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[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 闫益波  齐巍巍  钟部帅  樊懿萱  宋洋  黄荣  万永杰  王锋  
在建立小鼠胚胎干细胞(ES细胞)无饲养层单层培养体系的基础上,使用丁酸钠(NaB)和表皮生长因子(EGF)作为前期诱导分化剂,诱导分化7 d,再用肝细胞生长因子(HGF)和地塞米松(Dex)诱导分化12 d,建立了体外两步法单层诱导ES细胞分化为肝样细胞的方法,并对诱导分化所得的肝样细胞从形态学、基因表达、蛋白分子标记及细胞功能等方面进行了检测,证明了分化所得细胞为肝细胞,肝细胞分化率为41.67%,为肝细胞来源提供了新的方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 宋晓平  窦忠英  
胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向诱导 ES细胞分化为造血细胞、心肌细胞、神经细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和黑素细胞等的途径和方法。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 马勇江  杨学义  窦忠英  
哺乳动物胚胎干细胞一般可从胚胎囊胚内细胞团分离得到 ,具有在体外保持不分化的无限增殖能力 ,在合适的培养条件下 ,胚胎干细胞可定向诱导分化形成多种细胞类型。人们对胚胎干细胞进行体外培养与定向分化可以得到大量同源细胞 ,以应用于患疾病的细胞或器官移植治疗等研究。文章概述了胚胎干细胞增殖与分化的信号调节机制、诱导分化方法 ,国内外研究概况及展望 4个方面的内容
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 孙懿  周静  林戈  卢光琇  
【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞(hESCs)向限定性内胚层(DE)诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96,120h的细胞,用实时荧光定量RT-PCR检测原条标记Gsc和Mixl1、中内胚层共同前体标记Brachyury、内胚层标记Foxa2和Sox17、中胚层标记Flk1、外胚层基因Pax6、多能性相关基因Oct4与Nanog表达水平的变化,用细胞免疫荧光检测Brachyury和Sox17蛋白表达水平的变化。【结...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 孙懿  周静  卢光琇  林戈  
【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120h的细胞各100ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2(p-SMAD2)表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2后48h时才检测到Bra...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 任雯雯  过七根  杨洋  宋红生  文铁桥  陈付学  
以胎鼠的神经干细胞为研究对象,将其分别置于FHL,FH,FL,LH 4种培养液中,于37℃、50mL/L CO2、饱和湿度下培养,同时作空白对照试验;7 d后,检测胆碱乙酰基转移酶(ChAT)免疫反应,研究在不同培养液中,神经干细胞向胆碱能神经元定向分化的能力。结果表明,在FHL和FH培养液培养的细胞中,能检测到ChAT阳性细胞,说明FHL和FH培养液可诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 杜军慧  曹文广  
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)是借助基因导入技术将某些转录因子导入人或动物的体细胞,使体细胞重编程而得到的多能性细胞。iPS细胞来源丰富,研究表明利用不同的载体诱导系统或不同的转录因子组合,多种体细胞都可被重编程为iPS细胞,如成纤维细胞、肝细胞、角质细胞及脐带血细胞等。作为干细胞中新的一员,iPS细胞在克隆形态、基因表达模式、表面标志物、拟胚体形成、畸胎瘤及嵌合体形成(小鼠)、分化能力等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)非常相似。与胚胎干细胞一样,在特定的诱导条件下,iPS细胞在体外可被诱导分化为多种细胞...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 赵兴  柏学进  封纪武  董雅娟  
【目的】建立昆明小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养体系,并鉴定其定向诱导分化为神经及脂肪细胞的能力。【方法】采用贴壁培养法分离培养昆明小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),通过相差倒置显微镜对其进行形态学特征观察;通过碱性磷酸酶(AKP)染色、Hoechst 33258染色、瑞士-姬姆萨复合染色检测MSCs的表型特征;通过β-ME诱导MSCs定向分化为神经样细胞,诱导后的细胞进行H.E染色,观察其形态学特性;通过NF-200、NSE免疫荧光细胞化学方法对已分化的神经样细胞进行鉴定和分化率分析;通过马血清诱导MSCs定向分化为脂肪细胞,观察其体外生长过程,并对诱导后的脂肪细胞进行油红O染色鉴定和分化率...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 陈松林  
