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[期刊] 西南农业学报
[作者]
蒋宗良 张明 付强
采用RT-PCR和原位杂交的方法检测了小鼠GSE(gonad-specific expression gene)基因在性腺中的表达特征。RT-PCR分析表明,GSEmRNA在出生后第14天的小鼠的睾丸中和刚出生小鼠的卵巢中可检测到,这时间正是生殖细胞减数分裂发生的时期;原位杂交分析的结果揭示,GSEmRNA分布于精母细胞Ⅰ(粗线期)、圆形精细胞和伸长的精细胞中,这一结果与RT-PCR分析的结果相吻合。研究结果提示,GSE与配子发生过程中的减数分裂有关。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
付强 薛雯 蒋宗良 秦文松 张明 卢克焕
从小鼠的睾丸中克隆了GSE(gonad-specific expression gene)基因,并对该基因进行序列分析和Southern、Northern杂交分析。核苷酸序列分析表明,GSE基因的ORF长度为745 bp,编码247个氨基酸,预测蛋白质分子量为27.6 kDa;Southern杂交证明GSE可能是单拷贝的基因;Northern杂交显示,GSE基因在小鼠体细胞组织(心脏、肝脏、肾脏、大脑、骨骼肌和脾脏)中没有检测到其表达,在睾丸中表达量很高,在卵巢中表达量较低。从推断出的氨基酸序列表明,GSE蛋白在细胞中可能是一个不带有信号肽的可溶性蛋白。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
张凤英 马凌波 蒋科技 张丹 陈立侨
vasa蛋白属于DEAD家族蛋白,是一种RNA解旋酶,在生殖细胞的分化中具有重要作用。本研究从拟穴青蟹卵巢中克隆得到vasa基因cDNA全长(将其命名为Sp-vasa),Sp-vasa序列长度为2 944 bp,其中开放阅读框(ORF)长度为1 899 bp,编码632个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白的7个高度保守的结构域。半定量RT-PCR结果显示,Sp-vasa只在卵巢和精巢中特异表达,在其它组织则未检测到表达。由此可见,vasa属于拟穴青蟹性腺特异表达基因。因此,Sp-vasa基因可有望作为有效的分子指标研究拟穴青蟹原始生殖细胞的起源、迁移以及生殖腺的发生。
关键词：
拟穴青蟹 vasa 克隆 性腺
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王全禾 李伟 田海峰 孟彦 肖汉兵 胡乔木
采用RT-PCR法从大鲵(Andrias davidianus)性腺中分离获得Cyp51基因全长cDNA 1 975 bp, 5′端非编码区135 bp, 3′端非编码区331 bp,开放阅读框(ORF)1 509 bp,编码503氨基酸。生物信息学分析显示,Cyp51基因编码蛋白的二级结构含有50.20%的α-螺旋,9.96%的延伸链,3.59%的β-转角,36.25%的无规则卷曲。系统进化树显示,大鲵与两栖类中的热带爪蟾和非洲爪蟾同源性最高,与其它物种也有较高的同源性。qRT-PCR分析结果显示,Cyp51基因在卵巢、肝、肾等组织表达水平显著性高于其它各组织;性腺发育不同时期表达结果显示,Cyp51基因在1-5Y卵巢中表达显著性高于精巢,在6Y时无显著性差异;在雌性与伪雌性性腺中表达水平显著高于雄性及伪雄性性腺。结果表明Cyp51基因对大鲵的性腺分化,尤其是卵巢发育有着重要作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邵根宝 高爱民 徐银学 丁红梅 贾超 刘红林
利用实时定量RT-PCR技术,对体外培养的小鼠植入前胚胎发育过程中鼠内源逆转录病毒样基因(MuERV-L)的表达进行研究,并通过appd icolin(DNA复制抑制剂)、TSA(组蛋白去乙酰化酶特异性抑制剂)分别抑制1-细胞期DNA的复制和合子基因组激活(ZGA)过程中组蛋白去乙酰化,探索MuERV-L基因表达的变化。结果表明:MuERV-L基因的转录在受精后9~11 h快速启动,并在2-细胞阶段出现瞬时高表达。抑制试验显示:1-细胞期DNA的复制受抑制后,MuERV-L基因的转录也被显著抑制(P<0.05);在TSA处理的4-细胞胚胎中,MuERV-L基因显著高表达(P<0.01),且其水...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐璐 王根林
