- 年份
- 2024(3816)
- 2023(5626)
- 2022(4886)
- 2021(4662)
- 2020(4054)
- 2019(9192)
- 2018(9164)
- 2017(18116)
- 2016(10363)
- 2015(11976)
- 2014(11925)
- 2013(11886)
- 2012(11718)
- 2011(10589)
- 2010(10801)
- 2009(10099)
- 2008(10386)
- 2007(9506)
- 2006(8245)
- 2005(7266)
- 学科
- 济(46670)
- 经济(46598)
- 管理(27385)
- 业(26789)
- 方法(26760)
- 数学(24262)
- 数学方法(24018)
- 企(21683)
- 企业(21683)
- 学(11668)
- 财(11632)
- 农(10888)
- 中国(10774)
- 贸(8315)
- 贸易(8311)
- 易(8059)
- 制(7881)
- 业经(7768)
- 融(7732)
- 金融(7730)
- 务(7268)
- 财务(7253)
- 财务管理(7232)
- 农业(7184)
- 银(7012)
- 企业财务(6974)
- 银行(6974)
- 地方(6898)
- 理论(6665)
- 行(6633)
- 机构
- 大学(161700)
- 学院(156560)
- 济(61723)
- 经济(60538)
- 研究(55241)
- 管理(54646)
- 理学(47748)
- 理学院(47109)
- 管理学(46036)
- 管理学院(45769)
- 中国(41151)
- 科学(36739)
- 京(33840)
- 农(33820)
- 财(29989)
- 所(29759)
- 农业(27356)
- 研究所(27307)
- 业大(26623)
- 中心(25222)
- 财经(24504)
- 江(24156)
- 经(22440)
- 范(21102)
- 师范(20758)
- 北京(20697)
- 经济学(20653)
- 院(19292)
- 经济学院(18821)
- 财经大学(18465)
- 基金
- 项目(104858)
- 科学(82233)
- 基金(78654)
- 研究(70229)
- 家(70121)
- 国家(69577)
- 科学基金(58615)
- 社会(44610)
- 社会科(42275)
- 社会科学(42264)
- 基金项目(40961)
- 自然(40038)
- 省(39817)
- 自然科(39213)
- 自然科学(39200)
- 自然科学基金(38526)
- 划(34735)
- 教育(34053)
- 资助(33953)
- 编号(26139)
- 部(24239)
- 重点(23966)
- 成果(23177)
- 发(21173)
- 创(21138)
- 科研(20957)
- 计划(20809)
- 教育部(20650)
- 大学(20186)
- 创新(19908)
共检索到229890条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邹芝英 王茂元 李大宇 杨弘
采用高保真PCR方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)基因组DNA中分离出β-actin基因启动子序列,将β-actin基因启动子插入pN1-EGFP构建成真核细胞表达载体pEGFP-β-actin,并通过脂质体转染法将重组载体导入人胚肾上皮细胞HEK 293T,荧光显微镜下观察外源基因EGFP在细胞中的表达情况。结果显示:β-actin基因启动子调控区具有典型的启动子特征,含有TATA Box、CArG和CCAAT Box 3个重要的顺式作用元件。荧光显微镜下观察到50%～60%的HEK 293T细胞中发出绿色荧光,显示尼罗罗非鱼β-actin基因启动子能够驱动EGF...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李超 陈明 黄维义 王瑞 余晓丽 黄婷 雷爱莹 梁万文
应用Trizol一步法对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)外周血白细胞总RNA提取方法进行优化,通过β-ac-tin基因反转录对所分离到的总RNA进行质量验证,并对mRNA的冻干浓缩进行了探讨,确定了一套快速、高效的尼罗罗非鱼外周血白细胞总RNA分离和mRNA浓缩体系。结果显示:获得的总RNA纯度较高,OD260/OD280均在1.9~2.0之间;甲醛变性电泳显示,总RNA完整性良好,28S与18S比值为2∶1;总RNA的分离量与起始白细胞量成正比,每毫升Trizol最大裂解量为1×108个白细胞,可得到总RNA量约为90μg;总RNA的分离量在前四个小时随着沉淀时间的增...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李相赫 徐琪 俞钦明 童一宇 先友成进 陈国宏
采用PCR技术从大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)基因组中克隆了β-actin基因近端启动子片段DPRK1,并将该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP-N1中,构建了重组荧光表达载体pDPRK1-EGFP。将该载体分别转染真核细胞293T、CEL及DF1,检测绿色荧光表达情况。重组载体经NdeⅠ酶切线性化后,显微注射到斑马鱼(Danio rerio)的受精卵中。序列分析显示该片段的长度为1 282 bp,含167 bp的5'侧翼序列近端启动子区和共1 115 bp的第1个外显子以及第1个内含子区。5'侧翼序列近端启动子含有CAAT...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
