通过大量的接种实验,分析了影响病毒接种效率的各种因素,经ELISA和RT PCR方法进行检测,确立了较为稳定有效的小麦黄花叶病毒机械传毒体系。采用新鲜病叶或用氯化钙干燥保存的病叶作为接种毒源,在0 2mol·L-1磷酸缓冲液中研磨后,对低温下(11～13℃)培养的小麦幼苗(1～2叶龄)进行叶面接种,并将接种后的小麦低温培养可获得较高的接种效率(12 57%～13 43%)。对毒源类型、小麦苗龄和接种部位等其他可能影响接种效率的因素进行了测定。

采用大豆病、健株正反交和病、健株自交的方法，以间接ＥＬＩＳＡ检测其后代种胚的带毒率。试验结果表明：♀（Ｓ）×（Ｓ）、♀（Ｓ）×（Ｈ）两组合子代的种胚带毒率较高，在结荚初期均超过６０％；♀（Ｈ）×（Ｓ）子代种胚带毒率较低，仅２５％左右；在健株自交组合中未检测到病毒。说明胚珠在发育早期受到病毒的侵染可能是种子带毒的主要因素，而带毒的花粉使种胚受到病毒侵染的作用较小。对大豆花前期病、健株子房组织进行免疫胶体金扫描及超薄切片观察的结果也证实，胚珠在受粉之前就已受到大豆花叶病毒的侵染

为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)在室内条件下复合侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana)的发病流行因素，以接种磷酸缓冲盐溶液(PBS)的本氏烟为对照，通过对AMV和WCMV单独接种侵染、复合侵染的不同接种浓度、不同温度和相对湿度(RH)对本氏烟发病的影响及本氏烟中两种病毒含量变化进行了研究。结果表明最适合本氏烟发病的AMV和WCMV单独接种浓度分别为20%(AMV:PBS=1:4)和50%(WCMV:PBS=1:1)，两种病毒复合侵染接种的浓度为75%和25%(AMV:WCMV=3:1)；最适宜发病的温度为25℃、RH为60%，在此条件下，AMV和WCMV复合接种侵染本氏烟的平均病情指数为80.12，比单独接种AMV、WCMV的病情指数分别提高了22.36%、45.28%，其病毒含量是两种病毒单独接种本氏烟中的2.11和1.60倍。综上可见，当温度为25℃、RH为60%以及AMV和WCMV复合侵染接种浓度为75%和25%时，本氏烟发病最严重。

通过RT PCR,获得了小麦黄花叶病毒罗田分离物28kD蛋白基因的cDNA克隆pUW28 10。序列分析结果表明,小麦黄花叶病毒不同分离物的28kD蛋白基因的核苷酸序列存在一定的差异:湖北罗田和河南潢川分离物在第326,327和336位较四川雅安、江苏扬州及日本分离物缺少3个核苷酸(nt),前两者核苷酸长度为762nt,后三者为765nt;不同分离物核苷酸序列同源性从92 1%到96 9%,相应的氨基酸序列同源性从89 8%到97 3%。

【目的】激发子可以诱导寄主植物的系统获得抗病性，具有有效性、持久性和广谱性的特点。研究旨在明确新型激发子寡糖·链蛋白（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｎｓ·ｐｌａｎｔ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）对小麦黄花叶病毒（Ｗｈｅａｔ ｙｅｌｌｏＷ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，Ｗｙｍｖ）的免疫诱抗作用，为该激发子的研究和大面积推广应用提供技术支撑。【方法】选用小麦黄花叶病感病品种‘矮抗５８’，在室内将消毒的小麦种子播种于自感病田带回的病土中，在（２７±２）℃下培养。５叶期叶面喷施稀释１ ０００倍的６％寡糖·链蛋白。喷施７ ｄ后，将麦苗置于（１２±１）℃培养箱中接种培养。３０ ｄ后取出麦苗，分别测量小麦株．．．

