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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
韩招久 韩召军 李凤良 李忠英 陈之浩
利用简并引物 ,采用PCR等分子生物学技术 ,对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体 (nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆 ,并对序列进行分析。测序结果显示 ,扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的 3种亚型 (分别命名为Pxαl、Pxα2、Pxα3) ,都具有典型的α亚基的结构 :2个相邻的半胱氨酸 ,由 2个半胱氨酸之间二硫键形成包含 15个氨基酸的胞外环 ,与烟碱和α银环蛇毒素结合有关的氨基酸残基。克隆的基因片段在氨基酸序列上和其他昆虫nAChRα亚基基因之间有高达 6 5 %～ 99%的同源性 ,表明克隆的cDNA片段是小菜蛾nAChRα亚基基因的部分序列。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚明德 杨亦桦 武淑文 吴益东
利用RT-PCR和RACE技术,对烟粉虱烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的1个基因进行了克隆和序列分析。获得的烟粉虱nAChRα亚基基因的全长cDNA序列含有2 090 bp,其开放阅读框编码564个氨基酸。根据该基因编码的氨基酸序列与其他昆虫乙酰胆碱受体α亚基氨基酸序列之间的相似性,将该基因命名为Btα4(GenBank注册号为EF590120)。Btα4编码的α亚基含有2个结构域:N端的胞外结构域和C端的跨膜结构域,N端的胞外结构域含有2个相邻的半胱氨酸(α亚基特征序列)、15个氨基酸构成的半胱氨酸环和乙酰胆碱结合区。研究结果对于揭示烟粉虱潜在的对新烟碱类杀虫剂靶标抗性的分子机制具有...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
解林杰 李莎 姜卫华
[目的]烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)在昆虫中枢神经系统兴奋性神经递质突触传导过程中起重要作用,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)是重要的检疫性马铃薯食叶害虫。根据报道已鉴定得到该虫10个nAChR亚基,本研究的目的是进一步完善该虫nAChR亚基的组成和其表达模式。[方法]依据马铃薯甲虫基因组数据,利用PCR和RACE技术对马铃薯甲虫的nAChR亚基基因进行克隆,通过相似性和系统发育树分析验证该基因的亲缘关系。利用实时定量PCR技术检测该基因在
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李晨歌 琚阳 韩召军 姜卫华
通过克隆马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)基因的全长序列并分析其时空表达量差异,为马铃薯甲虫nAChR亚基功能以及对新烟碱类药剂靶标抗性机制的研究提供重要基础。根据马铃薯甲虫转录组数据,采用RACE克隆技术获得3个马铃薯甲虫nAChRα基因的cDNA全长序列;通过相似性和进化树分析验证这3个基因的亲缘关系;利用实时荧光定量PCR技术分析这些基因在马铃薯甲虫不同发育阶段和成虫不同部位的表达情况。本试验验证并获得3条nAChRα亚基片段序列,经BLAST比对得出其分别属于nAChRα4、nAChRα7和nAChRα9亚基,进一步克隆得到...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
熊玉芬 王暄 梁中伟 李红梅
利用RT-PCR和RACE技术克隆了一个松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)乙酰胆碱酯酶基因Bx-ace-2,该基因cDNA全长为2010bp,有1878bp的开放阅读框(ORF),推测其编码的蛋白有625个氨基酸;Bx-ace-2基因组克隆长为2192bp,含有7个内含子。氨基酸序列比对和同源性分析显示:松材线虫Bx-ace-2编码的乙酰胆碱酯酶与已报道的秀丽小杆线虫ACE-1、ACE-3和ACE-4型乙酰胆碱酯酶的相似性为28%～31%,而与秀丽小杆线虫ACE-2及甘薯茎线虫、南方根结线虫、大豆胞囊线虫、马铃薯白线虫和胎生网尾线虫的ACE-2型乙酰胆碱酯酶的氨基...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