为研究可溶性腺苷酸环化酶(sAC)基因的组织特异性表达及其在不同周龄小鼠睾丸中的表达情况,探讨其在精子发生及获能中的作用,运用RT-PCR法分析小鼠sAC基因的组织表达情况及其发育的时序性变化。结果显示,sAC基因优先表达于睾丸和附睾,表达量随发育周龄的增长而呈增加趋势:于2周龄开始检测到它的表达,随后表达量显著增加至6周龄,再逐渐增长至一个平台期,呈现出发育阶段性,说明sAC在精子形成及获能过程中具有特殊作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
程金波 王加启 卜登攀 刘光磊 张春刚 董晓丽 魏宏阳 周凌云 刘开朗
研究小鼠不同生理阶段以及免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化。选择120只健康昆明小白鼠,于分娩后4 d进行如下制剂处理:脂肪酶蛋白(Lipase)、空免疫刺激复合物(ISCOM)和Lipase。于分娩后8和12 d(即注射后4和8 d)用间接ELISA法测定乳中和血清中的特异性IgG含量,用Real Time PCR检测小鼠乳腺中乳铁蛋白基因的相对表达量。另外,正常生理状态乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化分别是在分娩后1、4、8和12 d进行检测。结果表明,正常状态下,小鼠分娩后1 d时,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量相对较高,而在分娩后4、8和12 d时较低;免疫条件...
关键词：
小鼠 免疫刺激 乳腺 乳铁蛋白 基因表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张前军 卢光琇
【目的】研究Borealin在小鼠早期胚胎及睾丸中的表达情况,初步探讨Borealin的生物学功能。【方法】利用体外合成RNA探针,采用全胚胎原位杂交检测Borealin基因在9.5～10.5日龄小鼠胚胎中的表达,免疫组化检测Borealin基因在成年小鼠睾丸中的表达,RT-PCR等方法检测Borealin基因在成年小鼠多组织中的表达。【结果】Borealin在小鼠9.5～10.5日龄胚胎的头部和成年小鼠生精小管基底部细胞的部位有较强的表达,在睾丸、卵巢、肠以及眼睛组织中的表达量较其他组织高。【结论】Borealin在小鼠9.5～10.5日龄胚胎头部及成年小鼠睾丸中均有特异性表达,可能参与了成...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李军 吕长荣 窦琳 窦忠英
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏雪平 连子童 田海峰 李忠 孙敬锋 胡乔木
利用黄鳝(Monopterus albus)卵巢、间性性腺以及精巢转录组测序数据分析结果，筛选获得表达差异的LncRNA 54770.30。为探究黄鳝LncRNA 54770.30的生物学特性及其在性逆转过程中的功能和作用，本研究分析了黄鳝LncRNA 54770.30在不同组织与不同阶段性腺的表达。结果表明：LncRNA 54770.30在各组织均有表达，在肌肉中表达量最高，精巢与肝脏次之；LncRNA 54770.30在黄鳝卵巢至精巢转变过程中表达量呈上升趋势，卵巢与间性性腺中表达量无显著性差异，但卵巢、间性性腺与精巢中表达量呈显著性差异。利用原位杂交技术对LncRNA 54770.30在不同阶段性腺中表达进行定位分析，结果显示LncRNA 54770.30在黄鳝各阶段性腺中均有阳性信号，卵巢中主要在卵细胞的细胞质与颗粒细胞以及体细胞中表达；精巢中主要在初级精母细胞和次级精母细胞中表达。对黄鳝幼体进行甲基睾酮处理后，实验组卵巢结构出现明显退化，卵泡数量减少，出现中空小叶；荧光定量PCR分析显示，LncRNA 54770.30在实验组退化卵巢中的表达量较对照组显著下降。以上研究表明，LncRNA 54770.30可能参与黄鳝性腺发育过程，并在黄鳝性逆转中发挥重要作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙星虹 孙晓凤 孙雷雷 李兰
