- 年份
- 2024(3452)
- 2023(4939)
- 2022(4453)
- 2021(4030)
- 2020(3697)
- 2019(8894)
- 2018(8896)
- 2017(17142)
- 2016(9783)
- 2015(11425)
- 2014(11757)
- 2013(11922)
- 2012(11398)
- 2011(10308)
- 2010(10467)
- 2009(9790)
- 2008(10083)
- 2007(9348)
- 2006(7873)
- 2005(6988)
- 学科
- 济(42260)
- 经济(42217)
- 管理(25430)
- 业(25427)
- 方法(22700)
- 数学(20417)
- 数学方法(20247)
- 企(19594)
- 企业(19594)
- 农(12076)
- 财(11087)
- 学(10475)
- 中国(9668)
- 地方(8370)
- 贸(8335)
- 贸易(8333)
- 易(8077)
- 农业(7882)
- 业经(7468)
- 制(7338)
- 务(6939)
- 财务(6926)
- 财务管理(6903)
- 和(6777)
- 企业财务(6502)
- 银(6159)
- 银行(6132)
- 环境(6017)
- 融(5789)
- 金融(5787)
- 机构
- 大学(149841)
- 学院(148725)
- 济(59198)
- 经济(57889)
- 管理(53882)
- 研究(51954)
- 理学(46379)
- 理学院(45797)
- 管理学(44875)
- 管理学院(44606)
- 中国(38626)
- 科学(35289)
- 农(34463)
- 京(31999)
- 所(28663)
- 农业(27788)
- 业大(27156)
- 财(26781)
- 研究所(26287)
- 中心(24491)
- 江(23094)
- 财经(21461)
- 北京(19957)
- 经(19306)
- 范(19209)
- 师范(18946)
- 经济学(18449)
- 农业大学(18090)
- 州(18084)
- 院(17649)
- 基金
- 项目(98040)
- 科学(75233)
- 基金(70047)
- 研究(67454)
- 家(62664)
- 国家(62168)
- 科学基金(51171)
- 社会(40381)
- 省(39326)
- 社会科(38169)
- 社会科学(38149)
- 基金项目(37457)
- 自然(34819)
- 自然科(33930)
- 自然科学(33916)
- 划(33812)
- 自然科学基金(33294)
- 教育(31300)
- 资助(29061)
- 编号(27665)
- 成果(22872)
- 重点(22726)
- 部(21673)
- 发(21505)
- 计划(20345)
- 创(19906)
- 科研(19739)
- 课题(19236)
- 创新(18739)
- 大学(18131)
共检索到214257条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 华北农学报
[作者]
于月华 耿洪伟 陈全家 高文伟 王莉萍 曲延英
为了进一步研究TaSIM基因的功能,以pJET1.2-TaSIM质粒为模板,PCR扩增TaSIM基因的cDNA编码区,构建了该基因的原核表达载体pET-28a-TaSIM,经菌液PCR和测序鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的TaSIM蛋白,大小约为33 kDa。SDS-PAGE电泳分析表明,最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG在37℃下诱导2 h。
关键词：
小麦 TaSIM 原核表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
丁长欢 孙昭华 李小娟 肖凯
在富集低磷胁迫特异表达基因的小麦根系cDNA差减杂交文库中,鉴定了1个小麦WRKY型转录因子基因(TaWRKY46)。依据该基因的cDNA序列,在石新828中克隆了该基因。TaWRKY46的cDNA长度为872 bp,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸残基,氨基酸组成上含有保守的WRKY基序和C2H2基序。系统进化分析表明,TaWRKY46与大麦WRKY34可能来自相同的祖先。与对照供磷水平(2 mmol/L Pi)相比,低磷处理(20μmol/L Pi)使根系中TaWRKY46的转录本数量明显增多,表明TaWRK46对低磷胁迫逆境产生了明显应答。此外,TaWRKY46对氮、钾、锌和...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张鹏钰 刘毓侠 曹丽茹 袁珍 王国瑞 王同朝 尹钧 卫丽
为进一步挖掘小麦逆境胁迫响应基因在植物非生物逆境胁迫应答中的作用,探究小麦逆境胁迫响应机制,从前期转录组结果中筛选出1个编码MYB蛋白的基因,暂命名为Tamyb59,通过PCR技术扩增Tamyb59的全长;利用NCBI和DNAMAN软件进行基因序列比对和保守结构域的分析;利用Expasy和TMHMM等在线软件进行氨基酸组成、亲水系数分析;采用MEGA 6. 0软件构建系统进化树;构建pMDC83-GFP融合表达载体,进行基因表达的亚细胞定位分析。采用qRT-PCR分析了基因在不同非生物胁迫处理过程中不同组织的表达特性,并利用SAS数据处理软件进行差异显著性分析。结果表明:该基因含有典型的SANT保守结构域,CDS序列全长为522 bp,编码173个氨基酸,编码蛋白分子质量为19. 7 ku,理论等电点为7. 61。基因系统进化分析结果表明,Tamyb59与山羊草、粳稻、玉米等9种植物MYB转录因子有52. 0%～85. 6%的同源性,其中与谷子的MYB蛋白同源性最高。亚细胞定位结果显示,Tamyb59基因编码蛋白定位在细胞核。利用qRT-PCR分析了基因在不同非生物胁迫处理过程中不同组织的表达特性,组织表达特异性分析显示,Tamyb59基因在小麦根中的表达量较高,茎、叶和幼穗中表达量较低; PEG和盐胁迫处理过程中,Tamyb59基因的表达均呈现先上升后下降的趋势,说明Tamyb59基因对不同非生物胁迫有不同的响应。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈瑞佶 高翔 陈其皎 董剑 赵万春 李艳亮 王明霞 李敏 庞红喜 李哲清 刘俊
