为了研究铁调素调节蛋白(hemojuvelin,HJV)在硬骨鱼中抵御病原菌感染和维持自身铁稳态过程中的作用,实验扩增了尼罗罗非鱼铁调素调节蛋白基因(Onhjv)的开放阅读框(ORF),分析其在健康尼罗罗非鱼各组织中的分布模式及在抵御病原菌感染和调节铁稳态中的相关作用。结果显示,Onhjv的ORF全长由1 248个碱基组成,编码415个氨基酸,在不同物种之间具有一定的保守性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Onhjv在尼罗罗非鱼各组织中广泛分布,并在肝脏中的表达量最高。在无乳链球菌或嗜水气单胞菌感染后,Onhjv在肝脏、脾脏、肠和鳃中的表达量均显著上调。体外头肾单核/巨噬细胞和肝细胞中Onhjv表达量在受到这2种病原菌应激下也显著上调。此外,在1和10μmol/L FeCl_3溶液刺激后,Onhjv表达量在肝脏、脾脏、肠和鳃等组织,以及头肾单核/巨噬细胞和肝细胞中的表达量也呈显著上调。受重组罗非鱼IL-6蛋白[(r)OnIL-6]刺激后,头肾单核/巨噬细胞中Onhjv表达量显著上调,表明炎症因子可以促进Onhjv表达。研究表明,尼罗罗非鱼铁调素调节蛋白在宿主抵御病原菌感染和维持铁稳态的过程中发挥作用。本实验为探究HJV在硬骨鱼中的生物学功能提供了参考,同时为进一步研究铁代谢在宿主防御病原菌感染过程中的重要作用提供理论指导。

为了探究鼠李糖凝集素(RBL)在硬骨鱼非特异性细胞防御病原菌感染中的作用，实验以尼罗罗非鱼为研究模型，首先通过分离头肾单核/巨噬细胞进行体外菌应激实验，结果发现，尼罗罗非鱼在2种致病菌即无乳链球菌和嗜水气单胞菌应激后，尼罗罗非鱼L-鼠李糖凝集素1基因(Onrbl-1)的表达量显著上调。然后，通过荧光定量PCR (qRT-PCR)检测发现，OnRBL-1重组蛋白能够调节病原菌诱导细胞炎症因子的表达，包括显著抑制细菌诱导的il-6、il-8和tnf-α的表达，促进il-10和tgf-β的表达。此外，通过流式细胞术检测证实OnRBL-1重组蛋白具有促进单核/巨噬细胞的吞噬作用，同时增强呼吸爆发水平和上调活性氧的释放。以上研究表明，OnRBL-1在尼罗罗非鱼单核/巨噬细胞炎症因子表达、吞噬作用、呼吸爆发和活性氧释放等非特异性细胞免疫防御中发挥调节作用。本研究为探讨RBL-1在硬骨鱼宿主防御病原菌感染中的功能提供了参考，并有助于完善和丰富硬骨鱼类RBL的功能和在抗菌免疫应答中的基础理论体系，具有重要的科学意义。

利用Western-blot技术,对鳗弧菌L-18株的OMPs和IROMPs的免疫反应性进行了分析,并通过免疫牙鲆比较二者免疫保护力的差异,以期从IROMPs方向探索开发鳗弧菌新型鱼用疫苗,并为研究其免疫原理提供重要的科学依据。结果表明,培养基中加入不同浓度的联铁剂,鳗弧菌L-18株的生长和铁载体的表达出现规律性变化,其中加入100~130μmol.L-12,2′-联吡啶为最适合限铁条件,此时铁载体的表达量最高且生长受抑制程度较小。在此条件下,菌株表达出74.3 ku和77.4 ku的IROMPs,其中77.4 ku蛋白具有免疫反应性,为重要抗原。用全菌灭活疫苗、OMPs、IROMPs分别腹腔...