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 汤帅   杨淇   张宇航   唐午阳   郑晓峰   李丕顺  
利用短发夹RNA(shRNA)介导的RNA干扰技术构建3种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)亚型基因(Akt1、Akt2、Akt3)敲低的小鼠胚胎干细胞(mESC)系,通过CCK–8法检测细胞活力;反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT–PCR)检测分化相关基因的表达;蛋白质印迹法(WB)检测多能性和分化相关蛋白的表达,研究Akt亚型基因敲低对mESC更新及分化的影响。结果表明:Akt1和Akt2的基因敲低不影响mESC的增殖和分化,但会抑制拟胚体(EB)内胚层和中胚层的形成;Akt2的基因敲低促进EB中后期外胚层的形成;Akt3的基因敲低会减缓mESC的增殖,但不影响多能性蛋白的表达,促进拟胚体中胚层和外胚层的形成。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 汤帅   杨淇   张宇航   唐午阳   郑晓峰   李丕顺  
利用短发夹RNA(shRNA)介导的RNA干扰技术构建3种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)亚型基因(Akt1、Akt2、Akt3)敲低的小鼠胚胎干细胞(mESC)系,通过CCK–8法检测细胞活力;反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT–PCR)检测分化相关基因的表达;蛋白质印迹法(WB)检测多能性和分化相关蛋白的表达,研究Akt亚型基因敲低对mESC更新及分化的影响。结果表明:Akt1和Akt2的基因敲低不影响mESC的增殖和分化,但会抑制拟胚体(EB)内胚层和中胚层的形成;Akt2的基因敲低促进EB中后期外胚层的形成;Akt3的基因敲低会减缓mESC的增殖,但不影响多能性蛋白的表达,促进拟胚体中胚层和外胚层的形成。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王洋  彭莹莹  段星祥  余娟  孙懿  
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是一类具有多能性和自我更新能力的多能干细胞,这些细胞具有无限增殖能力,并有潜能分化为机体三胚层所有类型的细胞。多能干细胞来源的肝细胞能够作为肝细胞的替代物应用于体外药物筛选和肝脏疾病的治疗。文章对多能干细胞向肝细胞的诱导研究、多能性干细胞来源肝细胞的鉴定方案研究及其在药物筛选和疾病治疗方面的研究进行了综述分析,并对未来的研究方向进行了总结与展望。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 丛义梅  马婧  孙瑞珍  王健宇  薛冰华  胡魁  尹智  刘忠华  
【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 徐小明  杜丽丽  林戈  段馨  卢光琇  
【目的】探讨人类胚胎干细胞(Human embryonic stemcells,hESCs)能否在小鼠胚胎环境中生存并参与其各个组织器官的分化,为hESCs与小鼠囊胚嵌合的可行性研究提供依据。【方法】将154枚受精后3.5 d(3.5days postcoitum,3.5 dpc)ICR品系小鼠囊胚随机分为3组:试验组(注射hESCs)、模拟注射组(注射针仅刺破透明带及滋养层细胞,但不注射细胞和溶液)及对照组(未注射),于注射后培养24 h统计囊胚完全孵化率。将稳定转染增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的含有9~15个hESCs的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 李勇  沈文正  杨春荣  窦忠英  
为了探讨神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)在体外培养中的生物学特性,研究不同细胞因子对NSCs分化的影响,试验对大鼠胎儿神经干细胞进行了分离培养,并研究了10,50和100 ng/mL的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain derived neruotrophic factor,BDNF)和胶质源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对NSCs的定向诱导分化作用。结果表明,大鼠胎儿NSCs可在体外增殖并形成典型的神经球,指数增长期在传代后...
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