【目的】克隆小麦品种陕253中的新型avenin-like(类燕麦储藏蛋白),并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】利用PCR方法从小麦品种陕253中克隆新型avenin-like,将克隆的avenin-like亚克隆至表达载体,经酶切及测序鉴定后,转化宿主菌Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,并利用Western blot进行检测。【结果】从小麦品种陕253克隆获得3个新avenin-like,GenBank登录号分别为GQ903577、GQ903578和GQ903579。序列分析表明,其中GQ90...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王延玲 张艳敏 冯守千 田长平 王海波 刘遵春 宋杨 陈学森
【目的】克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]MYB10转录因子基因,进行序列分析和原核表达研究,为进一步探索红色发育机理及选育新的栽培红肉苹果奠定理论基础。【方法】根据MdMYB10基因编码区设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,通过RT-PCR获得1个约700bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该基因片段连接到原核表达载体pET-30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。【结果】测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长包含...
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱满喜 张玉荣 杨雅舒 杨小兰 王创云 邓妍 赵丽 张丽光 秦丽霞 杨利艳
NLP转录因子是植物特有的一类转录因子家族,在植物氮素吸收、转运和同化过程中发挥重要作用。为了解NLP基因在藜麦中的全基因组特征和表达模式,利用生物信息学方法在藜麦基因组中鉴定出9个藜麦NLP基因家族成员,并对其理化性质、染色体定位、基因结构、蛋白保守结构域、保守基序、系统进化以及在不同氮素水平处理下的表达模式进行了分析。结果表明,藜麦9个NLP基因分布于7条染色体上;每个成员含有4～5个外显子、3～4个内含子以及上游非翻译区;启动子中包含有大量激素和胁迫响应的顺式作用元件,其中,在CqNLP3和CqNLP4的启动子区域均预测到1个氮素响应元件GCN4。藜麦NLP蛋白长718～952个氨基酸,分子质量为80.48～104.86 ku,等电点5.31～6.50;每个成员都含有RWP-RK和PB1共2个保守结构域,其在蛋白中的位置具有很高的相似性,保守基序的分析进一步证实了这2个结构域的保守性。系统进化分析表明,9个藜麦NLP家族成员可分为ClassⅠ,ClassⅡ和ClassⅢ共3组,其在进化关系上与拟南芥的亲缘关系更近。在缺氮条件下,CqNLP2、CqNLP3、CqNLP5和CqNLP8表达受到抑制,低氮下则诱导表达;低氮处理后期,CqNLP9的表达量急剧增加。荧光定量PCR表达趋势与转录组数据一致。研究结果可为后续CqNLPs基因克隆和氮素胁迫分析提供参考依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴丹 董剑 要燕杰 赵万春 高翔
【目的】对面包小麦(Triticum aestivum L.)中国春NAM转录因子Gpc-1(Ta NAM-A1、Ta NAM-B1、Ta NAM-D1)和Gpc-2(Ta NAM-B2、Ta NAM-D2)灌浆期的表达模式进行全面系统的分析,为深入了解其协同调控籽粒发育时期组织衰老和矿物元素转运的方式及各基因间相互作用提供参考。【方法】从中国春中克隆Gpc-1和Gpc-2的全长c DNA编码序列并进行序列比对分析。采用荧光定量PCR(q RT-PCR)定量分析各基因在不同组织中的表达特性。以多个经评估的稳定基因作为内参,并采用Pfaffl法对Gpc-1和Gpc-2的相对表达量进行计算。针对G...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏慧 董剑 陈其皎 高翔 王蕾 李晓燕 赵万春 吴丹
【目的】研究普通小麦不同品种的类燕麦贮藏蛋白(avenin-like)基因序列的多样性及其表达产物的加工品质效应。【方法】利用特异性引物对来源于不同地区的12个小麦品种(系)进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析;构建JN542444原核表达载体后转入表达菌株Escherichia coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,并通过His-Trap HP柱纯化蛋白后进行微量掺粉试验。【结果】克隆获得22条avenin-like新基因序列(GenBank登录号JN542443—JN542464),长度均为855 bp,且均具有可编码284个氨基酸残基的完整的开放阅读...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴秀梅 徐黎明 赵景壮 刘淼 曹永生 卢彤岩 尹家胜
在鱼类胚胎发育过程中,胰岛素样生长因子-II(insulin-like growth factors-II,IGF-II)起着关键的作用。本研究根据Gen Bank收录的鲑鳟鱼IGF-II基因序列设计引物,以哲罗鱼(Hucho taimen)肝RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出哲罗鱼IGF-II基因开放阅读框。将目的基因IGF-II与原核表达载体p SUMO连接构建出重组表达载体p SUMO-IGF。将该重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,约在40 k D处含有清晰的条带,与预期结果相符;目的蛋白以包涵体形式存在。对包涵体进行...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
董娜 张增艳 辛志勇
【目的】研究一个病原诱导的小麦ERF转录因子基因在对纹枯病菌、赤霉病菌防御反应中的作用。【方法】应用生物信息学、RT-PCR、RACE方法,从赤霉病菌诱导的小麦中,分离ERF转录因子基因的全长cDNA序列;利用半定量RT-PCR方法,分析该基因对小麦纹枯病菌、赤霉病菌及MeJA、ET和SA处理的应答表达情况。【结果】从赤霉病菌诱导的抗赤霉病小麦品种苏麦3号cDNA中,分离出1个编码ERF转录因子基因的全长cDNA序列。该基因暂被命名为TaERF1b,编码由280个氨基酸组成的蛋白质TaERF1b。TaERF1b具有保守的ERF/AP2结构域,但TaERF1b蛋白全长氨基酸序列与已克隆的ERF蛋...
