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[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
王晓杜 赵阿勇 邓绪芳 马志永
mdm2(murine double minute 2,鼠双微粒体-2)是抑制p53(肿瘤抑制因子)活性的重要分子之一,它们之间相互作用对细胞的生存具有重要功能。克隆得到小鼠Mus musculus mdm2 cDNA,构建其真核表达载体p3xFLAG-CMV-7.1-mdm2,Western blotting验证其在真核细胞中的表达大约为60 kDa的蛋白表达产物,间接免疫荧光技术检测mdm2的表达和亚细胞定位,mdm2主要在细胞核内表达。利用p53蛋白泛素化试验和p53报告基因活性检测试验,验证了FLAG-mdm2的活性,构建了mdm2调节p53泛素化和抑制p53活性的细胞模型,为研究p5...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
彭丽娜 邱亚峰 繆剑华 李向东 王晓杜 袁经权 王寿昆 李力 马志永
从小鼠巨噬细胞中提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增小鼠Toll样受体9(mTLR9)cDNA,构建真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-mTLR9,转染293T细胞,利用Western Blotting检测蛋白表达,并用双荧光素酶报告基因系统检测mTLR9对其介导的信号通路下游转录因子NF-κB转录活性影响.结果表明,本试验成功克隆到小鼠TLR9cDNA,构建的重组体转染细胞后表达的蛋白分子质量与预计相符,并能激活下游转录因子NF-κB的转录活性.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张前军 卢光琇
【目的】研究Borealin在小鼠早期胚胎及睾丸中的表达情况,初步探讨Borealin的生物学功能。【方法】利用体外合成RNA探针,采用全胚胎原位杂交检测Borealin基因在9.5～10.5日龄小鼠胚胎中的表达,免疫组化检测Borealin基因在成年小鼠睾丸中的表达,RT-PCR等方法检测Borealin基因在成年小鼠多组织中的表达。【结果】Borealin在小鼠9.5～10.5日龄胚胎的头部和成年小鼠生精小管基底部细胞的部位有较强的表达,在睾丸、卵巢、肠以及眼睛组织中的表达量较其他组织高。【结论】Borealin在小鼠9.5～10.5日龄胚胎头部及成年小鼠睾丸中均有特异性表达,可能参与了成...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苗现伟 席俊 刘玺 张改平 邓瑞广 李清州 张利娜 游雷鸣 刘运超
为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验结果显示其阳性率在90%以上。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李军 吕长荣 窦琳 窦忠英
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
蒋宗良 张明 付强
采用RT-PCR和原位杂交的方法检测了小鼠GSE(gonad-specific expression gene)基因在性腺中的表达特征。RT-PCR分析表明,GSEmRNA在出生后第14天的小鼠的睾丸中和刚出生小鼠的卵巢中可检测到,这时间正是生殖细胞减数分裂发生的时期;原位杂交分析的结果揭示,GSEmRNA分布于精母细胞Ⅰ(粗线期)、圆形精细胞和伸长的精细胞中,这一结果与RT-PCR分析的结果相吻合。研究结果提示,GSE与配子发生过程中的减数分裂有关。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘超 冯勇 董笑笑 张忠明 朱辉
为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET-LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统,表达并纯化到10个LjE2:His融合蛋白。经体外泛素化及Western blot分析,在10个LjE2中有9个具有泛素结合酶活性,1个(LjE2-5)未检测到泛素结合酶活性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘祥
为构建小鼠BMP3蛋白原核表达载体,纯化BMP3蛋白,制备并鉴定BMP3蛋白小鼠多克隆抗体,以及对BMP3进行系统进化关系研究。采用RT-PCR方法从小鼠肝脏中克隆获得BMP3蛋白的表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得BMP3蛋白,免疫小鼠制备BMP3蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度达1∶3 200倍,Western Blotting证实抗血清具有很好的特异性。通过DNAMAN软件对BMP3序列同源性分析发现其C-端在不同动物间存在较高同源性;MEGA软件对BMP3序列的系统发生分析证实BMP3在动物间具有明显的进化趋势。为BMP3蛋白调控骨代谢及与肿瘤的关...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
