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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
夏国良
利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。...
关键词：
小鼠胚胎 卵巢 卵细胞 生长发育
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王妍 赵晓娥 杨培先 张仕强 苏利红 马保华
为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的卵巢颗粒细胞集落进行了AKP染色和C-kit免疫组化染色鉴定。结果显示,在培养的第4天添加EGF组和FSH组与对照组相比均具有显著的促增殖作用(P0.05);卵巢颗粒细胞集落经AKP染色和C-kit免疫组化染色均呈阳性。提示EGF和FSH对小鼠卵巢颗粒细胞具有促增殖效应,小鼠卵巢颗粒细胞具有干细胞的...
关键词：
卵巢颗粒细胞 体外培养 细胞增殖 小鼠
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王建起 Selvaraj J.NIMAL 曹文广
为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况,用10IU PMSG皮下注射21～23日龄健康雌性ICR小白鼠,48h后刺破卵泡获取颗粒细胞,置入10%FBS的DMEM/F12中体外培养5d,用Trizol提取总RNA,RT-PCR验证后切取目的 DNA片段进行测序。RT-PCR测序结果表明体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可扩增BMP-8atranscript variant 2和BMP-8b的mRNA序列,不扩增BMP-8atranscript variant 1的mRNA序列。结果显示体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可表达BMP-8atranscript variant 2和Bm...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵永贞 刘西梅 李莉 乔宪凤 魏雁 曹斌云 魏庆信 郑新民
研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕...
关键词：
显微注射 共培养 小鼠胚胎 转基因
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
禹学礼 邓雯 庞有志 昝林森
以屠宰场牛卵巢为材料,采用体外成熟、体外受精、早期胚胎的体外培养等方法,研究了牛卵泡液(BFF)浓度、颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外发育潜力的影响。结果表明:(1)与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%,20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P0.05);但添加GCM的2级、3级卵母细胞受精后的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率分别显著高于未添加组...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王慧利 李静心 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先
为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。
关键词：
猪胚胎 体外发育 血清 共培养 凋亡
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛姗 王瑞 温建勋 郝斐 李硕 梁浩 刘东军
【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚...
关键词：
牛 胚胎干细胞 成纤维细胞 混合饲养层
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘海军 薛俊 徐直 张冬梅 李义海
分离方法和绵羊年龄对绵羊卵巢腔前卵泡的分离效果有显著影响。从每只羊获得腔前卵泡的总数看,机械分离法(89.5)和酶消化法(103.3)差异不显著,而正常卵泡数和正常卵泡率机械分离法(27.9,31.2％)明显高于酶消化法(19.1,18.5％);采用机械分离法,每只初情期前绵羊获得的腔前卵泡总数和正常卵泡数(125.6,35.1)均高于成年绵羊(60.4,16.1),而正常卵泡率(28.1％比26.8％)差异不显著。腔前卵泡在体外培养6 d,培养液中添加20ng/mL的IGF-I,培养结束时卵母细胞直径增幅为34.8 μm,与对照组的29.9 μm差异不显著。
关键词：
绵羊 腔前卵泡 分离 体外培养
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
袁安文 许道军 王乃东 周卫国 薛立群
将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9)μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8)μm和28 d(2 088.9±297.7)μm移植体(P
关键词：
小鼠 卵巢移植 卵母细胞 移植时间 雄性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王晶 商旋 张晓敬 常世民 马爽
研究不同浓度的氯化镉对体外培养的小鼠皮肤细胞存活影响。采用组织块法启动小鼠皮肤细胞的原代培养，胰酶消化法传代培养，利用光镜观察、ＭＴＴ细胞毒性分析、荧光染色和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方法研究镉对小鼠皮肤细胞的毒性作用。结果显示，在３７℃，含２０％胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养条件下，小鼠皮肤组织原代启动第２天即有细胞迁出，为成纤维样细胞形态，生长分裂旺盛，第６天即可长成汇合的细胞单层，并能稳定连续传代。２０～１６０μＭｏｌ／ｌ氯化镉可显著降低体外培养的小鼠皮肤细胞的存活率，具有浓度和时间的依赖性。处理２４和４８ ｈ对肝细胞的半致死率浓度分别为３９．８１和２２．３９μＭｏｌ／ｌ。ＣＤ Ｃｌ２处理导．．．
关键词：
镉 皮肤细胞 细胞培养 细胞凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘雨潇 华进联 张慧茹 窦忠英
对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明...
关键词：
心肌细胞 体外培养 小鼠
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴康 薛明强 倪建国 宋学宏 贡成良
:研究中华鳖胚胎细胞体外培养适宜培养渗透压、培养基和培养温度等条件 ,并进行传代试验。结果表明 ,胚胎原代细胞在 2 5～ 2 8℃ ,渗透压 2 50mmol/kg ,RPMI - 16 4 0 +10 %小牛血清培养液及无CO2 的条件下 ,生长良好 ,72h长满单层 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 3代为适应期、4～ 6代为旺盛期、7～ 9代为衰退期。第 6代细胞染色体组型分析 ,其染色体为整二倍体 ,并未发生转化
关键词：
中华鳖 胚胎细胞 细胞培养
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王锋
利用屠宰牛的卵巢 ,研究了卵巢内 (IO)卵母细胞体外成熟、受精及发育能力。结果表明 ,成熟培养液中添加FSH (10 μg·mL-1)、hCG (2 0 μg·mL-1)和E2 (1μg·mL-1)等激素对IO卵母细胞受精发育能力有极显著促进作用(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵永贞 魏雁 曹斌云 李莉 魏庆信 郑新民
探讨了获取受精卵的时间、显微注射和培养液等因素对显微注射胚胎体外发育的影响。结果表明 :在注射HCG后 2 4～ 2 6h和 18～ 2 2h时获得的受精卵的囊胚率分别为 4 5 %和 2 0 % ,二者差异显著 ;注射胚和非注射胚卵裂率差异显著 (5 6 /80VS 74 /76 ) ,但显微注射对 2 细胞以后阶段的发育没有显著影响 ;mWM1培养液和mWM2 培养液都能有效克服受精卵体外发育阻断 ,mWM2 培养液更支持早期转基因胚胎体外发育。
关键词：
显微注射 体外培养 小鼠 胚胎
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁安文 邓治邦 王乃东 许道军 薛立群
【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组(90.7%)差异不显著(P>0.05)。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为(41.4±25.8)枚,2-细胞胚胎发育率为...
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