为了提高叶黄素的稳定性和生物利用率，以罗非鱼分离蛋白(TPI)为乳化剂，高压均质制备负载叶黄素(200μg/mL)的TPI乳液，探讨不同pH (3.0、7.0和10.0)条件下，热处理(70℃，30 min)对乳液粒径、乳析指数、叶黄素含量、体外抗氧化活性和体外消化的影响。结果显示，热处理导致TPI乳液的粒径减小，液滴分布均匀，贮藏稳定性增强。pH3.0时，负载叶黄素的TPI乳液稳定性差，叶黄素降解，乳液色泽明显变化。而在pH 7.0和10.0条件下，70℃热处理不会造成叶黄素降解，4℃贮藏28 d无明显分层。经体外模拟胃肠道消化后，游离脂肪酸释放速率加快，pH 7.0时，经过热处理后，乳液的叶黄素生物利用率由18.65%±1.06%提高至35.69%±2.06%。pH 7.0时，乳液游离脂肪酸释放量和生物利用率达94.22%±0.60%和35.69%±2.06%,ATBS自由基清除能力为59.17%±0.66%。研究表明，在中性和碱性条件下结合热处理可以提高TPI乳液负载叶黄素的稳定性和生物利用率，保护叶黄素的抗氧化活性，为负载叶黄素的TPI乳液的开发及应用提供了参考。

叶黄素是一种高效的抗氧化剂，但因稳定性和生物利用率易受环境的影响，其应用受到限制。为了提高叶黄素的稳定性和生物利用率，以罗非鱼分离蛋白（tilapia protein isolate，TPI）为乳化剂，高压均质制备负载叶黄素（200 μg/mL）的TPI乳液，探讨不同酸碱度（pH值为3.0、7.0和10.0）条件下，热处理（70 ℃，30 min）对乳液粒径、乳析指数、叶黄素含量、体外抗氧化活性和体外消化的影响。结果显示，热处理导致TPI乳液的粒径减小（P < 0.05），液滴分布均匀，贮藏稳定性增强。pH 3.0时，负载叶黄素的TPI乳液稳定性差，叶黄素降解，乳液色泽明显变化；而在pH 7.0和10.0条件下，70 ℃热处理不会造成叶黄素降解，4 ℃下贮藏28 d无明显分层，经体外模拟胃肠道消化后，游离脂肪酸释放速率加快，pH 7.0时经过热处理后乳液的叶黄素生物利用率由18.65% ± 1.06%提高至35.69% ± 2.06%（P < 0.05）。pH 7.0时，乳液游离脂肪酸释放量和生物利用率达94.22% ± 0.6%和35.69% ± 2.06%，ATBS自由基清除能力59.17%± 0.66%。研究表明，在中性和碱性条件下结合热处理可以提高TPI乳液负载叶黄素的稳定性和生物利用率，保护叶黄素的抗氧化活性，为负载叶黄素的TPI乳液的开发及应用提供了基础。

叶黄素是一种高效的抗氧化剂，但因稳定性和生物利用率易受环境的影响，其应用受到限制。为了提高叶黄素的稳定性和生物利用率，以罗非鱼分离蛋白（tilapia protein isolate，TPI）为乳化剂，高压均质制备负载叶黄素（200 μg/mL）的TPI乳液，探讨不同酸碱度（pH值为3.0、7.0和10.0）条件下，热处理（70 ℃，30 min）对乳液粒径、乳析指数、叶黄素含量、体外抗氧化活性和体外消化的影响。结果显示，热处理导致TPI乳液的粒径减小（P < 0.05），液滴分布均匀，贮藏稳定性增强。pH 3.0时，负载叶黄素的TPI乳液稳定性差，叶黄素降解，乳液色泽明显变化；而在pH 7.0和10.0条件下，70 ℃热处理不会造成叶黄素降解，4 ℃下贮藏28 d无明显分层，经体外模拟胃肠道消化后，游离脂肪酸释放速率加快，pH 7.0时经过热处理后乳液的叶黄素生物利用率由18.65% ± 1.06%提高至35.69% ± 2.06%（P < 0.05）。pH 7.0时，乳液游离脂肪酸释放量和生物利用率达94.22% ± 0.6%和35.69% ± 2.06%，ATBS自由基清除能力59.17%± 0.66%。研究表明，在中性和碱性条件下结合热处理可以提高TPI乳液负载叶黄素的稳定性和生物利用率，保护叶黄素的抗氧化活性，为负载叶黄素的TPI乳液的开发及应用提供了基础。