采集河南省驻马店市13个不同田块小麦样品,利用RT-PCR、ELISA和Western Blotting检测技术进行检测,结果表明,该地有小麦黄花叶病毒的存在与分布。对检测为阳性的一个分离物全序列进行cDNA克隆和测序,与已报道WYMV河南潢川、江苏扬州、四川雅安和日本分离物的全序列进行比对,RNA1核苷酸一致性为97.1%~98.4%;RNA2为95.1%~98.4%;氨基酸一致性分别为94.8%~97.8%和94.2%~98.2%。利用软件MEGA4.1对上述五个RNA1和RNA2的全序列分别进行进化树分析,结果表明,驻马店分离物与潢川亲缘关系最近,而与四川雅安亲缘关系最远。

为确定从江苏省农科院蔬菜所温室大棚所采集到的表现花叶、皱缩、明脉症状的绿豆植株是由何种病毒引起的,采取了透射电子显微镜观察、RT-PCR、序列测序以及酶联免疫吸附法(ELISA)等方法进行鉴定。结果表明,在透射电镜下可观察到风轮状、束状病毒内含体,与Potyvirus属病毒粒子形态一致;对所提取的病样总RNA使用Potyvirus通用引物进行RT-PCR扩增,得到由1 082个核苷酸组成的序列,包含编码228个氨基酸的完整cp基因,产物通过NCBI比对,发现和已报道的菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virus,BCMV)HB分离物同源性高达95%,初步判定该病原为菜豆普...

【目的】鉴定福建果园西番莲上的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,Te MV),并建立用于该病毒特异性检测的分子快速检测方法,为该病毒的防治提供参考依据。【方法】采用血清学检测、电镜观察、通用简并引物RT-PCR、特异性引物RT-PCR对福建西番莲样品进行病毒检测,并对阳性样品的PCR产物进行克隆、测序;根据已报道的夜来香花叶病毒基因序列和本研究的序列测定结果,设计一对用于扩增Te MV外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长的特异性引物,通过反应条件优化,建立该病毒的特异

【背景】黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是我国重要的检疫性植物病毒，对蔬菜和瓜类产业造成严重的经济损失。ERF转录因子可以调控植物生物和非生物胁迫，参与植物对多种病害的防御作用。前期研究显示CGMMV侵染后可以显著下调寄主转录因子Nb ERF RAP2-1的表达。【目的】明确ERF转录因子家族成员在CGMMV侵染过程中的作用，为CGMMV病害防治提供理论依据。【方法】运用MEGA7.0构建系统进化树，对基于Nb ERF RAP2-1蛋白的氨基酸序列进行系统进化分析；构建Nb ERF RAP2-1的荧光表达载体，并观察其亚细胞定位；利用q RT-PCR技术分析Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染不同时期的表达量；通过烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默（VIGS）和瞬时过表达Nb ERF RAP2-1分析其在CGMMV侵染过程中的作用。【结果】系统进化树分析表明，Nb ERF RAP2-1与多种烟草的ERF转录因子同源性极高，与拟南芥的ERF转录因子亲缘关系较远；亚细胞定位结果显示Nb ERF RAP2-1定位于细胞核，作为转录因子行驶功能；CGMMV侵染对本氏烟内源基因Nb ERF RAP2-1的转录水平影响结果显示，在CGMMV侵染6、9、12 d时Nb ERF RAP2-1的表达量无明显变化，在CGMMV侵染15和18 d时Nb ERF RAP2-1表达量显著下调；TRV介导的VIGS可以将植物内源基因Nb ERF RAP2-1有效沉默，在沉默的植株系统叶上接种CGMMV,8 d对照植株系统叶出现斑驳、卷曲症状而Nb ERF RAP2-1沉默植株无症状，同时CGMMV RNA水平和蛋白水平检测结果也表明TRV:Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV的积累；同样，分别在本氏烟叶片瞬时过表达Nb ERF RAP2-1 24、48和72 h时检测CGMMV RNA水平和蛋白水平表达量，结果显示在病毒侵染早期，即复制阶段就抑制CGMMV的表达。【结论】Nb ERF RAP2-1可以有效抑制CGMMV侵染初期病毒复制，即病毒RNA复制阶段；随着CGMMV不断侵染，在CGMMV细胞间运动和系统运动时期，CGMMV识别防御相关基因Nb ERF RAP2-1并抑制该基因的转录；当Nb ERF RAP2-1缺失后可能抑制了下游蛋白的转录或表达，从而抑制病毒侵染后期的积累。由此可见，Nb ERF RAP2-1在CGMMV侵染过程中发挥了重要作用。

