为了探讨免疫刺激后昆明小白鼠乳腺pIgR基因mRNA转录和特异性IgA含量变化。选择48只健康受孕昆明小白鼠,分为A、B、C、D组,分别于分娩后第4天注射灭菌生理盐水、Lipase+灭菌生理盐水、空ISCOM和Lipase+LTB+ISCOM,每组注射12只,并于分娩后第8天和12天采集小鼠乳样、血样和乳腺组织,用间接ELISA法测定乳和血浆中的特异性IgA含量,用Real Time-PCR检测小鼠乳腺中pIgR基因的相对转录水平。结果表明,免疫刺激对小鼠血浆中特异性IgA的含量无显著性影响(P>0.05),但是免疫B组和D组中小鼠分娩后12 d的乳中特异性IgA含量显著高于8 d乳中的特异性...

研究小鼠不同生理阶段以及免疫条件下,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化。选择120只健康昆明小白鼠,于分娩后4 d进行如下制剂处理:脂肪酶蛋白(Lipase)、空免疫刺激复合物(ISCOM)和Lipase。于分娩后8和12 d(即注射后4和8 d)用间接ELISA法测定乳中和血清中的特异性IgG含量,用Real Time PCR检测小鼠乳腺中乳铁蛋白基因的相对表达量。另外,正常生理状态乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量的变化分别是在分娩后1、4、8和12 d进行检测。结果表明,正常状态下,小鼠分娩后1 d时,乳腺内乳铁蛋白基因mRNA表达量相对较高,而在分娩后4、8和12 d时较低;免疫条件...

为探讨蒙药成份复方对乳腺炎模型小鼠免疫功能的影响,96只产后35d泌乳期母鼠被随机分为4组(n=24),灌药3d后,于第4d的末次灌药后1h复制小鼠乳腺炎病理模型,继续用药治疗3d。并于复制模型前0、48和72h用碳廓血清法测巨噬细胞吞噬活力;MTT法测自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)活性;脱臼处死小鼠称胸腺和脾脏湿重并计算小鼠免疫脏器指数;ELISA法测小鼠血清中白介素-4(IL-4)、干扰素(IFN-γ)含量。结果表明蒙药成份复方可以显著提高小鼠免疫脏器指数、促进

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。

以荷斯坦奶牛为试验动物,分别在后海穴、臀肌和皮下接种乳腺炎灭活疫苗,比较其免疫效力,结果显示后海穴免疫首先能节省疫苗用量,同时还可以提前产生免疫力,显著提高血清中的抗体水平(P<0.01);其次,接种疫苗时因针刺穴位的作用,显著提高了血液中的白细胞总数和淋巴细胞数,增强了免疫细胞的功能;最后显著降低乳汁中的体细胞数(P<0.01)。

选用１２只Ｗｉｓｔａｒ受孕大鼠进行配对实验。实验鼠每周灌服半胱胺（ＣＳ）一次（８０ｍｇ／ｋｇ），直至分娩（共喂５次）。结果表明，实验鼠妊娠末期乳腺绝对和相对湿重明显提高，ＤＮＡ含量升高（Ｐ＜０．０５），ＲＮＡ含量差异不明显，故ＲＮＡ∶ＤＮＡ比值明显降低；实验组大鼠血液生长抑素（ＳＳ）和催乳素含量比对照鼠明显下降，生长激素（ＧＨ）水平明显提高。结果提示，ＣＳ能促进妊娠大鼠乳腺发育，而降低大鼠ＳＳ含量，提高ＧＨ水平可能为其主要的作用机制

采用单因子实验设计方法,进行了饲料中添加维生素E对美国红鱼生长(存活率、特定生长率和饲料效率)和非特异性免疫相关指标(血清中溶菌酶活性、血清总补体活性和超氧化物岐化酶(SOD)活性)影响的研究,设计了5个不同维生素E水平(0.1、25.3、51.0、102.8和203.2mg/kg)的等氮等能饲料,对美国红鱼进行为期56d的生长实验,每个水平3个重复,每个养殖单元放养初始体重为151g左右的美国红鱼20尾。饲养实验在海水网箱(1.5m×1.0m×1.0m)中进行。结果表明,随着饲料维生素E含量增加,美国红鱼饲料效率、特定生长率和成活率显著提高,美国红鱼最佳生长性能的饲料维生素E添加量为102....