扶晓琴 丁祝进 饶友亮 王卫民 刘红
为了解鱼类白细胞介素６（ＩＬ－６）基因的转录调控原理及其免疫作用机制，构建５个团头鲂ＩＬ－６基因启动子的荧光素酶报告质粒（ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ），以ＰＧＬ３－ｂａｓＩｃ质粒作为阴性对照，将它们分别与内参质粒ＰＲＬ－ＴＫ共转染进鲤ＥＰｃ细胞，并用１００ｎＧ／ｍＬ的ＬＰｓ诱导转染过重组载体的细胞，２４ｈ后检测荧光素酶的活性。结果显示：与阴性对照组相比，质粒转染组ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－０、ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－１、ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－２、ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－３与ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－４的荧光素酶活性均明显升高，其中ＰＧＬ３－ＩＬ－６Ｐ－４组的荧光素酶活性最高，表明该启动子缺失体（－３７９至＋３４．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐琪 陈阳 黄正洋 张扬 陈昌义 赵荣雪 李秀 段修军 陈国宏
【目的】对鸭CD8α基因启动子活性区域进行分析,为鸭CD8α基因功能和表达调控机理研究提供依据。【方法】利用前期基因组步移技术获得的鸭CD8α基因的启动子区序列,制备一系列启动子缺失突变体(-625/-1 bp,-1 110/-1 bp,-1 413/-1 bp,-2 151/-1 bp),定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建荧光素酶报告基因重组载体,采用Lipofectamine 2000将重组质粒瞬时转染DT40细胞,分析CD8α基因启动子系列缺失突变体在细胞内的转录活性。【结果】鸭CD8α基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,-1110—-625启动子活性最强,且...
关键词：
鸭 CD8α基因 启动子 转录活性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王海英 叶星 白俊杰 夏仕玲 劳海华 简清 王琳
利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthy salbonubes)β-actin基因。所克隆的β-actin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAATBox、TATABox、CArGBox等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较...
[期刊] 林业科学
[作者]
杨桂燕 郭宇聪 张凤娇 赵震 高彩球
［目的］ＶＨＡｃ基因（Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ ｃ亚基）是Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ的重要亚基，能响应盐、重金属等胁迫，过表达刚毛柽柳ＴＨＶＨＡｃ１基因的酵母能提高抗ｃｄｃｌ＿２耐ＮＡｃｌ能力。本研究拟通过分离ＴＨＶＨＡｃ１基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析，以进一步探讨ＴＨＶＨＡｃ１基因响应ｃｄｃｌ＿２和ＮＡｃｌ胁迫的机制。［方法］根据ＴＨＶＨＡｃ１基因启动子中含有的ｄｏｆ顺式作用元件的分布，将ＴＨＶＨＡｃ１基因上游启动子分为２０５ ｂＰ（－１—－２０５），５０４ ｂＰ（－１—－５０４）和７８１ ｂＰ（－１—－７８１）３个不同长度片段。将这些不同长度启动子片段分别替换Ｐ ｃＡＭｂＩＡ１３０１载体上．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姜美华 巨婷婷 刘洋 许玲 孙文娟 赵泮峰 尹靖东
【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系。【方法】分别用2%马血清和三联诱导剂诱导C2C12细胞成肌和成脂分化,在马血清促进的成肌分化第0、1、3和5天收集细胞进行姬姆萨染色观察肌管形成情况;在三联诱导的成脂分化第0、2、4、6和10天收集细胞进行油红O染色观察脂滴形成情况;提取成肌诱导第0、1、3、5天和成脂诱...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨玉艾 孙永科 华进联 窦忠英
为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
彭建令 董宏平 包志龙 董汉松 王金生
从烟草中克隆了受病原物诱导的植物启动子 (pathogen inducibleplantpromoters,PPPs)PPP1、PPP2、PPP3,其长度分别为 130 8,1170 ,2 2 0bp ,序列分析表明它们均含有受细菌诱导的反应元件 (Bac)。资料检索表明 ,PPP3可能是从植物分离的、受细菌诱导的最短的启动子。构建了包括每个PPP启动子和报道基因uidA (编码 β 葡萄糖醛酸酶 ,GUS)的转化单元 ,用它们以及包括来自椰菜花叶病毒 35S启动子和uidA单元 ,在相同条件下分别转化烟草 ,获得了分别含PPP和 35S启动子的 4类转基因烟草品系 ;分子检测表明 ,转化单元...