丁中 彭德良 高必达 何琪
利用反转录聚合酶链式反应,结合快速扩增cDNA末端(RACE)技术,克隆了甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因cDNA Dd-ace-1.该cDNA序列5′端存在反式剪接引导序列SL1,全长2196bp,包含1个1908bp的开放阅读框(GenBank登录号EF583059);在推导出的635个氨基酸残基的前体蛋白中,N端的前24个氨基酸残基为信号肽,随后的611个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的相对分子质量为70144.12.在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基(Ser223、Glu360和His483)、胆碱结合位点Trp(106)以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守;...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈茂华 韩召军
采用RT-PCR技术,设计简并上、下游引物,从禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi(L innaeus))和麦长管蚜(Sito-bion avenae(Fabric ius))中均克隆出2种不同乙酰胆碱酯酶的cDNA片段,分别命名为Rp.ace1、Rp.ace2和Sa.ace1、Sa.ace2。同源性分析结果表明,Rp.ace1、Sa.ace1与棉蚜(Aphis gossypii)和桃蚜(Myzus persicae)的Ⅰ型乙酰胆碱酯酶(Ace1)基因序列具有96%以上的相似性,Rp.ace2和Sa.ace2与棉蚜和桃蚜的Ⅱ型乙酰胆碱酯酶(Ace2)以及从麦二叉蚜(Schizaph...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王哲 谭晓风 龙洪旭
以葡萄桐的近成熟种子为材料，根据油桐转录组测序结果设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆了油桐乙酰辅酶Ａ羧化酶ＢＣ亚基基因的全长Ｃ ＤＮ Ａ序列。该基因Ｃ ＤＮＡ序列全长１ ６０５ ＢＰ，编码５３４个氨基酸。推导出的ＢＣ亚基氨基酸序列蛋白的等电点Ｐ Ｉ为７．９８，相对分子量５８ ２６２．０ ＤＡ，稳定系数为３８．１３，生物信息学分析表明，此蛋白含有２个比较明显的跨膜区，是一个不稳定的非分泌蛋白。模体搜索结果表明在ＢＣ上具有ＡＴＰ结合位点。三级结构中有１６个α螺旋，３个部分形成一个内凹的结构。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王哲 谭晓风 龙洪旭
以葡萄桐的近成熟种子为材料,根据油桐转录组测序结果设计引物,采用RT-PCR技术克隆了油桐乙酰辅酶A羧化酶BC亚基基因的全长c DN A序列。该基因c DNA序列全长1 605 bp,编码534个氨基酸。推导出的BC亚基氨基酸序列蛋白的等电点p I为7.98,相对分子量58 262.0 Da,稳定系数为38.13,生物信息学分析表明,此蛋白含有2个比较明显的跨膜区,是一个不稳定的非分泌蛋白。模体搜索结果表明在BC上具有ATP结合位点。三级结构中有16个α螺旋,3个部分形成一个内凹的结构。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘虹伶 李凤良 金剑雪 刘雅琴 刘旭
本文报道小菜蛾抗溴氰菊酯、抗杀虫双品系的正、反杂交后代的羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶活性,并与其亲本及敏感品系的酶活力进行比较。结果表明:后代正反杂交各代羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶之间没有显著差异;抗溴氰菊酯亲本的乙酰胆碱酯酶的活性略低于正反杂交后代的活性,而羧酸酯酶的活性略高于各正反杂交后代的活性。
关键词：
小菜蛾 抗药性 羧酸酯酶 乙酰胆碱酯酶
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄磊 彭英传 韩召军