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠，探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制，为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠，随机均分为3组：对照组，腹腔注射无菌的PBS;DZ处理组，腹腔注射DZ(100 mg·kg~(-1));阳性对照组，腹腔注射E2(0.2 mg·kg~(-1)),每组16只。分别在饲养至21和28 d,每组随机选取8只，采集血液，测定血液中E2含量，处死后摘取乳腺，测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。取同侧部位乳腺制作组织学切片，免疫组化检测核增殖抗原蛋白(PCNA)的表达，Western blot法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和D3(cyclin D3)、ERβ蛋白表达水平。[结果]与对照组相比，DZ处理显著增加饲养21～28 d小鼠体重及采食量；增加21 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量，但未达到显著水平(P>0.05);显著增加28 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量(P<0.05);E2处理血液中E2含量均极显著增加。DZ处理对饲养21 d小鼠乳腺指数影响较小，显著增加饲养28 d小鼠乳腺指数(P<0.05);E2处理具有相同趋势(P<0.05)。HE染色结果显示，DZ和E2处理均极显著增加饲养21和28 d小鼠乳腺组织小叶内的导管数(P<0.01)和乳腺组织PCNA阳性细胞数(P<0.01)。Western blot结果显示，DZ及E2处理均可上调小鼠乳腺组织cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达，显著上调饲养28 d小鼠cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达(P<0.05)。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺发育，促进乳腺细胞增殖和分裂，这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。

为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV)基因表达调控元件构建了乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv),以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠。经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF)表达水平(2.0~8.1 g.L-1)明显高于单一酪蛋白启动子构件(0~12 mg.L-1),而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到r...

构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。

【背景】奶牛乳腺炎是一种常见、多发的奶牛疾病,不仅危害奶牛健康,同时也造成重大经济损失。传统治疗奶牛乳腺炎的药物主要是抗生素,极易造成抗生素耐药与滥用。开发替代抗生素的方法用于奶牛乳腺炎的防治具有现实意义。蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂,混合自身上颚腺、蜡腺的分泌物形成的具有良好抗炎、抗菌活性的天然产物,对防治奶牛乳腺炎具有潜在开发利用价值。尽管近年来国内外有一些有关蜂胶防治乳腺炎方面的报道,但蜂胶如何影响乳血屏障功能,目前国内外尚无相关研究报道。【目的】利用细菌脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的小鼠急性乳腺炎模型,评估中国蜂胶乙醇提取物对小鼠急性乳腺炎的保护作用及其对乳腺细胞紧密连接蛋白表达的影响,为后续利用蜂胶防治奶牛乳腺炎的深入研究奠定理论基础。【方法】采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UHPLC-QqQ-MS/MS)对中国蜂胶乙醇提取物中主要的多酚类化合物进行种类和含量测定。试验分为空白对照组、LPS模型组、中国蜂胶提取物试验组以及地塞米松阳性对照组。ICR雌性小鼠连续灌胃中国蜂胶提取物或阳性对照药物7d后,模型组、试验组和阳性对照组经第四、五对乳头管注射1 mg·kg~(-1)体重LPS,建立小鼠急性乳腺炎模型,24 h后处死,收集乳腺组织样本。以苏木精-伊红(H.E)染色法、天狼星红染色法评估小鼠乳腺组织病理变化;利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定炎症因子释放量;利用荧光定量PCR测定小鼠乳腺组织中紧密连接蛋白(Occludin、Cluadin-1、ZO-1) mRNA的表达情况;最后利用免疫组化技术研究小鼠乳腺紧密连接蛋白(Occludin和ZO-1)表达和分布情况,利用以上指标综合评判中国蜂胶乙醇提取物的抗乳腺炎活性及其对乳腺紧密连接蛋白的影响。【结果】基于UHPLC-QqQ-MS/MS,建立了中国蜂胶乙醇提取物中主要的17种多酚类化合物的精确定量方法,检测结果表明含量最高的5种化合物及其含量分别为:高良姜素(12.88±0.57μg·mg~(-1))、短叶松素3-乙酸酯(12.93±0.59μg·mg~(-1))、松属素(8.56±0.27μg·mg~(-1))和短叶松素(8.52±0.25μg·mg~(-1))。动物试验结果表明,灌胃中国蜂胶提取物能够显著缓解LPS注射导致的乳腺组织中炎性细胞浸润、缓解乳腺腺泡结构损伤;同LPS组相比,中国蜂胶提取物灌胃处理可有效抑制LPS导致的小鼠乳腺组织中炎症因子(IL-1β,IL-6和IL-10)的释放,并可提高小鼠乳腺中紧密连接蛋白的mRNA表达,缓解LPS注射所导致的乳腺上皮细胞紧密连接的破坏。【结论】中国蜂胶提取物对脂多糖诱导小鼠乳腺炎具有良好的预防效果,并可有效促进乳腺紧密连接蛋白的表达,维持乳腺中紧密连接结构完整性,保护血乳屏障,但蜂胶对紧密连接影响调控的分子机理还需进一步深入研究。

