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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
周崇 侯云鹏 周光斌 吴通义 金方 洪琼花 朱士恩
利用小鼠孵化囊胚为模型 ,为猪孵化囊胚的冷冻保存摸索适宜的方法和条件 :在 2 5和 37℃条件下 ,用不同含量的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠孵化囊胚实施细管法和OPS法冷冻保存。在 2 5℃条件下 ,细管一步法冷冻保存后的囊胚恢复率仅为 32 5 %～ 74 4 % ,与对照组 (10 0 % )差异极显著 (P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
剧世强 赵雪璠 张妍婷 孔妍 李建珅 芮荣
以小鼠卵丘细胞为供核细胞,猪体外成熟去核卵母细胞为受体,构建小鼠-猪种间体细胞核移植(iSCNT)胚胎,并以猪体细胞核移植(pSCNT)胚胎为对照,采用开放式拉长细管(OPS)法对所获iSCNT胚胎进行冷冻保存,研究不同冷冻保护液(ES、EFS和EDFS)及胚胎不同发育阶段(2-、4-、8-细胞)对冷冻效果的影响。结果显示:小鼠-猪iSCNT胚胎卵裂率与猪pSCNT胚胎相比无显著差异(P>0.05),但其8-细胞发育率则明显较低(28.1%对56.8%,P<0.05)。采用ES液作为冷冻保护液,iSCNT胚胎冻后存活率与EDFS组相似,但显著高于EFS组(28.6%和22.7%对9.5%,P<...
关键词：
种间核移植 胚胎 玻璃化冷冻
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李青旺 于永生 江中良 王立强 胡建宏 常万存
采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ,二步法冷冻效果显著优于一步法 (P
关键词：
牛 卵母细胞 玻璃化冷冻
[期刊] 水产学报
[作者]
田永胜 陈松林 于过才 季相山
大菱鲆隶属于鲆科(Bothidae)、菱鲆属(Scophthalmus), 自然分布于大西洋东侧欧洲沿岸以及黑海和地中海沿岸, 是欧洲的重要养殖鱼类之一,1992年黄海水产研究所自英国引进这一鱼种,目前已在我国山东、辽宁、福建等沿海地区推广养殖,成为我国工厂化海水养殖的名贵鱼种之一。对于这一引进的新鱼种,在其胚胎和仔稚幼鱼的发育,体表色素细胞形态,卵膜对DMSO的渗透性等生物学方面进行了一定的研究,而做为一个新的鱼种资源,对其种质资源的保存研究,目前国内还未有报道。冷冻保存是长期保存鱼类种质资源和遗传多样性的有效手段,但鱼类胚胎由于体积大(直径为1-6 mm),膜通透
关键词：
大菱鲆 胚胎 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄晓荣 庄平 章龙珍 冯广朋 刘鉴毅 张涛 赵峰
研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻4...
关键词：
中华绒螯蟹 胚胎 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 水产学报
[作者]
章龙珍 鲁大椿 柳凌 郭峰 张洁明
泥鳅胚胎 (胚孔封闭期 )用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温 (- 196℃ )冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戴建军 芮荣 武彩红 葛立军 卢庆
旨在探讨提高猪GV期卵母细胞冷冻保存效率的可能途径。将EDS、EFS40和ES冷冻保护液用作卵母细胞冻前、冻后程序的处理,但不冷冻,比较3种冷冻保护剂对猪GV期卵母细胞的毒性作用;采用ES液作玻璃化液,比较常规细管法、OPS法和电镜铜网法3种冷冻载体对猪GV期卵母细胞的冷冻效果;并以ES液作玻璃化液,OPS管为冷冻载体,将猪GV期卵母细胞分5组,即对照组、CB+离心处理组、直接冷冻组、CB+冷冻组、CB+离心+冷冻组进行对比处理,比较各处理卵母细胞的冻后存活率与发育率。结果表明,在不同冷冻保护液中,以ES液组合作为玻璃化冷冻液时的毒性作用最低,与对照组间无明显差异(P>0.05);在3种冷冻载...