关键词：
病原物诱导性启动子 反应元件 转基因烟草
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王洪梅 张利博 侯明海 王长法 王玲玲 孙涛 何洪彬 仲跻峰
【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5′侧翼区长片段及固定3′端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定。【结果】牛Nramp1基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58—-89区域具有基本的启动子功能,+58—-...
[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ融合蛋白，开展相关ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ蛋白的功能研究，深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的３个含ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ ＯＲＦ的克隆质粒，ＰｃＲ扩增获得Ｓｉｇｌｅｃ－１、Ｓｉｇｌｅｃ－４ｂ和Ｓｉｇｌｅｃ－１４ ｌｉｋｅ的膜外段序列，插入真核表达载体Ｐｃ ＤＮＡ３．１（＋）ｈ ｉｇ ｇ１ Ｆｃ中，双酶切、测序鉴定后转染ｃＯＳ－７细胞。ｑ ＰｃＲ、ＷｅＳｔｅＲＮ－ｂｌＯｔ对目的蛋白的表达进行检测；亲和层析法纯化融合蛋白，ＳＤＳ－ＰＡｇｅ电泳检测纯化效率。ｅｌｉＳＡ检测融合蛋白与ｇｂＳ的结合活性。测序结果显示，成功构建３个融合蛋白．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁明山 陶震
利用启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２首次从诸葛菜总ＤＮＡ中克隆了７个具有启动功能的ＤＮＡ片段。转化Ｅ．ｃｏｌｉ表明最高卡那霉素（ｋｎａ）抗性为１４０μｇ／ｍｌ，最低为２０μｇ／ｍｌ。含启动子片段的７个重组质粒分别命名为ｐＳＵＰＺ１－７。Ｓｏｕｔｈｒｅｎ印迹表明ｐＳＵＰＺ６对Ｋｎａ的抗性功能来源于诸葛菜的１０ｋｂ、５ｋｂ和３．９ｋｂ片段。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李君 闫志浩 贾万里 许蒙蒙 张景锋 徐秋良 韩浩园 权凯
脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪水解过程中的主要限速酶，是调控细胞中甘油三酯和脂肪酸之间平衡的关键因子。为了分析奶山羊ATGL基因启动子的结构及转录调控机制，以奶山羊全血DNA为模板，通过PCR技术扩增出ATGL基因5′侧翼序列并进行生物信息学分析；构建了5个不同长度的启动子缺失片段报告基因载体，通过转染奶山羊乳腺上皮细胞并检测其活性，确定其核心区域；分别用PPARG激动剂罗格列酮和SREBP1激动剂T0901317处理细胞，检测其对ATGL启动子活性的影响。结果表明，克隆得到奶山羊ATGL基因5′侧翼序列2 721 bp,包含转录起始位点上游2 024 bp。经在线软件分析发现，ATGL启动子含有真核生物启动子元件TATA-box和CpG岛；对转录因子结合位点预测发现，其上含有FOXO、SREBF1、PPARG、C/EBPα和E2F1等结合位点。启动子活性分析结果表明，ATGL启动子核心区域位于转录起始位点上游-256—+1位，且在-527—-256位存在负调控元件。用罗格列酮和T0901317处理细胞后发现，二者均能显著上调ATGL启动子活性，且罗格列酮作用的区域为-527—-256位，T0901317在-882—-527位发挥作用，表明PPARG和SREBP1调控ATGL启动子活性。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
