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[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗明坤 赵金良 Thammaratsuntorn Jeerawat 李传阳 魏继海 赵永华
通过组织切片、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)卵巢发育过程中性类固醇激素(雌二醇E2、孕酮P)、卵黄蛋白原(Vtg)含量及Vtg mRNA相对表达水平变化规律。结果表明,尼罗罗非鱼性腺指数(GSI)与卵巢成熟发育间呈同步性变化,Ⅴ期达到峰值。血清中E2含量自卵巢Ⅱ期开始显著升高,Ⅳ期达到峰值,Ⅴ期后显著下降;血清P含量自卵巢Ⅱ期开始不断升高,Ⅴ期达到峰值,Ⅵ期显著下降;E2、P分别在卵巢成熟发育前期与后期发挥作用。肝中Vtg含量先升、后降,Ⅳ期达峰值;血清、卵巢中Vtg含量均自Ⅱ期开始增加,Ⅴ期达峰值,Ⅵ期显著降低;不同组织中V...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
袁新程 施永海 徐嘉波 于爱清 邓平平 张之文 蒋飞
为探明美洲鲥(Alosa sapidissima)雌鱼发育后期卵巢内营养物质的变化规律，提高卵子受精率，采用生化分析、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法，对性腺发育期Ⅳ期和Ⅴ期的卵巢内氨基酸、脂肪酸、卵黄蛋白原（VTG）和组织蛋白酶D（CTSD）含量及其mRNA表达量进行对比分析。结果显示，Ⅳ期卵巢中水分含量(75.73%)显著低于Ⅴ期(90.64%)(P<0.05)，而粗蛋白含量(16.07%)、粗脂肪含量(2.86%)和粗灰分含量(1.28%)均显著高于Ⅴ期 (5.83%、1.25%、0.81%)(P<0.05)。在Ⅳ、Ⅴ期卵巢内各检测出18种氨基酸，其中谷氨酸含量最高(8.64%和8.13%)；8种必需氨基酸中，Ⅳ期苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和色氨酸含量均显著高于Ⅴ期 (P＜0.05)，且二者第一限制氨基酸均为色氨酸；Ⅳ期氨基酸总量(TAA)、半必需氨基酸(HEAA)和非必需氨基酸总量(NEAA)均显著高于Ⅴ期(P＜0.05)。两期卵巢内共检测出19种脂肪酸，Ⅳ期C17:0、C20:1n9、C20:4n6和C20:5n3含量显著高于Ⅴ期(P＜0.05)；其中∑MUFA、∑PUFA、∑UFA、∑n3PUFA和EPA+DHA含量均大于Ⅴ期，∑UFA (70.54%)达到显著性差异(P＜0.05)。Ⅳ期卵巢中VTG含量高于Ⅴ期，但不显著(P＞0.05)；而Ⅳ期卵巢中CTSD含量明显比Ⅴ期低 (P＜0.05)。Ⅴ期卵巢VTG 基因表达量是Ⅳ期的13.88倍(P＜0.05) ；而Ⅴ期肝脏内VTG 基因表达明显低于Ⅳ期(P＜0.05)，是Ⅳ期的25%。从Ⅳ期至Ⅴ期，卵巢中CTSD mRNA表达出现下调，肝脏中CTSD mRNA表达出现上调，但均不明显。因此，当前养殖条件下，美洲鲥雌鱼亲本后期发育过程中，卵巢内营养物质积累不均衡，建议适当调整饲料配方，提高限制性氨基酸色氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸及含量较低的赖氨酸、苏氨酸比例和调高多不饱和脂肪酸C20:3n6、C20:4n6(AA)、C22:6n3(DHA)和C20:5n3(EPA)比例，降低C18:2n6c的比例，保证卵巢后期发育所需营养的均衡。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
吴维福 李郁娇 黎东 陈娈娈 朱春华
将罗氏沼虾成虾浸浴于含三丁基锡(Tributyltin,TBT)(0.1、0.2、0.4mg/L)的水体中,研究TBT对其肝胰脏和性腺中卵黄蛋白原(VTG)表达和性腺发育的影响。结果表明,罗氏沼虾在TBT中浸浴10d,TBT能够诱导雌虾的肝胰腺VTG基因表达,而对卵巢VTG基因的表达则表现为抑制作用;TBT对雄虾的肝胰腺VTG基因表达有抑制作用,而对精巢VTG基因的表达无明显影响。性腺组织切片显示,TBT浸浴能够促进罗氏沼虾精巢的发育,且随浸浴剂量的增加对精巢发育的促进作用逐步增强,但TBT对罗氏沼虾卵巢发育无明显影响。
关键词：
罗氏沼虾 三丁基锡 卵黄蛋白原 性腺
[期刊] 水产学报
[作者]
李媛媛 蔡生力 刘红
卵黄磷蛋白作为卵黄蛋白的主要成分,可为甲壳动物胚胎和早期幼体发育提供能量,为研究其来源及合成规律,实验应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测了凡纳滨对虾和罗氏沼虾性腺不同发育时期卵巢和肝胰腺两种组织中卵黄蛋白原mRNA的表达水平。结果发现,凡纳滨对虾和罗氏沼虾的卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达。随着卵巢的发育,凡纳滨对虾卵巢中卵黄蛋白原mRNA的相对表达量在前5个阶段不断增加,分别为1.1,5.9,10.4,26.9,85.0,恢复期急剧减少,为1.6。肝胰腺中的相对表达量也不断增加,分别为1.3,3.3,7.1,37.3,51.6,恢复期急剧减少,为1.0。罗氏沼虾肝胰腺中...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
程翔 蔡生力 刘红 李媛媛