烟草花叶病毒在烟草种植上为害严重。在烟草育苗前期,对育苗基质、水源、漂盘残根、育苗棚周围植物及烟草种植区病株残体、土壤用烟草花叶病毒TAS-ELISA试剂盒检测。结果表明,在水源、漂盘残根、烟草种植区病株残体、土壤中均可检测到烟草花叶病毒,在育苗棚周边8个科的14种植物中检测到烟草花叶病毒,此类毒源可能成为苗期烟草花叶病发生蔓延的初侵染源。

【目的】鉴定引起辣椒产生褪绿黄化症状的病原物,构建侵染性克隆。【方法】大田辣椒样品通过ELISA检测,结合病毒外壳蛋白SDS-PAGE及病毒RNA分析,初步确定辣椒中病原物为黄瓜花叶病毒(CMV)Phy株系。以辣椒病毒粒子RNA为模板,采用含T7启动子的不同正向引物通过RT-PCR扩增CMV-Phy全长基因组RNA1、RNA2和RNA3。PCR产物经过双酶切后连接到pUC118载体,并分别比较5种(DH5α、HB101、JM109、LE392和NM522)感受态细胞的转化效率。体外转录CMV-Phy的基因组cDNA克隆(pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3)成RNA分子(P1P2P3),分...

【目的】研究BaMV福州分离物BaMV-TMS1及其携带的卫星RNA(satBaMV)分离物satBaMV-TMS1的全基因组特征,明确其系统发育关系;对BaMV进行c DNA侵染性克隆构建方法的改进,为其反向遗传学体系的快速建立提供简便的方法。【方法】根据已报道的BaMV和satBaMV全长序列保守区分别设计2对和1对扩增引物,从感染BaMV的竹叶中扩增、克隆获得BaMV-TMS1和satBaMV-TMS1的全长序列,并进行序列特征分析和系统发育树构建。采用多片段无缝克隆方法将扩增得到的2个病毒DNA片

以建兰花叶病毒(CyMV)南京分离物侵染本氏烟的叶片为材料,利用RT-PCR扩增CyMV基因组cDNA,并进行测序,得到全长序列(GenBank登录号:JQ860108),然后插入到pCass4-Rz载体中,构建CyMV侵染性克隆载体。序列分析表明,与已报道的石斛兰、蝴蝶兰、香草兰分离物序列同源性高达96%以上,并且具有相同的基因组结构;不同国家和地区的序列进化树分析表明,其与我国台湾地区的病毒分离物亲缘关系最近。侵染性克隆通过农杆菌侵染接种本氏烟,与CyMV分离物具有相同的症状,并可利用RT-PCR检测到其外壳蛋白基因,表明成功构建了具有生物活性的CyMV侵染性克隆。

感染大豆花叶病毒（ＳＭＶ）的大豆在发病初期其叶片除还原糖以外，其它各类碳水化合物含量均下降，包括总糖，总可溶性糖、不溶性糖、非还原性糖、但总可溶性蛋白、总游离氨基酸均明显增加．这说明ＳＭＶ侵染明显地抑制了寄主碳水化合物代谢，但促进了寄主氮化合物代谢．因此ＳＭＶ侵染大豆后，在消耗碳水化合物的基础上，优先合成各类蛋白质、这有利于ＳＭＶ的复制．另外在感染ＳＭＶ的大豆中，还发现总氮量增加，这说明ＳＭＶ浸染刺激了寄主对氮的吸收并直接合成各种氨基酸，而有利于病毒的增殖．另一方面由于病毒的增殖不破坏寄主本身的蛋白质，所以氮吸收的增加对寄主起到一种保护作用。

根据已报道的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白(CP)基因序列合成1对引物,对侵染辣椒的黄瓜花叶病毒湖北分离物的病毒外壳蛋白基因进行基因扩增和序列分析。结果表明:湖北省内不同辣椒主产区采集到的样品CP基因之间的核苷酸同源率高达98.2%~99.2%,与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为92.1%~96.5%和72.1%~78.1%,并且和亚组Ⅰ中的IB系列株系同源率更高。由此确认这4个CMV分离物属于亚组Ⅰ中的ⅠB成员。