关键词：
猪 卵母细胞 玻璃化冷冻
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
朱士恩 王海彦 曾申明 王永胜 张忠诚 周林 陈锟
本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚，研究对其体外发育的影响，结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组，解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组（94％）比较无显著性差异（P＞0．05）。当在EFS40中处理1min的一步法冷冻组的胚胎，照射后发育率由对照组的54％提高到97％差异极显著（P＜0.01）。改用GFS40一步法冷冻的胚胎照射后的发育率也明显高于对照组（P＜0．05）。另外，对冷冻前胚胎进行照射，其解冻后发育率（87％）也得到了显著提高（P＜0．01）。
关键词：
生物谱 玻璃化 冷冻 桑椹胚 小鼠
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
田永胜 刘本伟 陈松林
为避免鱼类胚胎玻璃化冷冻过程中脱玻璃化现象发生,本文对冷冻过程中温度变化及解冻方法进行了研究。在室温13℃下,将含有玻璃化液FVS3的麦管直接投入到-196℃的液氮中,麦管内温度达到-196℃时,所用的时间为15.46±1.38s,降温速率为800℃/min。对玻璃化麦管在35~45℃水浴中解冻时间进行测定。结果显示,解冻所需时间在6.17~7.94s之间,麦管从-196℃升高到13℃的解冻速率为1500~2000℃/min。当水浴温度从37℃逐步升高到72℃时,对水浴表面蒸气温度的变化进行了测定,相应水温下蒸气温度从25.47℃升高到38.6℃。在麦管中加入不同浓度的玻璃化液FVS1、FVS...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘本伟 陈松林 田永胜 孔晓瑜 王春花
以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王秋竹 林丽华 董文轩
研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据。试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验。结果表明:简单玻璃化法保存时,不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5~6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS...
关键词：
月季 茎尖 超低温保存 玻璃化法 存活率
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
武彩红 芮荣 戴建军 谢冰 剧世强 卢晓 侯加法
为研究猪未成熟期(GV期)和体外成熟期(MⅡ期)卵母细胞玻璃化冷冻后的超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的GV期和MⅡ期卵母细胞制备电镜标本。GV期和MⅡ卵母细胞分3组进行处理:Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为GV期卵母细胞冷冻组,Ⅲ组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,所用玻璃化冷冻程序更适用于猪GV期卵母细胞的冷冻保存,GV期冷冻组卵母细胞的二乙酸荧光素(FDA)染色存活率、卵裂率均明显高于MⅡ期卵母细胞冷冻组。透射电镜观察结果发现,猪GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,主要表现为部分卵丘-卵母细胞复合体(COC)发生卵丘细胞脱落,透明带破损,卵丘细胞碎裂,卵丘细胞与卵母细胞间的连接受到破坏,卵母细胞微绒...
[期刊] 林业科学
[作者]
王越 刘燕
A procedure was studied on cryopreservation of Photinia serrulata shoot-tips in vitro by vitrification. The excised shoot-tips which were cultured for 30 d, 1.5～2.0 mm long, were loaded with 60% PVS_2 for 40 min at room temperature in effendoff tube, then were exposed to PVS_2 at 0 ℃ for 50 min. Fol...
关键词：
石楠 茎尖 玻璃化 超低温
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周旭红 何艳 欧阳德爱 桂敏 李绅崇 曹桦 杨春梅 卢珍红 莫锡君
以香石竹"云恋蝶"离体茎尖为试材,研究玻璃化法对香石竹茎尖的离体超低温保存。通过正交设计试验对影响存活率的主要因素(预培养培养基中蔗糖浓度、预培养时间、装载时间和PVS2处理时间)进行分析,结果表明,预培养1 d,预培养基中蔗糖浓度为0.5 mol/L,装载40 min,PVS2液处理40 min,液氮处理1 d,在40℃水浴化冻后的香石竹茎尖,成活率达44.13%,且超低温再生苗与其常温苗的生理生化指标无显著差异。本试验成功地建立了香石竹种质资源玻璃化法超低温保存的技术,为香石竹种质资源的长期保存提供了一条有效途径。
关键词：
香石竹 茎尖 玻璃化法 超低温保存
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郭玉琼 赖钟雄 吕柳新
采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织...
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