中国明对虾卵黄蛋白原mRNA基因在卵巢和肝胰腺中都有表达。采用实时荧光定量PCR方法测定在卵巢不同发育时期卵巢和肝胰腺这两种组织的卵黄蛋白原mRNA的表达水平,提取组织总RNA,设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增,对卵巢发育的各个阶段,卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期的卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析。结果表明:在卵巢中,卵黄蛋白原mRNA在前3个阶段随着卵巢的发育,表达量不断增加,分别为0.04、0.23和1.03,次级卵黄发生期开始减少到0.16,消退期卵黄蛋白原mRNA表达量又增加到1.00。而在肝胰腺,前4个阶段随着卵巢发育,表达量逐步增加,...
[期刊] 水产学报
[作者]
丁立云 付辉云 侯迎梅 霍雅雯 孙蓬 金敏 周歧存
为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹,进行了为期12周的饲养实验。结果显示,无论三疣梭子蟹是否交配,饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数,提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度,增大卵母细胞直径;同时上调肝胰腺卵黄蛋白原m RNA相对表达
[期刊] 水产学报
[作者]
丁立云 付辉云 侯迎梅 霍雅雯 孙蓬 金敏 周歧存
为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹,进行了为期12周的饲养实验。结果显示,无论三疣梭子蟹是否交配,饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数,提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度,增大卵母细胞直径;同时上调肝胰腺卵黄蛋白原m RNA相对表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐永江 柳学周 王清印 赵明 王妍妍 曲建忠
系统研究了人工养殖条件下圆斑星鲽(Verasper variegatus)亲鱼血浆性类固醇激素的年周期变化规律及其与卵巢发育成熟及温光调控的关系。结果表明,圆斑星鲽卵巢发育属非同步分批发育模式,一年一次成熟分批产卵类型。卵巢年周期发育过程中可见5个发育时相的卵母细胞,卵巢发育可化分为4个成熟阶段,6个发育时期。性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)在亲鱼的年周期发育中呈现规律性的变化。亲鱼血浆中雌二醇(E2)在产卵期达峰值;排卵结束后,E2表达水平降至较低水平。血浆中睾酮(T)含量在10月达峰值,并在产卵期间保持相对较高表达水平。统计分析表明,血浆E2水平与GSI和HSI值的变...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘春 李凯彬 王芳 王庆 聂湘平 王英英 吴淑勤
利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法,克隆获得剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)基因的全长cDNA序列。剑尾鱼Vg C基因cDNA序列全长4 011 bp,其5'非编码区包含12 bp和3'非编码区包含246 bp;含有一个3 753 bp的开放阅读框(ORF),编码1 250个氨基酸,推测其编码氨基酸分子量大小为141.7 ku,编码氨基酸序列与其他鱼类卵黄白原C编码氨基酸序列相似性在44%～85%。荧光定量PCR结果显示,Vg C在剑尾鱼肝脏中表达量最高,脾、肾、卵巢中有微量表达,脑、肌肉、鳃中几乎没有检测到表达;对不同时间暴露在雌激素中剑尾鱼肝脏进...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王海滨 李美玲 夏国良 吕忠显 郭勇 谢辉蓉
表皮生长因子 (EGF)是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子。关于 EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发生的作用至今未见报道。本研究以单个卵巢的总卵泡数、生长卵泡数和 5个最大卵母细胞的平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标 ,利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了 EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现 :1EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵泡数和卵巢内 5个最大卵母细胞平均直径从培养第 7天起即显著高于 ITS对照组直至培养结束 ;2 EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮 ,但对雌二醇的基础分泌无影响 ;3EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘红 崔俊 颜婕 蔡生力
从成熟的克氏原螯虾卵巢中提取总RNA,通过同源克隆得到了卵黄蛋白原受体c DNA部分序列,长度为506 bp,在NCBI网站上进行比对后发现,其与斑节对虾、短沟对虾、罗氏沼虾的卵黄蛋白原受体(Vg R)c DNA序列有较高的相似性。采用实时荧光定量PCR方法,测定了卵巢不同发育时期卵巢和肝胰腺两个组织中卵黄蛋白原受体m RNA的相对表达水平。结果显示,卵巢是卵黄蛋白原受体基因表达的主要部位,而肝胰腺只能检测到少量表达,卵黄蛋白原受体基因在卵巢的卵原细胞增殖期相对表达量最高,随后下降,成熟期达到最低值,恢复期开始回升。结合卵巢不同发育阶段卵巢质量的变化计算表达总量,结果发现,卵黄蛋白原受体基因的...