【背景】PA蛋白是流感病毒RNA聚合酶复合体的重要组成部分,在流感病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要作用。前期利用酵母双杂交技术(Y2H)筛选与流感病毒PA蛋白相互作用的宿主蛋白,获得多聚胞嘧啶结合蛋白1(poly(r C)-binding protein 1,PCBP1)。【目的】探索PCBP1蛋白与流感病毒PA蛋白的互作关系及其对流感病毒复制的影响,为深入理解流感病毒在宿主体内的复制调控机制提供数据。【方法】将诱饵质粒pGBKT7-PA与筛选到的重组质粒p GADT7-PCBP1以及阴性对照组和阳性对照组按照醋酸锂法分别共转化酵母感受态细胞,并涂布在3种营养缺陷型培养基上,30℃倒置培养5—7 d,观察酵母菌落生长情况和菌落颜色,回交验证PA蛋白与PCBP1蛋白在酵母系统中的相互作用。参照GenBank中录入的PA蛋白和人源PCBP1蛋白的序列,分别设计特异性扩增引物,构建真核重组表达质粒pCAGGS-Flag-PA和pCAGGS-Myc-PCBP1,将这两种真核表达质粒分别单独转染或共同转染HEK293T细胞,于转染48 h后裂解细胞,收获上清,留取少部分作对照,余下的样品逐步加入FLAG单抗和Protein G琼脂糖珠子进行免疫共沉淀(Co-IP),经SDS-PAGE和Western blot检测PA蛋白与PCBP1蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用。利用慢病毒包装系统pLVX-IRES-Zs Green1在HEK293T细胞中包装假病毒,将假病毒侵染A549细胞后经超速流式分选构建PCBP1蛋白过表达细胞系,Western blot检测PCBP1过表达情况,然后用流感病毒WSN以0.01 MOI感染该过表达细胞系,于感染后24和48 h收获上清,对上清中的流感病毒进行蚀斑计数。合成PCBP1蛋白的si RNA,转染A549细胞下调PCBP1蛋白的表达,干扰后48 h通过Western blot检测PCBP1蛋白表达下调情况,并以MOI=0.01感染流感病毒WSN,收获感染后24和48 h的上清,进行蚀斑滴定计数。【结果】通过酵母回交验证发现诱饵质粒pGBKT7-PA与重组阳性质粒p GADT7-PCBP1的共转酵母菌落可以在SD/-2、SD/-4、SD/-4/X/A等3种营养缺陷型平板上正常生长,并且能分解底物X-α-Gal,使菌落呈现蓝色,与阳性对照组一致,表明PA蛋白与PCBP1蛋白在酵母系统中存在相互作用。免疫共沉淀试验发现PA蛋白可以将PCBP1蛋白沉淀下来,说明PA蛋白与PCBP1蛋白在哺乳动物细胞中存在相互作用。在PCBP1过表达细胞系中,PCBP1蛋白表达水平显著提高,流感病毒的复制滴度下降;而通过si RNA干扰后,PCBP1表达水平显著下降,流感病毒的复制滴度升高,表明PCBP1对流感病毒复制具有负调控作用。【结论】通过研究发现流感病毒PA蛋白与宿主蛋白PCBP1在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在相互作用,且宿主蛋白PCBP1对流感病毒的复制具有负调控作用。

【目的】研究外源２４－表油菜素内酯（２４－ｅｐｉｂｒａｓｓｉｎｏｌｉｄｅ，ｅｂｒ）处理对霜霉菌侵染葡萄叶片的影响，为探究葡萄霜霉病的致病机理提供参考。【方法】试验以欧亚种酿酒葡萄（Ｖｉｔｉｓ Ｖｉｎｉｆｅｒａ．ｌ）赤霞珠（Ｃａｂｅｒｎｅｔ ｓａｕＶｉｇｎｏｎ）叶片为材料，在霜霉菌侵染离体葡萄叶片的初期，研究不同浓度的ｅｂｒ处理（０．１、０．５和１．０ ｍｇ·ｌ～（－１） ｅｂｒ）对葡萄叶片霜霉病发病率和病情指数、霜霉菌菌丝生长、孢囊梗的形成、气孔周围孢子数量、葡萄叶片气孔开度和内源激素含量的影响及相互关系。【结果】ｅｂｒ各处理均显著抑制了接种霜霉菌０．５ ｈ后葡萄叶片气孔开度，以及接种后１ ｄ．．．

农杆菌是一种革兰氏阴性土壤病原细菌,携带具有天然转基因功能的Ti质粒或Ri质粒,能将一部分遗传物质插入到寄主植物的染色体上,使其稳定遗传和表达,赋予植物新的性状。所以农杆菌作为最有效的转化媒介,已被广泛应用于多数双子叶植物和部分单子叶植物转基因研究。虽然农杆菌介导的转化技术具有操作简单、成本低廉,转基因沉默几率小,插入基因拷贝数少等优点,但农杆菌介导植物遗传转化是一个复杂的生物学过程,需要一系列农杆菌蛋白和植物蛋白相互作用,共同完成外源基因的转入和整合。植物相关蛋白在转化过程中起着重要作用。其中,阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGP)、植物根钙粘附蛋白和类玻连蛋白等参与农杆菌附着于植物细胞表面的过程;鸟...