[目的]本研究旨在通过克隆大螟的乙酰胆碱酯酶基因ace,进行多态性分析,以便寻找抗药性相关的突变位点,为建立高通量药剂筛选方法和适宜的抗药性分子检测方法提供新途径。[方法]利用PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆大螟的ace全长序列,通过分子特征和构建系统发育树对其进行验证。通过序列比对,分析不同地理种群大螟ace基因的多态性,寻找经典抗药性突变位点,同时测定相应种群的三唑磷抗性,联合分析相关的抗药性突变位点。[结果]克隆获得了大螟2个ace基因的全长cDNA,分别将其命名为Sinace1和Sinace2(GenBank登录号分别为MK641586和MK641585)。它们均含有乙酰胆碱酯酶家族的保守结构特征,系统发育树分析表明它们和鳞翅目近缘种的ace基因亲缘关系最近。关键靶标基因Sinace1在4个地理种群的97条基因序列中共发现了比率不同的107种核苷酸多态性位点和21种氨基酸突变类型,但未发现经典抗药性位点的突变。生物测定结果表明:不同地理种群的大螟对三唑磷的敏感性相差较小(1～5倍),对比分析也没有发现种群之间突变比率与抗性水平一致的突变位点。[结论]大螟ace1基因尚未产生可测定的抗药性突变,但本研究率先克隆报道了大螟的2个ace基因全长序列,并揭示了大螟不同地理种群ace1基因的主要多态性位点。
关键词：
大螟 乙酰胆碱酯酶 基因克隆 多态性
[期刊] 华北农学报
[作者]
周琳
雷公藤生物碱是雷公藤Tripterygium wilfordii Hook中的主要杀虫活性物质。为进一步阐明雷公藤总生物碱的杀虫活性及杀虫作用机理提供线索和依据,研究采用载毒叶片法测定了雷公藤总生物碱对粘虫(Mythimna separata(Walker))三龄幼虫的胃毒毒力,观察了粘虫五龄幼虫的中毒症状,并测定了其对不同中毒阶段粘虫五龄幼虫头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性和乙酰胆碱(ACh)含量的影响。结果表明,雷公藤总生物碱对粘虫三龄幼虫48,72,96,120 h的胃毒LC50分别为306.39,216.12,157.18,129.92 mg/L;试虫中毒后行动迟缓,停止取食,继而软瘫...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
苏建 戴习林 刘红 刘伟利 高翔 刘洁 丁福江
提取罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)上海养殖群体活体鳃、肌肉、肝胰腺、血液和雄性腺5种组织的总RNA;应用RT-PCR技术,从鳃组织中克隆到Toll样受体(TLR)基因部分cDNA序列,并进行生物信息学分析。基因序列分析表明:所得罗氏沼虾TLR基因cDNA序列长1 875 bp,包含1 728 bp的开放阅读框,可编码575个氨基酸残基;该部分TLR是一个跨膜蛋白,存在胞外区LRR、LRR-CT、LRR-NT结构域及关键的胞内区TIR结构域,具备Toll样受体家族的典型结构特征;TIR结构域与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和日本囊对虾(Ma...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
叶旻玉 刘利平 戴习林 沈默忱 徐灿
对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)Toll样受体基因的cDNA片段进行了克隆。从凡纳滨对虾提取肌肉、鳃和肝胰腺中的总RNA,根据黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Toll样受体的TIR区设计引物,从鳃中逆转录扩增得到cDNA序列,进行测序。所得序列结果与其他物种的已知TIR及TLR氨基酸序列进行聚类分析建立系统进化树,并进行氨基酸序列同源性比较。结果表明所得序列与斑节对虾(Penaeus monodon)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、果蝇(Drosophila melanogaster)、意大利蜜蜂(Apis mellife...
关键词：
凡纳滨对虾 Toll样受体 基因克隆
[期刊] 中国农业科学
[作者]
修伟明 董双林 苗慧 穆兰芳
通过比较几种已发表夜蛾科昆虫的信息素结合蛋白(PBP)氨基酸序列,设计合成一对简并性引物,利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)雄虫触角扩增得到2个分别为275bp和281bp的cDNA片段SexigPBP1和SexigPBP2,其分别由92个氨基酸残基和94个氨基酸残基组成。通过在GenBank中进行序列的同源性比较,表明这2个序列与已知几种昆虫的PBP氨基酸序列具较高同源性。
关键词：
甜菜夜蛾 信息素结合蛋白基因 序列分析
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