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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱琳 陈小冬
为研究机体内稳态调节机制,经筛选高脂小鼠转录组数据得到特异上调的Steap4基因,对其进行不同物种间基因多态性比较,并在HepG2细胞中异源超表达该基因24 h后检测自噬相关基因在转录和翻译水平的变化。结果显示,STEAP4基因在不同物种间较保守,其基因多态性主要在翻译水平产生变化,小鼠Steap4基因与人源STEAP4基因相似性最高。荧光定量PCR的结果表明mSTEAP4对HepG2自噬关键基因无显著性影响,但Western blot结果显示mSTEAP4能够下调自噬相关蛋白的表达量,即mSTEAP4从蛋白水平抑制HepG2细胞自噬水平。STEAP4在细胞处于内稳态时会抑制自噬,降低细胞中的物质能量代谢,使细胞处于静息状态。
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
喻兆阳 李娟 黎华 费东 薛慧颖
探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G_2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G_1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞HepG2中扮演十分重要的角色.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶叶杏 余倩 刘瑞婷 张曦文 吴婷 潘思轶 徐晓云
为了研究陈化对于广陈皮抗氧化活性的影响，以新鲜干燥果皮、贮藏1 a和10 a广陈皮（Pericarpium Citri Reticulatae‘Chachi’,PCR-C）为研究对象，提取纯化得到广陈皮黄酮类化合物提取物（PCR-CF），以叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导HepG2细胞作为氧化应激损伤模型，评价陈皮的抗氧化活性，同时利用qRT-PCR和Western blot技术进一步探究其抗氧化活性作用分子机制。结果显示，广陈皮陈化过程中，橙皮苷含量呈现波动，但总体上是下降趋势；而多甲氧基黄酮及其总含量呈增加趋势，其中PCR-C10F中含量最高，PMFs总含量达到（98.66±0.56）mg/g。而且，不同贮藏年份PCR-CF可明显提高SOD、GSH水平和降低MDA含量，且不同年份间差异显著，PCR-C10F抗氧化活性最强，SOD、GSH、MDA水平分别达到（139.38±17.38）U/mg和（117.81±3.22）μmol/g、（0.39±0.03）nmol/mg。相关性分析表明，川陈皮素的积累是PCR-C10F维持氧化还原平衡的主要活性成分。此外，PCR-C10F显著上调Nrf2 mRNA以及其在胞核蛋白中的表达；从而激活抗氧化酶的mRNA和蛋白表达水平，HO-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平显著降低。研究表明，陈皮在陈化过程中，多甲氧基黄酮含量呈现增加趋势，抗氧化活性不断增强，PCR-C10F能够通过调控Nrf2-ARE抗氧化信号通路起到氧化应激抵御保护作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘恩 郑楠 范彩云 张养东 王尚 黄帅 程建波
为研究砷（Ａｒｓｅｎｉｃ，Ａｓ）和铅（ＬｅＡｄ，Ｐｂ）单独以及联合作用对人肝癌细胞（ＨｕｍＡｎ Ｌｉｖｅｒ ｃＡｒｃｉｎｏｍＡ ｃｅＬＬｓ，ＨｅＰＧ２）毒性作用和细胞氧化损伤的机制，采用不同质量浓度的Ａｓ（２．６５、３．１５、３．６５、４．１５和４．６５μＧ／ｍＬ）和Ｐｂ（１６０、１９０、２２０、２５０和２８０μＧ／ｍＬ）以及质量浓度比为１∶５５的Ａｓ＋Ｐｂ分别或联合处理ＨｅＰＧ２细胞２４、４８和７２Ｈ，使用ｍＴＴ法检测细胞活力；细胞培养２４Ｈ后测定细胞活性氧（ｒｏｓ）、乳酸脱氢酶（ＬｄＨ）、丙二醛（ｍｄＡ）和还原性谷胱甘肽（ＧｓＨ）的相对含量。ｍＴＴ结果表明：Ａｓ、Ｐｂ和Ａｓ＋Ｐｂ的２４、４．．．
关键词：
砷 铅 人肝癌细胞 细胞毒性 氧化损伤
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
肖成 胡进 纪红军 牛亚茹 焦建桥 戴玉健 徐银学
［目的］本文旨在研究转录因子同源框Ａ１０基因（ＨＯＸＡ１０）结合动力蛋白基因（ＤＮＭ１Ｌ）启动子区域绑定位点，并调控ＤＮＭ１Ｌ基因的表达机制。［方法］通过转录因子网站（ＴＦＳＩＴＥＳＣＡＮ）预测ＤＮＭ１Ｌ启动子区域存在ＨＯＸＡ１０的结合位点。分离怀孕１～７ Ｄ的小鼠子宫内膜，采用ＲＴ－ｑ ＰＣＲ检测其ＨＯＸＡ１０和ＤＮＭ１Ｌ ＭＲＮＡ表达量的变化规律。结合ＨＯＸＡ１０过表达和ＳＩＲＮＡ干扰试验，分析小鼠子宫内膜基质细胞中ＨＯＸＡ１０ ＭＲＮＡ表达量的变化如何影响ＤＮＭ１Ｌ表达。构建ＤＮＭ１Ｌ野生型和绑定位点突变型启动子区域（－１ ７４９～－２ ０３３ ｂＰ）荧光素酶报告载体，分别与ＨＯＸＡ１０．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王立峰 陈静宜 谢慧慧 王玉梅 石嘉怿 梁正昌 刘瑞海 鞠兴荣 袁建
【目的】了解薏米多酚的体内抗氧化能力,着重分析薏米结合多酚的抗氧化能力,确定结合多酚对总抗氧化能力的贡献;研究薏米多酚对肝癌细胞的毒性和抗增殖作用,在细胞层面上对薏米多酚的功能作用进行评价分析。【方法】以贵州黑谷薏米、辽宁5号薏米、龙薏1号薏米为原料,通过对薏米样品多酚类物质游离型和结合型部分构建细胞模型,评价细胞内抗氧化能力指数,以HepG2细胞为研究对象,测定分析薏米多酚提取物对细胞毒性的中位浓度CC50值和细胞抗增殖作用的半最大效应浓度EC50值。【结果】薏米结合型多酚抗氧化能力显著高于游离型多酚。不同品种间总多酚含量和抗氧化能力差异显著,辽宁5号薏米和龙薏1号薏米明显优于贵州黑谷薏米。...