关键词：
卵黄蛋白原受体 克氏原螯虾 克隆 表达量
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李建寅 李凯彬 刘春 常藕琴 吴淑勤
为研究卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)在剑尾鱼(Xiphophorus helleri)不同组织器官的表达情况,以及了解雌激素对不同组织中Vg表达的诱导作用,将成年雌、雄剑尾鱼及幼鱼暴露于50μg/L的17β-雌二醇(E2)溶液中20d,未暴露的剑尾鱼作对照,采用免疫组化法对各处理组剑尾鱼进行Vg的组织定位研究。结果表明,剑尾鱼Vg主要分布于成熟雌鱼的肝脏、脾脏和肠的血管、淋巴管,在正常幼鱼及雄鱼的以上各组织中均不表达。17β-雌二醇暴露下,剑尾鱼雌、雄成鱼和幼鱼的肝脏以及肾、脾、肠等组织的血管及淋巴管均呈Vg阳性。但Vg颗粒只在肝实质细胞中观察到,在其他组织中如脾脏、肠固有结缔组...
关键词：
剑尾鱼 卵黄蛋白原 免疫组织化学 雌激素
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘春 李凯彬 王芳 聂湘平 吴淑勤
本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法。根据已发表的底(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%。在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白。表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后...
关键词：
剑尾鱼 卵黄蛋白原 原核表达 检测
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
生安志 鞠辉明 李贵阳 李杰 莫照兰
利用ｑＰＣＲ方法，检测ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０βｍ ＲＮＡ在不同月龄牙鲆（ＰＡＲＡｌｉＣＨｔＨｙｓ ｏｌｉｖＡＣｅｕｓ）不同组织的表达水平，进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示，ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０β在不同发育期的１３种组织（肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、背皮、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液）中均有表达。ＨｓＰ９０β表达水平整体高于ＨｓＰ９０α；８月龄牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的ＨｓＰ９０α表达量要显著高于其他发育期（１月龄、１２月龄、２４月龄）同组织的表达量（Ｐ＜０．０５），而ＨｓＰ９０β在不同月龄牙鲆的表达量也存在差异，在肝和肠的表达量较高，在鳃、背肌和腹鳍的．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
姚苗 韦智梅 BIZOZA 周针宇 李虹 王波 熊银林 刁晓明 翟旭亮
为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性，本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列，其cDNA长分别为5 055、5 537、5 306 bp,分别编码了1 684、1 760、1 725个氨基酸。三种亚型Vtg蛋白均由脂蛋白N-末端(Vitellogenin＿N)、1943DUF、1944DUF、PV、D型血管血友病因子(VWD)5个保守结构域构成，为完整型Vtg。同源性分析发现皆与龟鳖目具有更近的亲缘关系，同时在3种亚型中VtgAB2与VtgAB3更相似。荧光定量PCR显示，3种亚型Vtg只在雌性肝脏中强烈表达。在60日龄、2龄、4龄雌性个体肝脏中，Vtg表达量随年龄呈上升趋势，VtgAB1、VtgAB2为主要表达亚型。原位杂交结果显示，3种亚型Vtg在卵原细胞内未发现杂交信号；在生长期卵母细胞胞质和滤泡细胞中发现杂交信号；成熟期卵母细胞胞质中未发现杂交信号，在滤泡细胞和周围的网状组织中发现杂交信号。信号在初级卵母细胞的细胞质中分布较为均匀且表达最强，随着卵母细胞的发育信号聚集在核周区且信号逐渐减弱。以雄性中华鳖为对象，注射雌激素E2,3种亚型Vtg表达量表现出明显的时间和剂量相关性。研究结果表明，在中华鳖卵黄积累过程中Vtg发挥重要作用，首次证实其Vtg存在内源性合成，并发现其可以作为雌激素暴露的生物标志物。
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