纪红军 胡进 肖成 牛亚茹 徐银学
[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范睿 张昱 许家玉 鲁亚平 蔡亚非
为揭示凋亡相关基因和c-kit基因在脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的相互关系,利用RT-PCR和免疫组化技术,分别检测了caspase-3、bax、bcl-2、c-kit的mRNA和蛋白在小鼠脊髓损伤后的表达。结果显示:在SCI后4 h开始出现大量的神经元和胶质细胞凋亡,其中促凋亡因子表达增加,而抑制凋亡因子表达量减少。caspase-3的mRNA和蛋白的表达在SCI后开始增加,并在72 h时达到峰值,bax表达规律与之基本一致,但是其峰值出现在24 h。随着时间的变化,bcl-2与c-kit的表达均表现为升高—降低—升高的变化趋势,与caspase-3和bax的变...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙星虹 孙晓凤 孙雷雷 李兰
为研究小鼠Dazl基因的功能及探究Dazl基因过表达在干细胞向生殖细胞分化过程中的作用,采用RTPCR方法,从13.5 dpc雌性胎鼠卵巢中克隆出Dazl基因的全部编码区,测序正确后利用限制性内切酶将其连接到真核表达载体pc DNA3.1上。线性化后对小鼠成纤维细胞进行转染,qRT-PCR及Western Blot技术显示外源基因Dazl已经成功转染并表达。为研究Dazl基因的功能及干细胞向生殖细胞的诱导分化奠定了基础。
关键词：
Dazl基因 真核表达载体 转染
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨晓宇 郝文博 董顺义 谷文峰 杨剑杰 胡兰
利用分子克隆技术,采用RT-PCR扩增follistatin related-gene全长cDNA序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染小鼠成肌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE方法鉴定FLRG蛋白表达情况。结果表明,成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-FLRG能成功转染小鼠成肌细胞,RT-PCR和SDS-PAGE电泳证实pEGFP-N1-FLRG在成肌细胞中表达出FLRG蛋白,为深入研究follistatin related-gene奠定了基础。
关键词：
FLRG 转染 真核表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
付强 薛雯 蒋宗良 秦文松 张明 卢克焕
从小鼠的睾丸中克隆了GSE(gonad-specific expression gene)基因,并对该基因进行序列分析和Southern、Northern杂交分析。核苷酸序列分析表明,GSE基因的ORF长度为745 bp,编码247个氨基酸,预测蛋白质分子量为27.6 kDa;Southern杂交证明GSE可能是单拷贝的基因;Northern杂交显示,GSE基因在小鼠体细胞组织(心脏、肝脏、肾脏、大脑、骨骼肌和脾脏)中没有检测到其表达,在睾丸中表达量很高,在卵巢中表达量较低。从推断出的氨基酸序列表明,GSE蛋白在细胞中可能是一个不带有信号肽的可溶性蛋白。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
许诺 贾俊龙 王维 朱玉博 王雪晗 白文林 罗光彬
为探讨３种感染方法对不同发育阶段胚胎中ＥＧＦＰ基因表达影响，利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染１－细胞期小鼠胚胎，分别提取以上３种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的ＥＧＰＦ基因，并以其为模板，扩增出６３０ｂＰ的ＥＧＰＦ基因片段。结果表明：慢病毒转染后在不同发育阶段的胚胎中，均扩增出ＥＧＦＰ目的片段（６３０ｂＰ）。当透明带下注射病毒时，９０Ｐ Ｌ注射组（Ｃ组）和６０Ｐ Ｌ注射组（ｂ组）的ＥＧＦＰ基因阳性率显著优于３０Ｐ Ｌ注射组（Ａ组）（Ｐ＜０．０５）。当胞质注射病毒时，Ｃ组显著优于其他组（Ｐ０．０５）。透明带．．．
关键词：
慢病毒 胚胎 EGFP 体外表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘子涵 滕亚迪 马梅香 吴俞霖 安礼友
为探索囊胚孵化发育中关键基因的表达规律、进一步解析妊娠识别机制，以小鼠囊胚为模型，对孵化进程中不同时期的囊胚进行转录组分析，并对关键基因表达量进行qPCR检测，对关键蛋白表达模式进行免疫荧光染色。转录组分析发现小鼠囊胚从扩张、孵化到完成孵化的孵化过程，差异基因表达呈2种调控模式，对调控模式中的基因集进行GO分析、KEGG分析，发现其涉及免疫与炎症、细胞分化、凋亡过程等生物过程。qPCR结果显示Ptgs1、Lyz2、Il-1α、Cfb、Ccl9表达上调，Cd36表达下调，结果与转录组分析一致。免疫荧光染色分析发现Plac1、Cdx2、C3在小鼠囊胚孵化过程中表达下调，Lyz2、Il-1β则表达上调。以上研究结果表明小鼠囊胚在孵化进程中，基因表达呈特定的分化动态，异常基因表达将导致孵化停滞。
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