关键词：
薏米 多酚 CAA 毒性 抗增殖
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
符群 王梦丽 郐滨 郭庆启
【目的】探讨鸡树条荚蒾果多酚对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用,以评价其降血糖活性。【方法】本研究采用高浓度胰岛素诱导,建立体外IR模型,并进行模型稳定性(细胞活性法)及可靠性(Z因子法)评估。试验设空白组、IR模型组、阳性对照(二甲双胍)组和荚蒾果多酚组,MTT法检测细胞活性;葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;蒽酮法测定糖原含量;比色法检测细胞己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)、葡萄糖六磷酸酶(G6PC)活性。【结果】10~(-6) mol/L的胰岛素诱导处理HepG2细胞24 h是产生胰岛素抵抗模型的最适条件,且IR模型在12～36 h内有较高的稳定性和可靠性。0.10～1.00 mg/mL荚蒾果多酚组的葡萄糖消耗量显著高于模型组(P <0.05)。【结论】鸡树条荚蒾果多酚可提高IR-HepG2细胞的HK、PK活性,加快糖酵解,增加糖原含量;抑制G6PC、PEPCK活性,从而减少细胞内源性葡萄糖的产生。所以鸡树条荚蒾果多酚对胰岛素抵抗细胞的治疗具有一定效果。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟显华 于洋 郝璐 刘天明 付越 李敬双
【目的】阐明华蟾毒精（ＣＢＧ）对巨噬细胞功能的影响，为ＣＢＧ的开发和利用提供理论依据。【方法】利用ＢａｌＢ／Ｃ小鼠制备与纯化腹腔巨噬细胞，采用不同质量浓度（０．５，１．０，１．５，２．０ｍＧ／ｌ）ＣＢＧ作用于巨噬细胞，采用ｍＴＴ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的影响；采用Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞分泌ＮＯ的影响；采用ｅｌｉｓａ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞分泌ｉｌ－６、ＴＮＦ－α和Ｇｍ－ＣｓＦ的影响。【结果】ＣＢＧ质量浓度为１．０，１．５和２．０ｍＧ／ｌ组均能极显著提高巨噬细胞的吞噬功能；ＣＢＧ质量浓度为０．５ ｍＧ／ｌ组能显著促进巨噬细胞ＮＯ的分泌，而１．０，１．５和２．０ｍＧ／ｌ ．．．
关键词：
华蟾毒精 巨噬细胞 吞噬功能 分泌功能
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张志敏 王建华 赵兴华 公小兵 余永涛 崔忠华 耿果霞
【目的】探索苦马豆素(SW)与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组,其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4mg·kg-1每天灌服SW生理盐水,连续21d,另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖(LPS)诱导活化,用ELISA法检测TNF-α生成,酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性,化学法检测H2O2浓度,MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2mg·kg-1之间,能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性,促进TNF-α和H2O2生成,且均呈剂量...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杜重波 李学瑞 张德林 李惠萍
弓形虫病的免疫是以细胞介导为主的免疫,其中,Mφ是机体抗弓形虫感染重要的效应细胞.本文旨在明确 TF 在体外激活小鼠腹腔 Mφ后的形态变化及对弓形虫消化的影响进行初步观察.按常规方法制备健康昆明鼠腹腔 Mφ,加含犊牛血清的1640培养液37℃培养,2 h 后洗去非沾附细胞,胰酶消化,洗涤、计数 Mφ,按6×10~5/mL 分装含飞片的培养瓶(1 ml/瓶~(-1)),另制备弓形虫免疫的猪脾脏细胞 TF_1和未免疫健康猪脾 TF_2加入含 Mφ培养瓶.另设不含 TF 的 Mφ对照瓶(组)。37℃密闭培养60 min
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀梅 程帆 刘维 孙涛 薛秀恒 李培英 王菊花
【目的】比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)分离方法的分离效果,建立小鼠IECs的有效分离培养方法,获得小鼠IECs原代细胞,为后续研究做准备。【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法以及胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ联合消化法共4种方法分离小鼠IECs并培养,通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的IECs进行细胞特异性鉴定,比较4种方法的分离效果。【结果】组织块培养法所获IECs活力好,增殖能力强,但成纤维细胞污染较严重,细胞纯度低;胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ分离法获得的IECs数量少且细胞增殖能...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王少杰 赵楠 申泽丹 撒刚 孙会敏 赵瑞 沈昕 陈少良
