量显著升高（p<0.05）；脂肪酸组成分析显示脆肉罗非鱼肌肉中所含的多不饱和脂肪酸显著高于普通尼罗罗非鱼（p<0.05），其中亚油酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸分别是对比组的2.12、3.36和3.71倍，脆肉尼罗罗非鱼肌肉的游离必需氨基酸总量，显著高于普通尼罗罗非鱼（p<0.05），但鲜味氨基酸甘氨酸略低于普通尼罗罗非。研究表明，脆肉尼罗罗非鱼和普通尼罗罗非鱼肌肉在质构特性、含水量、脂肪酸含量和游离氨基酸分布上都存在有明显的差异。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
梁亚冰 张琪 常嵘 童德文 许信刚
【目的】克隆及真核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)陕西分离株的3a和3b基因,研究表达蛋白在细胞中的分布及其对细胞周期的影响。【方法】利用软件Primer 5.0参照Genbank公布的序列设计两对分别针对TGEV非结构蛋白基因3a和3b的特异性引物。采用RT-PCR方法从TGEV陕西分离株克隆3a和3b基因,再将其与真核表达载体p EGFP-N1连接,构建真核表达质粒p3a-EGFP-N1和p3b-EGFP-N1。利用脂质体转染法将重组质粒转染猪小肠黏膜上皮细胞(intestinal epithelial cells,...
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