　应用自奶牛乳房炎检测为阳性的牛乳汁中分离的4种优势G+菌,分别与葡聚糖、油佐剂和FIA3种佐剂制成细菌裂解苗免疫家兔。于免疫后第7天开始,每隔7d采集心脏血,分离血清,以试管凝集试验检测血清中抗体效价,以此评价所分离细菌的免疫原性和所用佐剂的免疫促进作用,筛选适宜的佐剂。结果显示,所分离的优势G+菌刺激家兔机体后可产生高效价的抗体,免疫后第7天,抗体效价开始明显上升,第28天左右达到峰值,并一直持续到试验结束(63d)。比较3种佐剂的免疫促进效果,以FIA效果最好,但3种疫苗间的免疫效果差异不显著,而与对照组相比,差异均达极显著(P<0.01)。

【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲...

[目的]广谱抗菌剂三氯卡班(TCC)在各种环境介质和生物体中被频繁检出。为了研究TCC对动物的危害,观察了TCC对正常小鼠乳腺上皮细胞(Ep H4-Ev)的急慢性损伤作用,评价其对乳腺上皮细胞的诱癌作用,为防止TCC在动物用品中的滥用提供理论依据。[方法]采用MTT法确定TCC的最佳工作浓度后,作用于Ep H4-Ev细胞,以48 h为1个药物作用循环,分别作用3和6个循环(命名为T3和T6细胞)后,使用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,Western blot法测定细胞内磷

[目的]采用大豆黄酮（DZ）作用于青春期雌性小鼠，探讨其通过上调雌二醇（E2）水平和ERβ受体表达对青春期小鼠乳腺发育的影响，为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠，随机分为：1）对照组：腹腔注射无菌的PBS；2）DZ处理组：腹腔注射DZ（100mg/kg体重d）；3）阳性对照组：腹腔注射E2（0.2mg/kg体重 d），每组16只。分别在饲养至第3周和4周每组随机选取8只，采集血液并测定血液中E2含量，处死后摘取乳腺，称重测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。并取同侧部位乳腺制作组织学切片，免疫组化检测PCNA蛋白的表达，Western blotting法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1（cyclinD1）和D3（cyclinD3）、ERβ蛋白表达水平。[结果]结果表明：1）与对照组相比，DZ处理可显著增加饲养至第3周和第4周小鼠体重及采食量；增加第3周小鼠血液和乳腺组织中E2含量，但未达到显著水平（P>0.05）；显著增加第4周小鼠血液和乳腺组织中E2含量（P<0.05）；E2处理血液中E2含量均极显著增加；2）DZ处理对饲养至第3周小鼠乳腺指数影响较小，可显著增加饲养至第4周小鼠乳腺指数（P<0.05）；E2处理具有相同趋势（P<0.05）；3）HE染色结果显示，DZ和E2处理均可极显著增加饲养至第3和4周小鼠乳腺组织小叶内导管的数量（P<0.01）和乳腺组织PCNA阳性细胞数量（P<0.05）。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺的发育，促进乳腺细胞的增殖和分裂，这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。