本文研究了NO对胡杨愈伤细胞Cd2+耐受性的影响。结果表明:Cd2+(50μmol/L)显著抑制了胡杨细胞的生长,而硝普钠SNP(NO供体,25μmol/L)能明显缓解Cd2+对胡杨细胞生长的抑制作用,并减轻镉对细胞膜的伤害以及镉胁迫导致的细胞活力下降。利用非损伤微测技术等研究了NO对Cd2+动态吸收的影响。Cd Cl2(50μmol/L)处理之后,胡杨细胞表现出Cd2+内流,而SNP(25μmol/L,6 h)显著抑制了Cd2+的内流,并降低了Cd2+在细胞内的积累。研究发现,NO是通过调控钙离子通道来抑制胡杨细胞对Cd2+的吸收。镉胁迫下Cd2+内流被钙离子通道专一性抑制剂氯化镧明显抑制,...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
白贵斌 王媛 燕超 刘晓明 李勇
【目的】探讨在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染小鼠早期,其肺脏上皮细胞中NF-κB和p53信号通路参与机体的免疫调控作用。【方法】将C57BL/6 Cnc小鼠30只(雄、雌各15只),按5只/组设空白对照组、阴性对照组(腹腔注射生理盐水)和MTB感染组(腹腔注射牛结核分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)),感染4 d后经安乐死处死小鼠,摘取小鼠肺脏和脾脏进行形态学观察;将小鼠肺脏进行冰冻超薄切片,HE染色分析其肺脏病理变化;利用免疫组织荧光技术和激光共聚焦显微镜,标记SP-C阳性肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的位置,观察NF-κB和p53蛋白在肺泡上皮细胞中的表达情况。提取小鼠肺脏组织细胞总蛋白,以β-actin为内参,通过Western blot分析NF-κB和p53信号通路相关因子TLR4、TRAF6、NF-κB、p53、MDM2和CBP在蛋白水平上的变化。【结果】在MTB感染小鼠4 d后,小鼠肺脏形态无明显变化,脾脏1/3尖部瘀血变黑;HE染色发现肺脏组织炎性细胞浸润。在小鼠肺脏上皮细胞中NF-κB与p53蛋白免疫荧光表达较空白对照组和阴性对照组增强。TLR4、NF-κB、p53、MDM2和CBP蛋白在雄性与雌性小鼠中都呈现出显著上调。【结论】当结核分枝杆菌感染小鼠时,小鼠肺脏上皮细胞通过NF-κB和p53信号通路活化来参与宿主抗结核分枝杆菌病感染的免疫调控作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张朝莹 文兆海 张玥 李嫄 徐立新 陆明敏 宋小凯 李祥瑞 严若峰
[目的]旨在研究旋毛虫钙网蛋白（rTs-CRT）对宿主免疫系统的影响。[方法]用原核表达技术获得纯化旋毛虫钙网蛋白，并进行Western Blot验证；将rTs-CRT与小鼠巨噬细胞共孵育，检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响；将rTs-CRT与大鼠外周血单核细胞（PBMC）共孵育，检测该蛋白对大鼠PBMCs转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western Blot结果显示rTs-CRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别；rTs-CRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌，抑制小鼠巨噬细胞的凋亡；rTs-CRT下调大鼠PBMCs T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平，上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平；rTs-CRT上调大鼠PBMCs IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22等细胞因子的转录水平，下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应，抑制Th2和Tfh免疫，对宿主免疫调节作用复杂。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
萧晟 刘丹丹 甘芳 黄克和
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L~(-1))DON处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT、Hoechst 33258、Western blot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L~(-1) DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L~(-1)时,细胞活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P<0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。
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