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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王金 文春根 赵燕 王慧 王艺雅 季相山
为表达和纯化尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a蛋白,本研究从尼罗罗非鱼卵巢提取总RNA,反转录获得cDNA模板后,利用设计的引物PCR扩增cyp19a1a ORF区1200 bp片段,双酶切后连接到pET-28a(+)表达载体上,经酶切验证和DNA测序鉴定,证明成功构建了pET-28a-cyp19a1a原核表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌(E.coli)BL21中,优化IPTG诱导浓度和诱导时间。结果显示,在0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后,cyp19a1a重组蛋白大量表达,并以包涵体形式存在。通过Ni2+-NTA层析柱和切胶纯化,获得与预期片...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵丽慧 筴金华 张艳红 任炳琛 梁从飞 赵金良
为评估尼罗罗非鱼的耐盐碱性能,分别测定了上海、山东、河北3种品系尼罗罗非鱼鱼种96 h的半致死盐、碱度,并在不同盐碱混合浓度(S0A0、S10A0、S10A2、S10A4、S10A6)中进行为期60 d的养殖生长比较。单盐、单碱耐性研究表明,上海、山东、河北3种品系尼罗罗非鱼鱼种的96 h半致死盐度分别为18.528 g/L、20.347 g/L、19.342 g/L,96 h半致死Na HCO3碱度为8.827g/L、8.540 g/L、8.542 g/L。盐碱混合条件下,盐度为10时,96 h半致死碱度分别为河北品系(4.377g/L)>上海品系(3.561 g/L)>山东品系(3.108...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
朱华平 刘玉姣 刘志刚 卢迈新 高风英 可小丽 黄樟翰
以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)耐寒品系为实验材料,克隆了尼罗罗非鱼水通道蛋白基因(AQP1)的c DNA序列,并采用实时荧光定量PCR分析方法探讨了低温胁迫对罗非鱼AQP1基因表达水平的影响。序列分析结果显示,尼罗罗非鱼AQP1 c DNA长度为1 098 bp,包含36 bp的5′端非翻译区序列、783 bp开放阅读框(ORF)和279 bp的3′非翻译区序列,编码261个氨基酸。氨基酸序列比对表明,各物种间AQP1序列的同源性较高(96%~59%)。聚类分析表明,尼罗罗非鱼首先与同属鲈形目丽鱼科的斑马拟丽鱼(Maylandia zebr...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王兵 范武江 李思发
应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),以"吉丽"罗非鱼[尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,♀)×萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron,♂)]为材料,研究NKCC1a基因表达的盐度组织特异性。研究结果表明:(1)NKCC1a基因mRNA表达量存在显著的组织特异性,在低于25盐度环境中,NKCC1a mRNA在鳃、肝、肾及肠中均有表达;当盐度从0提高到48时,表达量在鳃中与盐度变化呈高度正相关(R>0.9,P<0.01),在肠和肾中与盐度变化呈负相关(R≈0.7,P<0.05),但在肝中则不受盐度变化的影响。(2)当盐度提高到64,NKCC1...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
单瑞后 王松 王骏 王军 汝少国
采用Sephacryl S-300过滤层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合的方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)成熟卵子匀浆液中分离纯化出了一种高分子量的蛋白。该蛋白能被Schiff试剂、甲基绿和苏丹黑B着色,Western blot显示能被金鱼卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)多克隆抗血清特异性识别,在非变性条件下分子量约为560 k D,在SDS变性条件下分子量约为112 k D,结果表明分离纯化的蛋白是一种含有糖、磷、脂基团的蛋白,符合鱼类Lv的性质,且与金鱼Lv有免疫交叉反应,从蛋白的性质和免疫原性以及分子量大小...