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴洪波 刘刚 张路路 王冬梅
提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,将融合蛋白纯化后制备其兔抗血清,然后利用Western Blotting技术对兔抗血清进行检测,鉴定了该抗血清的结合特异性。ATG8抗体的成功制备,为小麦中ATG8基因和自噬功能的研究奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭子平 翟清华 曾令锋 邓西平 杨淑慎
为了研究催化活性半胱氨酸Ｃｙｓ１５４、Ｃｙｓ１５８残基对小麦细胞质甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｔａ ＧａＰＣ）蛋白酶活性的影响，利用重叠延伸ＰＣＲ法分别将这２个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸，并分别连入Ｐ ＥＴ２８ａ（＋）原核表达载体。在２５℃条件下，Ｔａ ＧａＰＣ及其定点基因Ｔａ Ｃｙｓ１５４ｓ／Ｔａ Ｃｙｓ１５８ｓ经０．２５ ｍｍｏｌ／ｌ ＩＰＴＧ诱导后高效表达，ｓＤｓ－ＰａＧＥ电泳检测结果显示，目标重组蛋白均为可溶性且大小约为４０ ｋ Ｄａ，与预测结果一致。在此基础上，经超声波破菌及镍柱纯化获得３种纯化重组蛋白。这为后续Ｔａ ＧａＰＣ及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
于淼 方健 李玲玉 潘启华 薛亭 邓羽 陈凯 陈天圣
为进一步分析鱼类干细胞多能性转录因子Oct4的功能,将团头鲂(Megalobrama amblycephala)Oct4进行原核表达并制备了兔抗Oct4多克隆抗体。采用RT-PCR方法从团头鲂卵巢中扩增Oct4基因的部分编码片段,插入载体pET32a中构建重组原核表达载体pET32a-MaOct4;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导、Ni(2+)亲和柱层析纯化获得分子量约49 ku的可溶性重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备抗体,通过ELISA法测定其效价,We
[期刊] 水产学报
[作者]
于淼 方健 李玲玉 薛亭 陈天圣
为深入研究鱼类干细胞多能性转录因子Nanog的功能,本实验进行了团头鲂Nanog基因的原核表达和多克隆抗体的制备。首先,从团头鲂卵巢克隆出Nanog基因的编码区,将其连接到p ET32a载体上构建原核表达载体。接着将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得预期大小的Nanog重组蛋白,并获得大量蛋白以制备抗体。最后通过ELISA检测抗体的效价和采用Western blot技术检测Nanog抗体的特异性。结果显示,在37°C,0.5 mm
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
万超 邓婷榕 胡莉 伍炳华 袁媛
茉莉花JsMYB108转录因子可以调控茉莉萜类合成酶基因JsTPS2的表达，是香气合成相关的转录因子.本试验将茉莉JsMYB108转录因子的编码序列利用酶切连接方法构建到原核表达载体pGEX-4T-1上，转化大肠杆菌BL21(DE3)株系，设定了4个IPTG诱导浓度(0.1、0.2、0.5、1.0 mmol·L~(-1))和3个诱导温度(20、28、37℃)用于筛选合适的蛋白诱导条件，在此基础上对诱导出来的蛋白进行分离纯化和检测.结果表明：4个IPTG浓度均可成功诱导出分子质量约为59 ku的融合蛋白，不同IPTG浓度间诱导表达的蛋白量无显著差异；20、28、37℃均可诱导出融合蛋白，但相比28、37℃的诱导温度，20℃过夜诱导表达下的可溶性蛋白含量最高，更有利于重组蛋白的纯化.后续用0.1 mmol·L~(-1) IPTG、20℃作为大量诱导JsMYB108融合蛋白的条件，利用GST亲和树脂分离纯化了融合蛋白，并通过Western blotting对纯化的蛋白进行了验证.研究结果可为后期筛选JsMYB108互作蛋白及其蛋白功能的研究提供参考.
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