研究了光学显微镜下菊花白锈病病原菌侵染菊花的过程。结果表明:病原菌冬孢子萌发后产生先菌丝,先菌丝上发育成2～4个担孢子。担孢子圆肾形,飞落到菊花叶表皮后萌发成菌丝,造成新的侵染点,菌丝成熟后发育成新的冬孢子,完成1个侵染循环。未见夏孢子。

【目的】本试验以小鼠为动物模型,比较了兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白(IROMPs)的免疫原性及分析交叉免疫保护效果。【方法】分别以正常培养基和限铁培养基增殖兔多杀性巴氏杆菌C51-12和C51-3,采用Sarcosyl沉淀—超离法提取IROMPs和OMPs,并用SDS-PAGE比较两株之间的差异,同时用正常培养基增殖该菌制备灭活全菌抗原。免疫原性分析,将清洁级小鼠20只随机分成4组,5只/组,以C51-12株的全菌、IROMPs和OMPs作抗原分别免疫,采用间接ELISA检测免疫小鼠的相应抗体动态变化;免疫保护试验,分别采集经4次免疫后小鼠的抗血清,作1﹕10稀释腹腔注射小鼠,每组6只,18...

分析接种小麦白粉菌E09后Pm21近等基因系及其亲本叶片的总蛋白质差异,从蛋白质组调控角度揭示Pm21基因抗白粉病的抗病机理。以Pm21近等基因系及其亲本百农3217为试材,显微观察接种后5 d内的叶片表面细胞与白粉菌孢子表型差异;采用非离子去污剂提取总蛋白质,运用双向电泳、质谱分析与数据库检索技术,比较Pm21近等基因系及其亲本接菌第4天后的叶片总蛋白质差异。超显微和显微观察结果表明,12 h后百农3217叶细胞表面与Pm21近等基因系相比褶皱明显;在接菌第2天后,在Pm21近等基因系白粉菌孢子生长明显慢于其亲本表面孢子,且孢子侵入个数较少,不萌发现象较多;在第4天后Pm21近等基因系被侵染...

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn...

鱼类诺卡氏菌病是一种慢性系统性肉芽肿疾病,鱼诺卡氏菌是其主要病原。鱼诺卡氏菌全基因组生物信息学分析,发现了一个可能靶向定位于宿主细胞线粒体的分泌蛋白——动力蛋白调节蛋白robl/LC7。为了对鱼诺卡氏菌robl/LC7的亚细胞定位和功能进行初步研究,实验对鱼诺卡氏菌robl/LC7进行了基因克隆、真核表达重组质粒构建、分泌蛋白鉴定、亚细胞定位、过表达和凋亡检测。结果显示,成功克隆了鱼诺卡氏菌robl/LC7基因并构建了其真核表达质粒p EGFP-robl/LC7和pc DNA-robl/LC7;

[目的]本文旨在分析旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2（GLIPR1L2）对宿主免疫功能的影响。[方法]用反转录PCR（RT-PCR）方法克隆旋毛虫GLIPR1L2基因，构建表达载体，获得重组蛋白（rGLIPR1L2），用Western blot分析rGLIPR1L2的反应原性。将大鼠外周血单个核细胞（PBMC）与rGLIPR1L2共孵育，用免疫荧光技术观察rGLIPR1L2与大鼠PBMC的结合，分析rGLIPR1L2对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。大鼠腹腔注射rGLIPR1L2后，测定血清中IL-4、IL-9、IL-17、TGF-β、IFN-γ等细胞因子的变化。背部皮下多点注射对小鼠进行免疫后，ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体的变化，收集旋毛虫成虫和肌肉幼虫并计数，分析rGLIPR1L2的免疫保护作用。[结果]体外试验表明，rGLIPR1L2能够促进大鼠PBMC的增殖与迁移，增强细胞NO分泌和吞噬功能，一定浓度下可提高细胞凋亡比例。体内试验显示rGLIPR1L2能促进大鼠IL-4分泌，但对细胞因子IFN-γ、IL-9、IL-17和TGF-β的分泌无显著影响。rGLIPR1L2免疫小鼠可引起其体内特异性IgG抗体显著升高，且可显著降低受感染小鼠的肌肉幼虫数量。[结论]旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2能通过多种途径影响宿主免疫功能。