关键词：
尼罗罗非鱼 卵黄脂磷蛋白 纯化 性质鉴定
[期刊] 水产学报
[作者]
魏静 于林田 周林燕 张小萍 王德寿
为探讨低等脊椎动物Ｆｏｘｐ１与免疫细胞活化及机体雌激素水平的相关性，本研究首次分离克隆了尼罗罗非鱼Ｆｏｘｐ１的开放阅读框序列，并通过Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｐＣＲ对其ｍＲＮａ表达水平进行检测。结果显示，尼罗罗非鱼具有２种不同基因编码的Ｆｏｘｐ１分子，分别命名为ｏＮＦｏｘｐ１ａ与ｏＮＦｏｘｐ１ｂ；ｏＮＦｏｘｐ１ａ为１７１０ ｂｐ，由１５个外显子编码５６９个氨基酸，ｏＮＦｏｘｐ１ｂ为２０４０ ｂｐ，由１６个外显子编码６７９个氨基酸；ｏＮＦｏｘｐ１ａ／ｂ均含有Ｆｏｘｐ亚家族的特征性结构，即锌指结构、亮氨酸拉链样结构和叉状螺旋结构；与ｏＮＦｏｘｐ１ａ相比，ｏＮＦｏｘｐ１ｂ与高等脊椎动物Ｆｏｘｐ１具有更近的．．．
关键词：
尼罗罗非鱼 Foxp1 雌激素 淋巴细胞
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王玉红 尹晓雪 丁明媚 付胜利 陈萌 郭政 叶剑敏
为了了解尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)细胞转录因子Xbp1-S(On Xbp1-S)的基因序列特征及其在无乳链球菌(Streptococcus alactolyticus)应激和在B细胞分化中的作用,应用RACE克隆技术获得的On Xbp1-S基因全长1380 bp,包括开放阅读框ORF为1155 bp,5?端非编码区(5?UTR)长127 bp,3?端非编码区(3'UTR)长98 bp。On Xbp1-S序列分析推测该基因编码384个氨基酸,分子量为41.32 k Da,理论等
[期刊] 华北农学报
[作者]
王丹 解文杰 朱叶飞 赵金良 陈晓武
为了分析尼罗罗非鱼干扰素调节因子１（ＩＲＦ１）的表达规律及其功能，克隆了尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因ｃ ＤＮＡ全长，与其他脊椎动物ＩＲＦ１基因进行比对，构建ＩＲＦ家族系统进化树。然后使用Ｐｏｌｙ Ｉ∶ｃ对尼罗罗非鱼进行体内注射诱导抗病毒免疫反应，利用荧光定量ＰｃＲ技术检测处理组和对照组中尼罗罗非鱼各组织ＩＲＦ１基因的表达差异。最后构建尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因真核表达载体，对其进行细胞定位。结果表明，尼罗罗非鱼ＩＲＦ１有８８８ ｂＰ的开放读码框，编码２９５个氨基酸的蛋白序列。该蛋白Ｎ端高度保守，并含有６个保守的色氨酸，具有ＤＮＡ结合结构域。对蛋白相似率的计算发现尼罗罗非鱼与斑马鱼ＩＲＦ１相似度为５２．１．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
杨萍 李同刚 佘春霞 洪鹏志 周春霞
研究罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐(CH-0)及乙醇纯化(CH-Ⅰ)与透析纯化组分(CH-Ⅱ)的理化特性及体外自由基的清除能力,为多肽螯合盐的纯化研究提供理论基础。结果表明,CH-0的蛋白质含量(干基计)为71.86%,CH-Ⅰ和CH-Ⅱ分别为75.94%与78.83%;CH-0的锌含量为16.08%,CH-Ⅰ和CH-Ⅱ分别为14.49%与12.20%;凝胶层析结果显示,CH-Ⅰ、CH-Ⅱ与CH-0相比,有3个相同的主吸收峰,且大分子与小分子杂峰减少;氨基酸分析结果表明CH-Ⅱ中的Asp、Glu、Gly、Lys、Arg和His的含量均高于CH-Ⅰ,且都高于CH-0,与透析纯化相比,乙醇纯化必需...
[期刊] 水产学报
[作者]
周芬娜 董忠典 李同明 傅咏 王慧
为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列分析发现,尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因含4个外显子和3个内含子,开放阅读框长720 bp,编码239个氨基酸。从4尾尼罗罗非鱼中共得到8条不同的cDNA序列,分别编码不同的氨基酸序列。氨基酸序列比对后发现,序列间存在丰富的多态性,且主要集中在α-1区,多态性位点数远远高于半滑舌鳎MHC ⅡA基因。生物信息学分...