为研究小鼠Dazl基因的功能及探究Dazl基因过表达在干细胞向生殖细胞分化过程中的作用,采用RTPCR方法,从13.5 dpc雌性胎鼠卵巢中克隆出Dazl基因的全部编码区,测序正确后利用限制性内切酶将其连接到真核表达载体pc DNA3.1上。线性化后对小鼠成纤维细胞进行转染,qRT-PCR及Western Blot技术显示外源基因Dazl已经成功转染并表达。为研究Dazl基因的功能及干细胞向生殖细胞的诱导分化奠定了基础。
关键词：
Dazl基因 真核表达载体 转染
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王文静 吴彪 刘志鸿 孙秀俊 周丽青 徐万栋
为探究性类固醇激素合成相关基因17β-羟类固醇脱氢酶14(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 14,17β-HSD14)在魁蚶(Scapharca broughtonii)性腺发育过程中的作用，本研究从魁蚶转录组中筛选并验证了17β-HSD14基因序列，通过原位杂交和实时荧光定量PCR检测了该基因在魁蚶中的组织定位及性腺发育过程中表达变化规律。结果显示：17β-HSD14基因的编码区序列长度为822 bp,编码273个氨基酸；原位杂交实验在魁蚶卵巢的成熟卵细胞、滤泡壁和精巢中的精原细胞、精子以及其他组织的细胞中都检测到了17β-HSD14基因的阳性杂交信号；qRT-PCR结果表明，17β-HSD14基因的表达随其性腺发育而产生变化，在形成期(Ⅰ期)到增殖期(Ⅱ期)的过程中呈上升趋势，成熟期(Ⅲ期)至耗尽期(Ⅴ期)呈下降趋势，且在卵巢组织中的表达量显著高于精巢组织。综上，17β-HSD14基因与魁蚶的性腺发育密切相关，可能对其性腺发育、功能维持和成熟具有重要的作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁少帅 于潇含 杨丹丹 秦贞奎
SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(Chlamys farreri)sox9(Cf-sox9)全长的c DNA序列,其长度为2835 bp,开放阅读框为1413 bp,编码470个氨基酸。预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG-box和SOXE亚族的高保守区域,但没有脊椎动物羧基端的Pro-Gln-Ser
关键词：
栉孔扇贝 sox9 性腺 配子发生
[期刊] 水产学报
[作者]
陈亮 黄建华 张殿昌 苏天凤 江世贵
以池塘养殖250日龄的斑节对虾性腺组织为材料,利用mRNA差异显示(differential display,DD)筛选性腺差异表达基因,获得173条雌、雄性腺差异表达片段。随机选取44条差异片段进行回收、克隆、测序及Real-timeRT-PCR验证,最终获得10条阳性差异表达片段,其中OA7-1、OA7-2、OG8-1、OG8-2、OC1-3、OC4-2、OC8在卵巢中表达量极显著(P<0.01)高于精巢,TG6-3、TG8在精巢中表达量极显著(P<0.01)高于卵巢,TC1为精巢特异表达片段。序列分析表明OA7-2为脱氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase)(E值6e-54);OG8...
关键词：
斑节对虾 性腺 差异显示 差异片段
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
王晓杜 赵阿勇 邓绪芳 马志永
mdm2(murine double minute 2,鼠双微粒体-2)是抑制p53(肿瘤抑制因子)活性的重要分子之一,它们之间相互作用对细胞的生存具有重要功能。克隆得到小鼠Mus musculus mdm2 cDNA,构建其真核表达载体p3xFLAG-CMV-7.1-mdm2,Western blotting验证其在真核细胞中的表达大约为60 kDa的蛋白表达产物,间接免疫荧光技术检测mdm2的表达和亚细胞定位,mdm2主要在细胞核内表达。利用p53蛋白泛素化试验和p53报告基因活性检测试验,验证了FLAG-mdm2的活性,构建了mdm2调节p53泛素化和抑制p53活性的细胞模型,为研究p5...
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