[期刊] 水产学报
[作者]
黄琴 张泽明 白孝明 赵长乐 代向燕 陶文静 周林燕 王德寿 魏静
为探究Smoothened（Smo）信号在精巢不同细胞增殖与存活中的作用，分离鉴定了尼罗罗非鱼smo（命名为Onsmo），检测了其在不同组织中的表达分布及在精巢中的细胞表达模式，在尼罗罗非鱼精巢组织的体外培养体系中，用Smo特异性激动剂SAG或抑制剂环巴胺分别进行处理，EdU掺入法及TUNEL法检测了处理后生殖细胞（Vasa~(+)）、Sertoli细胞（Amh~(+)）与Leydig细胞（Cyp17a1~(+)）增殖或凋亡情况。结果显示，Onsmo开放阅读框全长2 478 bp，编码825个氨基酸，含有7次跨膜结构域，与人SMO氨基酸一致性达77%；Onsmo表达于包括精巢在内的多个组织；在精巢中，Onsmo表达于多种不同类型细胞，包括精原细胞、精母细胞、Sertoli细胞以及Leydig细胞；在精巢组织的体外培养体系中，SAG处理对精原细胞增殖具有显著促进作用，而环巴胺处理对Sertoli细胞、Leydig细胞凋亡具有显著促进作用。从而表明，OnSmo信号在尼罗罗非鱼精巢精原细胞增殖与体细胞存活中具有重要作用。该研究首次证实了Smo信号在鱼类精巢不同细胞增殖与存活中的作用，为进一步研究其作用机制奠定了重要基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ融合蛋白，开展相关ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ蛋白的功能研究，深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的３个含ＳｉｇｌｅｃＳ ｌｉｋｅ ＯＲＦ的克隆质粒，ＰｃＲ扩增获得Ｓｉｇｌｅｃ－１、Ｓｉｇｌｅｃ－４ｂ和Ｓｉｇｌｅｃ－１４ ｌｉｋｅ的膜外段序列，插入真核表达载体Ｐｃ ＤＮＡ３．１（＋）ｈ ｉｇ ｇ１ Ｆｃ中，双酶切、测序鉴定后转染ｃＯＳ－７细胞。ｑ ＰｃＲ、ＷｅＳｔｅＲＮ－ｂｌＯｔ对目的蛋白的表达进行检测；亲和层析法纯化融合蛋白，ＳＤＳ－ＰＡｇｅ电泳检测纯化效率。ｅｌｉＳＡ检测融合蛋白与ｇｂＳ的结合活性。测序结果显示，成功构建３个融合蛋白．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
魏远征 董浚键 卢迈新 孙成飞 田园园 叶星
为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡鲲 程钢 吕利群 章海鑫 王会聪 阮记明 陈力 房文红 杨先乐
为从药物酶的角度建立一种客观评价鱼类"首过效应"的方法,利用荧光定量PCR法测定尼罗罗非鱼(Oreochomis niloticus Linn)肝、肾组织中P-糖蛋白(P-gp)基因表达量,分析了单剂量(40 mg.kg 1)口服给药恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)后,尼罗罗非鱼肠道、肝组织中mRNA水平的相对表达量与ENR血药浓度的时实相关性。实验结果显示:在尼罗罗非鱼肠道、肝组织中,P-gp基因在分子量127 bp处出现了与预期大小相符的特异性扩增片段。对尼罗罗非鱼口灌给药ENR后,ENR能迅速通过肠道进入血浆,其在肠道、肝和血浆中的消除速度较快,其药物时量曲线关系符合一级吸收...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗明坤 赵金良 Thammaratsuntorn Jeerawat 李传阳 魏继海 赵永华
通过组织切片、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,研究了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)卵巢发育过程中性类固醇激素(雌二醇E2、孕酮P)、卵黄蛋白原(Vtg)含量及Vtg mRNA相对表达水平变化规律。结果表明,尼罗罗非鱼性腺指数(GSI)与卵巢成熟发育间呈同步性变化,Ⅴ期达到峰值。血清中E2含量自卵巢Ⅱ期开始显著升高,Ⅳ期达到峰值,Ⅴ期后显著下降;血清P含量自卵巢Ⅱ期开始不断升高,Ⅴ期达到峰值,Ⅵ期显著下降;E2、P分别在卵巢成熟发育前期与后期发挥作用。肝中Vtg含量先升、后降,Ⅳ期达峰值;血清、卵巢中Vtg含量均自Ⅱ期开始增加,Ⅴ期达峰值,Ⅵ期显著降低;不同组织中V...
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